高等教育质量标准体系构建的三重逻辑结构

“互联网+”时代正在形成的相互依存的世界秩序对高等教育提出了新的质量挑战,重构高等教育人才培养质量标准体系已经成为当前国际社会关注的重点问题。文章基于经验、理论和实践三条路径对高等教育质量标准体系逻辑构成的合理性依据进行理性分析,探索构建融学术—保证—问责“三位一体”的适应高等教育国际化发展需求的质量标准体系。因此,基于经验、理论和实践的三重逻辑论证,面向大众化和国际化,在“互联网+”背景下高等教育人才培养质量标准体系的应然结构框架至少应该包括学术标准、质量保证标准和质量信息标准三个维度。

模拟微重力条件下WB-F344细胞的三维培养

与传统的单层平面培养相比,细胞三维培养可更好地模拟生物体内细胞的生长状态和微环境。以Cytodex-3微载体为支持物,利用旋转式细胞培养系统(RCCS)模拟微重力条件,悬浮培养法构建大鼠WB-F344细胞微重力三维培养模型。并通过细胞计数、光学显微镜、透射电镜、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术等方法分析了细胞增殖、显微结构、粘附分子及钙粘蛋白(E-cadherin)表达情况。结果表明,模拟微重力三维培养条件下WB-F344细胞增殖块,呈紧密多层排列、可见丰富的微绒毛和线粒体、胞间有桥粒和紧密连接形成,细胞粘着力加强、表现出良好的三维生长特征;与静置三维培养相比,纤粘连蛋白(Fn)mRNA表达呈上调趋势,细胞内E-cadherin表达量增加,这可能是微重力效应下细胞粘附力增强的部分机制。该培养体系可能有利于细胞之间,细胞与胞外基质之间相互作用及其作用机制的研究。

人脐血造血干细胞体外扩增方法初探

目的建立人造血干细胞(HSC)体外大量扩增的最佳培养模型。方法采用模拟骨髓微环境的成骨细胞共培养法、条件培养基及模拟微重力效应三维培养等方法进行人脐带血来源HSC体外扩增。结果在用含15%的条件培养基与成骨细胞共培养条件下,HSC的扩增倍数最高,第7天和第14天扩增倍数分别为6.46和14.82倍。在此条件下进行集落形成实验对扩增后造血干细胞多能性的功能检测发现,粒细胞-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)及红系集落形成单位(BFU-E)数目也最多。结论以成骨细胞作为饲养层细胞,添加15%的条件培养基不仅能使HSC在体外大量增殖,并且具有维持HSC自我更新和多向分化潜能。

模拟微重力条件下对WB-F344肝干细胞表征分子表达的影响

研究大鼠WB-F344肝干细胞在旋转式细胞培养系统(RCCS)中培养进行细胞大规模扩增并保持干细胞的特性的可能性,为干细胞治疗疾病及肝组织工程提供理想的细胞来源。以WB-F344肝干细胞在RCCS中培养,以平面单层培养为对照,在培养后不同时间分别进行形态观察、流式细胞仪测细胞周期、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝干细胞特异性基因甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的表达,免疫荧光染色检测AFP、ALB蛋白的表达。结果表明,RCCS培养的WB-F344细胞粘附在Cytodex-3微载体上状态生长良好,细胞增殖较平面培养有明显增加;RT-PCR和免疫荧光染色检测结果一致:模拟微重力培养组AFP的mRNA表达强度及AFP阳性细胞均显著高于平面培养组,而ALB mRNA表达强度和ALB阳性细胞均低于对照组。说明模拟微重力培养条件下,能较好地维持肝干细胞特性,进一步证明这种培养体系是一种理想的肝干细胞培养模式。

多顺反子质粒重编程人脂肪干细胞为诱导多能干细胞

为建立多顺反子质粒载体转染技术获得人脂肪干细胞(adipose stem cells,ASCs)来源的诱导多能干细胞(inducedpluripotency stem cells,iPSCs),应用2A元件连接Oct4/Sox2/KLF4/c-Myc四因子基因,构建为单一开放阅读框的多顺反子质粒载体.使用该质粒对ASCs进行转染及重编程为iPSC.采用形态学观察、特异性抗体免疫荧光鉴定、体外拟胚体诱导分化和体内畸胎瘤形成等方法进行鉴定.结果显示,ASCs成功重编程为iPSCs,具有与人胚胎干细胞相似的形态学及多向分化潜能;通过拟胚体和畸胎瘤实验证实iPSCs能在体内外分化成三胚层细胞;DNA印迹实验显示质粒载体序列未整合至iPSCs基因组中.因此,通过多顺反子质粒载体重编程技术成功建立的人iPSCs具有多向分化潜能,可减免发生插入突变和免疫排斥问题,为iPSCs在遗传性或退行性疾病的治疗奠定了实验基础.

三维培养条件下WB-F344细胞膜流动性及粘附分子表达变化

目的探讨三维培养条件下对WB-F344细胞膜流动性的影响和粘附分子表达的变化。方法通过荧光偏振法检测细胞膜流动性变化,并用半定量RT-PCR技术检测细胞粘附分子表达变化情况。结果与平面培养的细胞相比,三维培养的细胞膜荧光偏振度与生物膜粘度下降,说明细胞膜流动性增加。三维培养和平面培养下,各种粘附分子均可表达,而三维培养条件下纤粘连蛋白(Fn)和整合素-β1(integrin-β1)mRNA的表达明显上调,整合素-α5的表达也有所增加。结论三维培养可提高WB-F344细胞膜流动性从而维持细胞膜的功能,并上调粘附分子的表达。

肿瘤免疫疗法中免疫检查点的研究进展

免疫检查点(immune chenkpoint)是存在于免疫系统中的抑制性信号通路,对外周组织中免疫反应强度、持续性予以调节,防止组织损伤,并在维持自身抗原耐受性的过程中发挥作用。T细胞识别、清除肿瘤的过程受到诸多信号通路、配体/受体的严密调控。免疫检查点疗法就是一类通过调节T细胞活性来提高抗肿瘤免疫反应的治疗方法。目前,通过抑制免疫检查点阻断信号以调节T细胞活性增强其抗肿瘤效应是肿瘤治疗热点,例如利用CTLA-4(cytotoxic T lymphocyte antigen4)、PD-1(programmed cell death1)、PD-L1(programmed cell death 1 ligand)的拮抗剂以及其它药物干扰免疫检查点,可直接刺激细胞毒性T细胞的活化进而启动抗肿瘤免疫,介导持续的肿瘤抑制过程。而联合使用免疫检查点阻断剂加强肿瘤抑制效果也在进行深入研究。免疫检查点信号通路的生物学机制目前获得诸多进展,本文就一些已应用于临床的免疫检查点及其它新型免疫检查点的研究进展加以综述。

花生四烯酸对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响

以大鼠前体脂肪细胞原代单层有血清培养为模型,用不同浓度花生四烯酸(AA)进行处理。通过噻唑蓝比色法(MTT)及台盼兰排斥试验反映各组细胞增殖状况,细胞形态观察和油红O染色提取法分析细胞分化程度,探讨外源性AA对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。结果表明:分别用1×10-4(试验组Ⅰ)、1×10-5(试验组Ⅱ)和1×10-6mol/L(试验组Ⅲ)AA处理细胞,各组细胞活力均高于对照组,特别是1×10-4和1×10-6mol/L试验组(P<0.01),1×10-5mol/LAA除第4天外与对照组差异不显著(P>0.05),但1×10-5mol/LAA可显著减少细胞内脂肪含量(P<0.01),抑制脂滴的形成,1×10-4和1×10-6mol/L试验组能促进脂肪生成,但效果不明显(P>0.05)。说明不同浓度的外源性AA均可促进大鼠前体脂肪细胞增殖,而较低浓度的AA能阻止前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞转化,对细胞分化有抑制作用。

诱导多能干细胞技术的生命伦理分析

诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是通过向分化的体细胞转入特定的外源转录因子进行重编程,从而获得具有自我更新能力和多能性的细胞。iPSCs具有形成体内所有细胞类型的潜能,尤其是能以患者自身体细胞制备iPSCs,可用于特定疾病的治疗,规避了异体移植引发的免疫排斥风险以及伦理和法律冲突等问题,在基础研究和临床应用都有广阔的应用前景。目前,在重编程体细胞为iPSCs的过程中,由于细胞来源不同,所采用的基因组合以及转基因方式各不相同,获得的iPSCs具有潜在的致癌性等安全隐患,导致iPSCs的临床应用面临新的生命伦理挑战。

基因打靶制备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上,可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器,克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。

适于肝干细胞培养的壳聚糖—硫酸肝素—透明质酸复合支架

目的选用适宜的三维支架在体外构建类似于体内的肝干细胞(HSCs)生长的微环境。方法以壳聚糖、硫酸肝素和透明质酸三种材料为原料,以冷冻干燥法制孔技术制备壳聚糖-硫酸肝素-透明质酸(C-HS-Ha)三维(3D)多孔隙复合支架,检测该支架的吸水率、孔隙率、孔径及降解率后,接种HSCs注入此支架,通过检测细胞在支架上的黏附率、细胞在支架内的形貌以及生长活力等情况来评价支架。结果吸水率、孔隙率、孔径及降解率都适合细胞生长;壳聚糖-透明质酸(C-Ha)支架与C-HS-Ha复合支架相比较,细胞黏附率前者约为后者的50%,细胞增殖数约是后者的75%;HSCs在支架内相互连接并贯穿孔间交织成网状。结论 C-HS-Ha复合支架是一种适于HSCs生长和增殖的材料,有望作为体外三维环境的支架材料并被用于组织工程和药物筛选等。

ELF5在正常乳腺发育和乳腺肿瘤发生中的作用

ELF5(E74-like factor 5)也被称为ESE2,属于ETS(E-twenty-six)转录因子家族成员之一,它在调控胚胎发育以及乳腺组织发育中起到重要作用。在桑椹胚时期,ELF5在调控胚胎内细胞团向胚胎形成过程中或是在胎盘发育的细胞命运决定中起到关键作用。在哺乳动物正常乳腺发育中,ELF5可通过诱导细胞定向分化而获得孕期乳腺分泌细胞类型,从而调控乳腺干/祖细胞的命运。在人类乳腺癌中,ELF5是诱导乳腺肿瘤细胞由表达雌激素受体阳性(ER+)的luminal亚型向表达雌激素受体阴性(ER-)的basal亚型转化的一个关键调控因子,并抑制细胞获得雌激素敏感表型。现主要综述了ELF5的结构特点、功能以及其在哺乳动物乳腺发育中的调控作用。

医学模式内涵中的哲学思想探析

考察医学与哲学的互动关系,探讨其现代意义及提供的启示有助于加深对医学哲学的理解。以此为目的,用历史和逻辑的方法就医学发展的几个主要历史阶段医学模式之中的哲学思想进行分析和探讨,以期建构医学哲学。

民族地区医学生对创新能力态度与认知调查

目的了解民族地区医学生创新能力态度与认知情况,探索制约培养医学生创新能力因素。方法采用随机整体抽样方法,利用问卷对医学生进行调查与分析。结果医学生对教育改革认知水平较高,创新人才培养与技术方法、体制、制度、文化环境等因素具有一定相关性。结论必须构建具有民族特色的医学创新人才培养模式。

人诱导多能干细胞分化为心肌细胞关键基因的生物信息学分析

利用生物信息学分析的方法筛选人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)向心肌细胞分化的关键基因。收集GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中关于人i PSCs向心肌细胞分化的高通量测序数据,包含i PSCs向心肌细胞分化的4个阶段的样本数据,分别是未分化的i PSCs(D0)、中胚层细胞(D2)、早期心肌细胞(D7)和心肌细胞(D14)。应用R包分析D0、D2、D7和D14样品之间的差异表达基因,并对差异表达基因进行功能和信号通路分析;构建差异表达基因的蛋白质-蛋白质互作(protein-protein interaction,PPI)网络;应用R包加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)对共表达的基因进行聚类,并将其划分为不同的基因模块;使用Cytoscape软件对重要基因模块的互作网络进行可视化和富集分析。结果显示,D0、D2、D7和D14样品之间的差异表达基因总共达917个,基于PPI网络筛选到的前10个基因分别是FPR2、ADCY2、CXCR2、CXCR4、PF4、GALR1、GAL、CXCL5、CXCL6和HCAR3,其中FPR2、CXCR2、CXCR4、PF4都富集G蛋白偶联受体配体结合的通路。基因相互作用关系分析显示,BMP5处于调控心肌发育的核心地位。研究基于表达谱GSE137920数据的生物信息学分析,筛选到人i PSCs向心肌细胞分化的关键基因,这将有助于心肌分化发育分子机制的深入研究。

中国高等教育质量标准演变历程及反思

高等教育质量管理问题是关系国家教育发展的重要问题,与高等教育理念、管理以及环境息息相关。基于学术—保证—问责三维分析框架对中国高等教育质量管理制度变迁历程进行分析发现,政府规约、国际化冲击及自身发展等多重压力共同塑造了中国高等教育质量管理模式之独特性,政策化取向及大学文化功利主义倾向是高等教育质量管理制度变迁的主因。新时代中国高等教育管理应在国家调控、院校自治和市场调节三种力量之间平衡张力,使中国大学治理转向中国特色高等教育质量管理之新范式。

转录因子KLF5调控宫颈癌细胞上皮-间充质转化的分子机制

上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程。为了探究Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)调控宫颈癌细胞发生EMT过程的分子机制,首先在宫颈癌HeLa细胞瞬时转染Flag-KLF5质粒进行KLF5过表达,并通过MTT法、细胞划痕和Transwell实验证实,KLF5可以显著地抑制HeLa细胞的侵袭和迁移能力。然后采用Western-blot和实时定量PCR技术检测HeLa细胞中EMT相关基因的表达水平,结果显示E-cadherin表达升高,N-cadherin和MMP9表达降低;而且,E-cadherin基因的上游调控因子如SNAI1、SLUG、ZEB1/2和TWIST1等的mRNA表达下降。进一步开展对比研究,在SiHa细胞中用siRNA沉默KLF5基因,再次验证了KLF5对EMT相关基因表达水平的影响。随后构建不同长度的SNAI1启动子截短体,用荧光素酶报告基因实验检测KLF5对SNAI1启动子活性的影响,结果显示KLF5可以抑制SNAI1启动子区域的活性,并且在HeLa细胞中过表达SNAI1基因后,可显著地促进细胞的EMT过程。以上结果表明,KLF5可通过调控SNAI1基因的表达来调节宫颈癌细胞的EMT过程,进而抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。