源于GAP启动子的毕赤酵母组成型表达系统的研究进展

巴斯德毕赤酵母表达系统是目前应用非常广泛的外源基因真核表达系统。与源于醇氧化酶启动子(pAOX1)的诱导型表达系统相比,源于三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(pGAP)的毕赤酵母组成型表达系统在表达外源蛋白时不需使用甲醇,表达时间短,并且在高密度发酵时采用连续发酵模式,因此成为近年研究的热点。本文分别从pGAP表达载体的构建、碳源、基因拷贝数、信号序列、高密度发酵等方面对该表达系统进行了综述,以期为其在蛋白生产中的深入研究和应用提供参考。

用GAP启动子在毕赤酵母中组成型表达重组猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂

目的构建组成型表达重组猕猴桃果胶甲酯酶抑制剂(kiwi pectin methylesterase inhibitor,kwPMEI)的毕赤酵母(P.pastoris)GS115工程菌株,探索碳源(葡萄糖、甘油、甲醇)对重组菌表达kwPMEI的影响,纯化kwPMEI并鉴定其对番茄果胶酶的抑制活性。方法应用PCR方法从P.pastoris GS115染色体中扩增了三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(pGAP),以其取代诱导型表达载体pPIC9K-kwPMEI上的醇氧化酶启动子(pAOX1),构建了组成型表达载体pGAP9K-kwPMEI,并转化至GS115中。用Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析目的蛋白表达情况,镍柱亲和层析纯化目的蛋白,并用凝胶扩散方法鉴定其抑制活性。结果重组毕赤酵母工程菌株成功组成型表达了kwPMEI,48 h即达到最大表达水平,表达量约为66 mg/L。并且以甘油为碳源时kwPMEI表达量最高。成功分离纯化了kwPMEI,并经凝胶扩散方法检测表明其具有抑制活性。结论成功构建了组成型分泌表达kwPMEI的毕赤酵母菌株,为kwPMEI在果蔬汁中的进一步应用奠定了基础。

快乐教学法在高中政治教学中的应用

相对于其他学科，高中思想政治内容比较枯燥乏味，尤其随着网络虚拟世界的诱惑增强，学生学习政治课的兴趣日益递减。快乐教学法可消除学生学习的紧张心理和乏味感，使绝大部分学生对学习感兴趣，从而提高他们分析问题、解决问题的能力和创造性思维能力。因此，快乐教学法在高中政治教学中的应用迫在眉睫。

对高中思想政治教学的一些认识和看法

理论性强是高中政治课程的主要特点，作为一名政治教师应当想方设法让学生既学会应付考试，又学会思考，学会生活，立足于社会，成为一名有理想有道德的合法公民，为祖国的建设事业贡献一份力量。笔者从事高中思想政治教学多年，在总结经验教训的基础上也形成对高中思想政治教学的一些粗浅认识和看法。

利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)的方法挖掘番茄果实成熟相关的转录因子

为挖掘番茄果实成熟相关的转录因子,利用10个不同番茄组织RNA-Seq数据,通过加权基因共表达网络分析的方法构建网络。进一步将该网络划分为24个模块,并寻找到8个组织中共16个组织特异性模块。通过对3个番茄破色10 d的果实组织特异性模块分析,发现这些模块中含有大量果实品质形成所需的糖、脂、蛋白等相关的代谢过程,并存在类萝卜素合成、果实软化、芳香物质合成以及乙烯生物合成和信号转导所需的关键基因。此结果验证了网络和组织特异性模块的可靠性。通过对棕色模块中转录因子分析,发现在该模块中存在MADS-RIN、AP2a、FUL1(TDR4)、CNR、NAC4、ERF6、NAC-NOR等果实成熟相关的转录因子,以及大量MADS-RIN转录因子直接作用的靶基因。由此推断棕色模块中其它58个转录因子是潜在的果实成熟转录因子。此结果为番茄果实成熟机制的研究提供新思路。

利用植物代谢途径提高AsA含量的研究进展

维生素C即抗坏血酸(AsA)是一种抗氧化剂,能够保护机体免于自由基氧化,维持人体骨骼、血管、肌肉等方面的正常生理功能,起到治疗坏血病,防治癌症,预防和治疗感冒的功效;还能够改善胆固醇的代谢,预防心血管疾病和动脉硬化。根据目前研究现状,AsA在植物体内共有4条合成途径,其中L-半乳糖途径是最主要的途径;另外,通过再生途径积累AsA也是植物体存储AsA的主要方式。本文综述植物体内AsA的合成及再生途径的研究进展,以及在这些途径中关键调控酶的作用,为采用植物代谢途径提高AsA含量提供理论依据。

番茄果实成熟突变体的研究进展

番茄是一类比较重要的经济作物,具有很高的营养价值,长期以来番茄一直是研究肉质果实生长和成熟的模式生物。近年来,许多番茄果实成熟突变体的发现为研究果实成熟机制提供了重要的生物材料,综述了番茄果实成熟的影响因素、番茄果实成熟相关的突变体及基于突变体对果实成熟的相关研究,为今后突变体及果实成熟机制的研究提供参考。