嗅球蛋白1在肺癌组织中的表达及可能意义

目的通过对比嗅球蛋白1(OLFM1)基因及其蛋白在肺癌组织及其配对的正常肺组织中的表达情况,探讨其表达与肺癌发生的相互关系。方法分别采用半定量RT-PCR法和荧光实时定量PCR检测21例肺癌患者的原位肺癌组织及其配对正常肺组织中OLFM1基因的相对表达变化和相对表达量,应用免疫组织化学染色观察OLFM1蛋白在组织中的表达。结果OLFM1基因在8例肺鳞癌原发灶中的表达相对于其配对正常组织中的表达显著下调约2.2倍(P=0.028);OLFM1蛋白定位于肺腺癌细胞胞质,仅在肺腺癌表达(P<0.001),其表达在不同年龄、性别、肿瘤分期、分化程度间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论OLFM1基因肺鳞癌中表达下调,可能是一个潜在的分子标志;而OLFM1蛋白仅在肺腺癌表达,在肺鳞癌和正常组织中均不表达,这提示不同病理组织类型肺癌的发生可能有不同的发生机制和途径。

大肠癌噬菌体展示肽库的构建及大肠癌早期检测分子的筛选

目的构建大肠癌噬菌体展示肽库,筛选用于大肠癌早期检测的分子标志。方法选取30例第二军医大学长海医院肛肠外科手术后立刻冻存的大肠癌组织标本构建T7噬菌体展示肽库;用结合protein-A/G的琼脂糖珠分别富集大肠癌组及非肿瘤对照组血清中的抗体进行5轮亲和筛选,富集大肠癌相关肽;随机挑取5轮筛选后的2000个噬菌体克隆,用ELISA方法进一步筛选与大肠癌患者血清和对照血清反应性存在差异的大肠癌相关标志物克隆,进行基因序列测定。应用通过Chilibot文献挖掘方法预测各克隆的蛋白功能,反证筛选结果。结果 (1)所建大肠癌噬菌体展示肽库的滴度为3.0×106pfu,经PCR鉴定其重组率为60%,库容为1.8×106pfu。(2)共筛选出18个有意义的噬菌体,测序后,预测其蛋白功能,其中12个与肿瘤的发生相关。结论应用ELISA对肿瘤重组抗原的噬菌体展示肽库进行筛选的方法 ,可以用来发现差异表达的抗原。所筛选出的噬菌体克隆所表达的抗原可用于早期筛检大肠癌。

基于系统生物学整合技术挖掘结直肠癌形成中的核心通路和驱动基因

目的探索结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)形成中的核心通路和关键基因。方法利用meta分析技术从以往5项CRC发生相关转录组学研究中筛选癌及癌旁差异表达基因。采用ComBat方法合并5项研究的癌组织基因表达谱数据,针对上述差异表达基因用PCIT软件进行共表达网络构建。利用CFinder软件揭示该共表达网络中存在的核心亚网络,并用Gather软件确定主要核心亚网络所富集的生物学功能。以重要核心亚网络(或通路)为重点,联合节点基因在CRC中的表达变化方向和相应染色体区域扩增或缺失的信息,发现亚网络功能形成中的候选驱动基因。结果 Meta分析转录组学研究共发现差异表达基因2 073个,其中在5项研究的癌组织中一致上调1 174个,一致下调899个,这些基因在CRC样本中形成的共表达网络包括798个基因节点和1 462条边,存在22个核心亚网络。最大的核心亚网络由77个基因和436条边组成,功能涉及细胞周期和增殖信号调控,UBE2C、MYBL2、FAM83 D、AURKA、TPX2等11个基因被预测为该信号功能的驱动基因。结论细胞周期和增殖信号通路是结直肠癌发生中的核心通路,UBE2C和AURKA等11个基因是该核心通路的驱动基因。

指纹基因群分析揭示锯齿型结直肠癌的预后和耐药特性

目的利用指纹基因群（GES）分析技术挖掘现有公共芯片数据揭示锯齿型结直肠癌的预后和耐药特性。方法从基因表达谱数据储存公共平台（GEO）中下载4个有预后信息的结直肠癌表达谱芯片数据（GSE14333、GSE17538、GSE33113、GSE37892）,用批间误差校正和单基因信息抽提等信息技术获得1个整合的表达谱队列（n=600）。获得锯齿型结直肠癌表达谱有关数据及相应特异性指纹基因群,并与前面的表达谱队列合并,建立指纹基因群评分系统,依托已知锯齿型结直肠癌样本的基因群评分确定分组界值。根据分组界值,将600例结直肠癌分为锯齿型、过渡型和传统型结直肠癌组,利用Kaplan-Meier和Cox模型分析锯齿型结直肠癌的预后特征。同时,收集并下载与不可切除结直肠癌姑息治疗有关的表达谱数据（GSE28702、GSE5851）,经表达谱数据抽提整理后,获得每个样本的锯齿型指纹基因群评分,通过比较治疗有效组和无效组之间评分的统计学差异来揭示锯齿型结直肠癌与药物耐药的关系。结果根据结直肠癌亚型评分界值,600个结直肠癌中有50个被分为锯齿型,126个被分类为过渡型,424个被分为传统型。锯齿型和过渡型结直肠癌与传统型结直肠癌相比具有几乎完全相同的预后能力,多因素Cox模型发现锯齿型和过渡型结直肠癌是患者术后复发的独立危险因素。单纯比较锯齿型和传统型结直肠癌,多因素Cox模型发现锯齿型结直肠癌是患者预后的不良因素（AHR=1.792,95%CI 1.011~3.177）。西妥昔治疗有效组的指纹基因群评分显著低于无效组（P=0.017）,但FOLFOX治疗有效组和无效组的基因群评分无差异。结论结直肠癌锯齿型亚型是结直肠癌患者术后复发的独立危险因素,且与西妥昔单抗治疗耐药相关。

联合应用基因表达谱和拷贝数变异信息探索结直肠癌分子亚型

目的：整合基因表达谱和拷贝数变异谱数据来揭示Ⅱ～Ⅲ期结直肠癌的分子分型，并探索各分型与结直肠癌术后复发的关系。方法：从网络公共资源中下载结直肠癌的基因表达谱数据及对应的拷贝变异谱数据，经批间校正、四分位数标准化、缺失值估算及特征过滤等处理后获得用于后续整合分析的基因表达谱和基因组拷贝数谱数据；选用贝叶斯一致性聚类（BCC）算法整合上述两种谱学数据进行结直肠癌分子亚型分析；结合结直肠癌患者的复发和生存数据，利用生存分析评价各亚型的预后预测能力；并用基因系列富集度分析软件比较不同亚型所富集的生物学信号。所有谱数据分析基于R-3．0．1平台，统计分析采用SPSS 16．0软件包。结果：从公共数据库中共选用335例结直肠癌患者的结直肠癌组织谱学数据，在特征选择后有1578个mRNA探针和345个拷贝数变异位置用于BCC综合聚类；BCC法聚类将335例结直肠癌分为4个亚型，该结果与单纯的基因表达谱分型（Cramer’s V=0．49，P〈0．001）、基因拷贝数谱分型（Cramer’s V=0．51，P〈0．001）及芯片数据提供者的表达谱分型（Cramer’s V=0．32，P〈0．001）显著相关，其中，BCC-Ⅰ亚型预后最好，BCC-Ⅳ亚型预后最差，而BCC-（Ⅱ＋Ⅲ）亚型预后居中，三组的log—rank P〈0．001，单因素Cox模型分析所得HR=1．55（95％CI：1．22～1．99）；基因富集度分析显示BCC—Ⅳ亚型相对于BCC-Ⅰ亚型的最大差异生物功能信号是DNA损伤修复（涉及52个基因），用DNA损伤修复基因重新对BCC-Ⅳ亚型和BCC—Ⅰ亚型的结直肠癌样本分组，该分组的预后效果明显优于BCC分型，但与BCC分型结果显著相关（Cramer＇s V=0．39，P〈0．001）。结论：BCC法能够有效整合不同组学数据进行结直肠癌肿瘤分型；BCC-Ⅳ亚型的预后最差，可能与DNA损伤修复能力降低有关。

粪便基因甲基化检测在结直肠癌及其癌前病变筛查中的作用

目的 探讨粪便中T淋巴细胞成熟相关蛋白（MAL）、细胞周期依赖性激酶抑制因子2A（CDKN2A）和6-氧-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态及其在结直肠癌和癌前病变筛查中的价值.方法 收集69例结直肠癌、24例腺瘤、19例增生性息肉患者及26名健康人群的清晨粪便标本,提取其DNA并进行亚硫酸氢盐修饰处理,采用甲基化特异性PCR技术分析MAL、CDKN2A及MGMT甲基化状态,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系,并比较3个基因甲基化联合检测与粪隐血试验（FOBT）的诊断敏感性.结果 结直肠癌患者粪便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因启动子甲基化率分别为78.3%、52.5%、55.1%,腺瘤患者分别为58.3%、41.7%、37.5%,增生性息肉患者分别为26.3%、15.8%、10.5%,正常对照人群分别为3.8%、0、3.8% 结直肠癌和腺瘤患者3个基因甲基化水平均显著高于增生性息肉患者和正常对照人群（均P＜0.05）.3个基因甲基化联合检测诊断结直肠癌和腺瘤敏感度分别为92.8%和70.8%,明显高于FOBT的29.0%和25.0%（均P＜0.05）.3个基因甲基化状态与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、远处转移及TNM分期均无关（均P＞0.05）.结论 粪便中MAL、CDKN2A、MGMT基因启动子甲基化水平在结直肠癌和腺瘤患者中明显升高,其联合检测可望成为结直肠癌及其癌前病变筛查的非侵入性检测方法.

271例直肠癌误诊原因分析

目的 分析直肠癌医源性误诊的常见原因以提高直肠癌的诊断率和疗效.方法 回顾性分析上海长海医院肛肠外科2007年1月至2008年12月收治的568例直肠癌患者中医源性误诊的病例资料.结果 全组有271例（47.7%）存在医源性误诊（误诊组）.以便血为首发症状者的医源性误诊率（62.4%）高于其他症状组（P＜0.01） 误诊组中Ⅲ期（110例,40.6%）和Ⅳ期（68例,25.1%）患者比例均高于无误诊组（分别为32.3%和16.2%,P＜0.05） 小于40岁组患者的误诊率（89.6%）高于其他年龄组（P＜0.01） 其中Ⅳ期患者比例（25.1%）明显高于其他年龄组（P＜0.01）.小于40岁组患者的误诊时间也明显长于其他年龄组（P＜0.05）.结论 直肠癌误诊率高,误诊患者肿瘤分期相对较差,需重视40岁以下患者的误诊问题.

同时性结直肠癌肝转移患者同期手术的术前危险度评分体系初探

目的建立同时性结直肠癌肝转移患者同期手术的术前危险度评分体系。方法收集上海长海医院2010年1月至2019年3月行同时性结直肠癌肝转移同期手术患者的临床病理资料,随访其复发和生存状况,统计分析不同临床病理指标的患者预后情况,采用单因素及多因素Cox回归分析影响患者预后的危险因素。以Cox分析中预后不良的危险因素为指标,每项危险因素计1分,按总分不同将患者分为不同组,分析每组中位生存时间、中位无病生存时间。结果共纳入234例患者,其中男性126例,女性108例,年龄(57.4±10.8)岁,中位生存期44.85个月,1年、3年、5年累积生存率分别为87.3%、55.2%、22.9%。其中原发肿瘤位于右半结肠、术前癌胚抗原≥200 ng/ml、多发肝转移瘤、低分化腺癌/粘液腺癌是患者预后不良的独立危险因素。以上4项每项各计1分,将患者分为低危(0~1分)组和高危(2~4分)组。低危组(n=174)和高危组(n=60)患者的中位生存时间分别为53个月和29个月,低危组和高危组患者的中位无病生存时间分别为21.34个月和8.48个月,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论依据本研究结果初步构建了针对结直肠癌同时性肝转移患者的愈后预测评分体系,以期对该类患者治疗方案的选择起到一定的指导作用。

预警症状对结直肠癌的诊断效能研究

目的:明确预警症状(腹部包块、便秘、排便习惯改变、腹泻、肛周异物感、长期腹痛、便血或肛门出血)对结直肠癌的诊断效能。方法:收集我院2016年1月至2016年12月的结肠镜检查数据,计算各个预警症状的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比。结果:预警症状总的诊断敏感度和特异度分别是6.63%和94.33%。所有的预警症状诊断敏感度最高的是便血,敏感度为19.28%,最低的是腹泻,敏感度为2.41%。相对而言,便血和长期腹痛的准确度较高,分别达到了19.28%和11.45%。除了长期腹痛之外,其他所有的预警症状的诊断特异度都达到了90%以上。结论:超过一半的结直肠癌患者没有出现预警症状,用预警症状来诊断结直肠癌具有较低的敏感度和较高的特异度,需要更多的研究来证明预警症状的临床意义。

NICE分型在结直肠癌诊断中的意义

结直肠癌发病率高,早期诊断困难,威胁着全世界人民的健康。近几年窄带成像技术(Narrow Band Imaging,NBI)发展迅速,大大改善了结直肠镜下图像的清晰程度,NBI辅助下的结直肠镜检查在早期诊治肠癌方面具有重要意义。为了进一步优化结直肠镜的诊断效能,多种NBI辅助的结直肠镜下的结直肠病变分型被提出。针对病变的表面形态、颜色分布以及微血管的形态与走形,Sano分型、Jikei分型、Showa分型、Hiroshima分型和NICE(Narrow-Band Imaging International Colorectal Endoscopic)分型相继被提出。其中NICE分型以良好的学习曲线和诊断效能被广泛认可和应用。

中低位直肠癌腹腔镜前切除术中盆底腹膜重建临床价值的前瞻性队列研究

目的探讨腹腔镜辅助中低位直肠癌前切除术中盆腔腹膜重建的安全性、有效性及对肛门功能的影响。方法采用前瞻性队列研究的方法。入组2020年2月至2021年2月期间, 在海军军医大学附属长海医院连续行腹腔镜辅助经腹前切除术的中低位直肠癌患者。病例纳入标准:(1)肿瘤距肛缘≤10 cm;(2)接受腹腔镜辅助直肠癌经腹前切除术;(3)临床资料完整;(4)术后病理诊断为直肠腺癌。排除标准:(1)急诊手术;(2)既往肛门功能不良者或行肛门手术者;(3)术前诊断远处(肝、肺)转移;(4)合并肠梗阻;(5)手术中因各种原因中转开腹手术的患者。盆底腹膜重建方法:使用SXMD1B405(STRATAFIX螺旋PGA-PCL, Ethicon)。第1针从直肠左前壁向右侧缝合固定重建直肠, 随后继续进针缝合至乙状结肠系膜根部, 然后用Hemo-lok固定;第2针从第1针的起点开始, 3~4针后, 经左下腹套管针孔置入骶前引流管, 随后继续缝合左降结肠外侧腹膜切口, 最后用Hemo-lok固定。比较研究组与对照组患者的手术时间、围手术期并发症、术后Wexner肛门功能评分和低位直肠前切除综合征(LARS)评分;术后3~6个月进行盆腔MRI检查, 观察并比较两组患者的盆底解剖结构。结果共230例患者入组研究, 其中58例术中进行了盆底腹膜重建(研究组), 另外172例不进行盆底腹膜重建作为对照组。两组患者一般资料的比较, 差异均无统计学意义(均P>0.05), 具有可比性。研究组手术时间长于对照组(177.5±33.0)min比(148.7±45.5)min, 差异有统计学意义(P<0.001)。两组患者围手术期并发症(吻合口漏、吻合口出血、术后肺炎、尿路感染)的发生率差异无统计学意义(均P>0.05);全组共计发生吻合口漏8例, 研究组2例(3.4%), 经保守治疗出院;对照组6例(3.5%)中, 5例(2.9%)经二次手术治疗后出院。术后Wexner评分和LARS评分, 研究组为(3.1±2.8)分和23.0(16.0~28.0)分, 均低于对照组的(4.7±3.4)分和27.0(18.0~32.0)分, 两组比较, 差异均有统计学意义(t=-3.018, P=0.003和Z=-2.257, P=0.024);LARS严重程度分级中, 研究组重度者占16.5%(7/45), 对照组则占35.5%(50/141), 但两组比较, 差异无统计学意义(Z=4.373, P=0.373)。术后3~6个月盆腔MRI检查发现, 小肠堆积于盆底的现象在研究组中的发生率为9.1%(3/33), 在对照组中为46.4%(64/138), 两组比较, 差异有统计学意义(χ^(2)=15.537, P<0.001)。结论腹腔镜中低位直肠癌前切除术中采用倒刺线进行盆腔腹膜重建安全、可行, 可能降低吻合口漏患者二次手术率, 并能显著改善患者术后肛门功能。

齿线上环直肠一周的绒毛状腺瘤的外科诊治附五例分析

目的探讨齿线上环直肠一周的绒毛状腺瘤的手术策略。方法回顾分析上海市长海医院治疗的5例齿线上环直肠一周的绒毛状腺瘤的病例,其中,3例患者采用经肛局部切除,2例患者采用直肠拖出式经腹前切除+末端回肠造口术方式治疗。结果 5例患者术后均恢复顺利,术后肛门功能良好,无围手术期死亡。结论对齿线上环直肠一周的直肠绒毛状腺瘤患者,是肛肠外科医生面临的棘手问题,应根据患者不同情况,采用经肛局部切除或采用直肠拖出式经腹前切除+末端回肠造口术,可达到理想的治疗效果。