基于纳米递送系统的肿瘤免疫治疗研究进展

近年来，肿瘤免疫治疗发展迅速，相较于其他传统肿瘤治疗方法具有显著优势。肿瘤免疫治疗是通过调动或激发机体自身的免疫功能，从而抑制和杀伤肿瘤细胞。随着纳米技术的发展，生物纳米载体材料为疫苗的开发提供了全新的思路。纳米疫苗是基于纳米技术开发的治疗性或预防性疫苗，大多数肿瘤疫苗包括诱导免疫应答的外源性抗原、递送抗原的载体以及增强免疫原性并加速和延长肿瘤疫苗效果的佐剂。纳米递送载体具有良好的生物相容性和独特的理化性质，能够有效地递送各种抗原，通过调控抗原在抗原提呈细胞内的呈递途径，在激发机体的体液免疫基础上，可以进一步激活抗原特异性的细胞免疫反应。旨在对纳米递送体系在肿瘤疫苗研究中的应用作一综述。

氧化石墨烯纳米疫苗的免疫应答研究

目的 研究氧化石墨烯（GO）纳米疫苗在小鼠体内诱导产生的特异性免疫应答。 方法 将纳米GO与模型抗原卵清蛋白（OVA）共孵育制备得到负载OVA的GO纳米免疫复合物（GO-OVA）。采用原子力显微镜和粒度分析仪对纳米GO进行表征；细胞计数试剂盒（CCK-8）检测纳米GO对小鼠骨髓树突状细胞（BMDCs）的细胞毒性；荧光染色观察小鼠BMDCs对GO-OVA纳米免疫复合物的摄取。将C57BL/6小鼠按体质量随机区组法分为OVA组、铝佐剂OVA（Al-OVA）组和GO-OVA组（每组6只）进行体内免疫，酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测小鼠血清中OVA特异性抗体IgG（总IgG、IgG1和IgG2a）水平，流式细胞术检测小鼠脾脏和腹股沟淋巴结内的T淋巴细胞亚群。 结果 制备得到的纳米GO平均粒径为（294.34 ± 4.68） ｎm，多分散系数为0.208。纳米GO对小鼠BMDCs的毒性较小。体外细胞实验结果表明，GO-OVA纳米免疫复合物可被小鼠BMDCs有效摄取。GO-OVA纳米免疫复合物免疫小鼠后，诱导产生的血清特异性IgG抗体滴度与铝佐剂相当，差异无统计学意义（P〉0.05），且以辅助性T细胞（Th）1型应答为主。GO-OVA组小鼠脾脏和腹股沟淋巴结内的CD4＋ T和CD8＋ T淋巴细胞比例均明显高于OVA组和Al-OVA组，差异均具有统计学意义（均P〈0.05）。 结论 GO-OVA纳米免疫复合物能诱导小鼠同时产生体液和细胞免疫应答，这为研制新型疫苗载体和佐剂提供了依据。

透明质酸修饰的纳米粒共递送CpG和抗原促进树突状细胞的成熟与活化

目的 研究透明质酸(HA)修饰的聚合物纳米粒共递送佐剂和抗原对小鼠骨髓树突状细胞(BMDCs)的成熟与活化效应。方法 以HA修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)及阳离子脂质DOTAP为纳米载体(DOTAP-PLGA)共递送佐剂CpG与模型抗原卵清蛋白(OVA),其中CpG共价结合到纳米粒表面的HA上,OVA物理共混于DOTAP-PLGA纳米载体中。采用透射电子显微镜和动态光散射表征纳米粒;考察纳米粒中CpG和OVA的体外释放情况;利用流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜研究纳米粒在小鼠BMDCs中的摄取和分布;利用流式细胞术和酶联免疫吸附实验分别评价小鼠BMDCs的成熟和细胞因子的表达。结果 制备了共负载CpG和OVA的纳米粒CpG-HA-OVA-PLGA,平均粒径为(305.1±2.2)nm,多分散系数为0.203,透射电子显微镜可观察到经HA修饰的纳米粒有明显的核-壳结构。细胞实验结果表明,CpG-HA-OVA-PLGA纳米粒可被小鼠BMDCs有效摄取并促进CpG的溶酶体释放和抗原OVA 的胞质递送;与游离OVA组和游离OVA+CpG组相比,CpG-HA-OVA-PLGA纳米粒组可显著提高BMDCs的共刺激分子CD86和CD40(均P<0.01)、主要组织相容性复合物I以及细胞因子肿瘤坏死因子-α(均P<0.001)的表达。结论 HA修饰的CpG和OVA的纳米粒共递送载体能有效促进树突状细胞的成熟与活化,为研制新型疫苗载体共递送抗原和佐剂提供了依据。