杭州西溪湿地灌草群落组成的季节变化

采用随机取样、定点调查的方法,分析杭州西溪湿地灌草植物群落的类型与时间、空间的关系,并用多样性指数分析春、夏、秋、冬四季中植物群落组成的特点。结果表明,西溪湿地物种对时间生态位的利用比较充分,四季中群落组成有较为明显的变化;春季物种最为丰富,9m2中达29种,香农—威纳指数H’为2.73,与其他季节相比差异显著;冬季物种最少,为11种,H’为2.14;夏秋季物种多样性介于春、冬季之间。西溪湿地的现有植物组成是人与自然因素共同作用的结果,而人的影响更大。西溪湿地典型的湿地物种偏少,外来有害入侵物种的比例较高,建议在去除影响景观、影响本土物种多样性的入侵种的同时,增加低湿的生境,并补种湿地物种。

硝酸银对黄瓜离体子叶培养芽再生的促进效应

以黄瓜品种“津春4号”无菌苗子叶为材料，研究了AgNO3对离体子叶芽再生频率的促进作用。结果表明，在含KT 2mg/L和NAA 0.1～0.4mg/L的MS培养基中附加AgNO3 2～6mg/L，可显著地提高离体子叶芽再生频率，其中最适培养基为：KT 2mg/L+NAA 0.3mg/L+AgNO3 2mg/L，芽再生频率达到77.2%。这种促进作用与AgNO3抑制乙烯的形成有关。

hWAPL基因shRNA真核表达载体的构建及干扰效果的初步鉴定

目的：构建针对人半翼基因（hWAPL）的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体,并观察其转染效率.方法：根据hWAPL基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,将其定向克隆到带有卡那抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1中,酶切和测序后,用脂质体转染到CasKi细胞中,观察荧光表达,鉴定转染效率.RT-PCR检测结果表明,筛选到的短链hWAPL siRNA能有效抑制内源hWAPL的表达.结果：成功构建了表达shRNA的质粒及其阴性对照质粒,转染到CasKi细胞系中可以特异下调hWAPL mRNA表达,载体转染效率达50%以上.结论：RNAi能特异地下调CasKi细胞中hWAPL mRNA含量,抑制宫颈癌细胞恶性增殖,提示hWAPL可能成为宫颈癌基因治疗的一个新的靶点.

半翼基因的研究进展

在果蝇体内人们发现半翼基因(wings apart-like,wapl)所编码的蛋白具有调节异染色质结构的功能。人半翼基因(human wings apart-like,hwapl)是wapl的同源基因,两者具有相似的功能,能够与黏连蛋白结合,并且调节姐妹染色单体的分离。此外,其还具有癌基因的特性,与宫颈癌的发展有关。

虚拟实验室与组织胚胎学实验教学

传统的组织学与胚胎学实验教学方式存在很多不足,虚拟实验室可以使教学活动的时间和空间得到最大限度的扩大,虚拟实验室在组织胚胎学实验教学中可发挥很多优势:虚拟实验室可有效衔接对相关知识,可以模拟不同知识情景,更有效的结合基础与临床。通过结合传统实验室和虚拟实验室,将会提高组织胚胎学实验教学的效果。

IL-24基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞促进宫颈癌CaSki细胞凋亡

目的:探讨白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞(dendritic cells,DCs)是否在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocytes,CTLs)对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应。方法:分离培养小鼠未成熟DCs,将已成功构建的带有IL-24基因的重组腺病毒感染体外培养的小鼠未成熟DCs,提取CaSki细胞裂解物负载DCs,制备DC疫苗,Western blotting检测IL-24蛋白的表达;PE-Annexin V和Western blotting检测细胞凋亡及cleaved caspase-3表达;克隆形成实验检测克隆形成能力;裸鼠荷瘤模型体内研究带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs在体外诱导的CTLs对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应。结果:Western blotting检测IL-24蛋白高表达;DCs疫苗诱导产生的CTLs后与CaSki细胞共培养,对CaSki细胞生长具有明显的抑制作用,DCs疫苗诱导产生的CTLs促进CaSki细胞凋亡,增加cleaved caspased-3蛋白表达,克隆形成实验检测该疫苗具有抑制CaSki细胞形成克隆的能力。裸鼠的成瘤实验表明,带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs可以抑制体内肿瘤的形成,促进肿瘤细胞凋亡。结论:IL-24基因重组腺病毒感染DCs制备的DCs疫苗可诱导CTLs,从而抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,并促进其凋亡。

K14和CMV启动子驱动裸鼠体内HPV16 E6/E7基因表达的差异

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性.为探讨不同启动子驱动HPVE6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒(CMV)启动子的E6/E7腺病毒载体(pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7),pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7、以及作为对照的重组腺病毒空载体pAdtrack-K14和pAd-CMV同源重组后,分别在293细胞中包装,收集重组病毒Ad-K14-E6/E7、Ad-CMV-E6/E7、Adtrack-K14和Ad-CMV,通过尾缘静脉注射到随机分组的裸鼠体内,并每d向裸鼠腹腔注射0.05 mg雌激素.采用RT-PCR和Western免疫印迹检测不同实验组E6/E7 mRNA和蛋白表达水平,免疫组化法检测P53和Bcl-2蛋白表达.结果显示,注射病毒Ad-K14-E6/E7(实验组1)裸鼠子宫体中E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白高表达,而其它组织中低表达;注射病毒Ad-CMV-E6/E7(实验组2)裸鼠各组织E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白均低表达.研究表明,在裸鼠体内角蛋白K14启动子可以调控E6/E7在子宫体中表达,CMV启动子未能诱导E6/E7在子宫体中表达.

人乳头瘤病毒关键基因在裸鼠体内表达的初步研究

目的:初步研究HPV16E6/E7基因在裸鼠体内不同组织引起的病变。方法:将重组腺病毒Ad-CMV-E6/E7、Ad-K14-E6/E7病毒上清以及作为对照的重组腺病毒空载体pAd-CMV和pAdtrack的上清液,经过纯化后,通过裸鼠的尾缘静脉注射到裸鼠体内,并每天注射0.05mg雌激素到注射病毒的裸鼠,同时做阴性对照。12周后给裸鼠注射2.5%阿佛丁进行麻醉,并将其耳朵、头颈部皮肤、口腔黏膜、结肠、直肠、子宫颈-阴道移行区等组织取出,浸泡在3.75%多聚甲醛中4℃固定过夜,然后做石蜡包埋切片、HE染色、免疫组化检测P53蛋白和Bcl-2的表达,取裸鼠的各个组织提取DNA、RNA和蛋白质,然后分别检测有无重组腺病毒的感染、病毒表达的情况及E6蛋白的表达。结果:实验组1注射腺病毒Ad-K14-E6/E7的裸鼠组织HE染色结果显示裸鼠子宫颈-阴道移行处的增生较明显。SP法免疫组化发现突变型P53和Bcl-2在该组裸鼠的子宫颈-阴道移行处表达都增加(P<0.05),并且RT-PCR检测子宫颈-阴道移行处组织也有E6/E7的表达,Western blotting检测该组织也有E6蛋白的表达。结论:K14启动子增加了E6/E7在裸鼠子宫颈-阴道移行处的表达,并且使子宫颈-阴道移行处的上皮组织发生病变。

shRNA介导的hWAPL表达沉默对人宫颈癌CaSki细胞增殖与凋亡的影响

目的:为探讨人半翼(hWAPL)蛋白在细胞增殖与凋亡中的作用及其作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值,本研究用RNA干扰技术抑制hWAPL基因的表达,并观察了其对人宫颈癌细胞CaSki细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR和Western blotting检测hWAPL shRNA的干扰效率;MTT检测细胞增殖;Annexin V-PE和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;蛋白质印迹分析凋亡蛋白cleaved caspase-3和细胞周期抑制蛋白p21、p27的表达。裸鼠荷瘤模型体内研究hWAPL沉默对CaSki细胞增殖的影响。结果:实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果表明,筛选到的hWAPL shRNA能有效抑制内源hWAPL的表达。MTT实验表明shRNA介导的hWAPL表达沉默显著抑制CaSki细胞的增殖。Annexin V-PE分析结果表明,hWAPL沉默增加了凋亡细胞数目。细胞核经Hoechst 33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光;蛋白质印迹结果显示cleaved caspase-3、p21和p27表达增加;裸鼠成瘤实验表明,hWAPL沉默的肿瘤体积减小,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达增加。结论:hWAPL沉默抑制CaSki细胞增殖,促进细胞凋亡,是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。

沉默DAXX基因表达促进人卵巢癌细胞凋亡和衰老

DAXX是Fas死亡结构域相关蛋白(Fas death-associated protein,DAXX),可与Fas死亡受体的死亡域结合.通过激活c-Jun NH2末端激酶通路,DAXX增强Fas介导的凋亡,同时也增强转录生长因子β依赖的凋亡.本研究通过免疫组化检测人正常卵巢组织和卵巢癌组织中DAXX蛋白表达,然后通过Tet-on诱导体系构建DAXX基因沉默的慢病毒,感染卵巢癌细胞后,加入嘌呤霉素筛选稳定表达的OV2008细胞,四环素诱导DAXX基因沉默,通过免疫印迹和定量PCR检测DAXX基因干扰效果,MTT检测细胞增殖,克隆形成实验检测克隆形成能力,免疫印迹和免疫荧光方法检测DNA损伤蛋白的变化,SA-β-gal检测细胞衰老.结果表明,在人正常卵巢组织中DAXX低表达,而在人卵巢癌组织中DAXX高表达,随着四环素浓度的增加DAXX的表达量降低,DAXX基因沉默抑制卵巢癌OV2008细胞的增殖和克隆形成.免疫印迹结果显示,DAXX基因沉默可诱导DNA损伤相关蛋白p-H2AX和p-CHK2高表达.SA-β-gal检测结果表明,DAXX基因沉默可诱导OV2008细胞发生衰老,免疫印迹检测发现,p21和p27在DAXX沉默的卵巢癌细胞中高表达.综上结果,DAXX沉默可以抑制卵巢癌细胞的增殖和克隆形成,同时也促进卵巢癌细胞发生DNA损伤和衰老.该研究为卵巢癌的基因治疗提供新的思路.

杭州西溪湿地灌草植被的排序和数量分类

杭州西溪湿地是在一千多年农渔耕作用下形成的城市边缘次生湿地.该项研究对西溪湿地自然生长的灌草植被进行了23个9m2的共优种样方和若干个单优种群落的调查,并尝试对它们进行DCA排序和TWINSPAN的聚类分类研究.结果显示,土壤水分和光照条件是影响西溪灌草植被群落及物种分布的主要因子.西溪的灌草植被大体上可以分为6大类,27个群丛:阳性-水生植物群落——9个群丛,阳性、近岸的湿生植物群落——8个群丛,介于湿生和中生之间的植物群落——3个群丛,以上三类是典型的湿地植被类型;阳性-中生植物群落——3个群丛,介于喜阳和耐阴之间的中生植物群落——2个群丛,耐阴的中生植物群落——2个群丛,后三类不是典型的湿地植被类型.TWINSPAN将99个物种分成两类:偏中生的和偏湿生的物种.DCA的排序与TWINSPAN聚类结果基本一致.最后指出,在保护现有生境和物种多样性的基础上,扩大和修复湿地生境,培植多样的湿地植物是杭州西溪湿地今后管理的重要任务.

褪黑素免疫功能的研究进展

褪黑素不但是体内的强自由基清除剂和抗氧化剂,同时还具有调节生物钟、促进睡眠、抗肿瘤、增强免疫和抗衰老等多种功效;褪黑素对机体具有一定的免疫调节作用,对机体病毒感染也能有一定的保护作用;褪黑素还能参与粘膜免疫作用。本文就褪黑素的相关免疫功能作一综述。

Alzheimer病病因研究进展

Alzheimer病 (AD)的主要病变是大脑皮质和皮质下结构出现老年斑和神经原纤维缠结 ,这与神经细胞外的淀粉样蛋白沉着和细胞内的 Tau蛋白过度磷酸化有关 ,也与胆碱能系统活性下降、乙酰胆碱合成减少、胆碱乙酰化酶活性下降密切相关 ,并与之形成恶性循环 ,加剧 AD的恶化。近来研究表明细胞凋亡在 AD神经退行性变方面起重要作用。 AD尤其是家族性 AD的发生与分别定位于 2 1、1 4、1、1 9号染色体上的基因 APP、PS1、PS2、AOPE有关。

双歧杆菌三联活菌散治疗小儿急性腹泻病的疗效观察

目的探讨双歧杆菌三联活菌散治疗小儿急性腹泻病的疗效。方法选择我院小儿急性腹泻病患儿140例,随机分为治疗组和对照组各70例。对照组采用纠正脱水、纠正酸中毒、纠正电解质紊乱等综合治疗;治疗组在对照组综合治疗的基础上加用双歧杆菌三联活菌散以调节肠道菌群。治疗过程中观察患儿大便性状、大便次数、大便常规结果及体温恢复正常时间。结果治疗组较对照组主要症状及体征消失时间缩短,且无任何不良反应。治疗组的总有效率为95.7%;对照组的总有效率为82.9%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论双歧杆菌三联活菌散治疗小儿急性腹泻病,无任何不良反应,能够缩短疗程,提高疗效,改善患儿身体营养状况,值得临床应用推广。

布地奈德联合沙丁胺醇雾化吸入治疗儿童哮喘疗效观察

目的观察布地奈德联合沙丁胺醇雾化吸入治疗儿童哮喘的疗效。方法选择我院2011年1月—2013年12月收治的儿童哮喘患儿120例,随机分为治疗组和对照组,每组60例。在常规抗感染、对症及支持治疗基础上,治疗组予布地奈德及沙丁胺醇雾化吸入,每次予布地奈德1~2 mL及沙丁胺醇1.25~2.5 mL,加入生理盐水2 mL中,采用氧泵雾化吸入,每日2次,每次吸入15 min^20 min,连用7 d。结果治疗组总有效率93.3%,对照组总有效率75%,2组比较差异有显著性(P<0.05)。结论布地奈德联合沙丁胺醇雾化吸入治疗儿童哮喘疗效较满意,可以缩短疗程,给药方便,吸入法给药后药物直接作用于气道,能够迅速解除气道痉挛,及时控制哮喘,且给药剂量小、副作用小,值得推广。

治疗遗传性血管水肿的临床研究

遗传性血管性水肿是一种常染色体显性遗传病，发病率为1；10000-1：50000。该病以反复发作的皮下或粘膜下水肿为主要临床表现。由于本病的发病率较低，临床医生对该病的认知度不够，临床上常常导致误诊或漏诊而延误治疗。本文对该病的发病机理、临床表现及治疗方法进行了详细论述。

人乳头瘤病毒引起裸鼠生殖系统病变的研究

重组的腺病毒Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7在293细胞中包装后得到上清液,将Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7病毒上清液以及做为对照的重组腺病毒空载体pAd-CMV和pAdtrack-K14的上清液,经过纯化后,通过裸鼠的尾缘静脉注射到裸鼠体内,每天注射0.05 mg雌激素给注射病毒的裸鼠,同时做对照。12周后给裸鼠注射2.5%的阿佛丁进行麻醉,取其子宫、阴道、卵巢、乳腺等组织,浸泡在3.75%的多聚甲醛中4℃固定过夜,做石蜡包埋切片、HE染色、免疫组化检测P53蛋白和Bcl-2蛋白的表达,取裸鼠的各个组织提取DNA、RNA和蛋白质,然后分别检测有无重组腺病毒的感染、病毒表达的情况及E6蛋白的表达。HE染色结果显示注射腺病毒Ad-K14-E6/E7的裸鼠(实验组2)子宫颈-子宫体移行组织增生明显。SP法免疫组化检测突变型P53和Bcl-2在该组裸鼠的子宫基质细胞表达增加,并且RT-PCR检测该组裸鼠子宫组织也有E6/E7的表达,Western Blot检测该组子宫组织也有E6蛋白的表达。动物实验结果表明K14启动子增加了E6/E7在裸鼠子宫组织的表达,同时也发现该组裸鼠的子宫颈-子宫体移行组织有增生改变。