仙茅叶片的组织培养及其细胞学观察

目的通过对仙茅叶片组织培养的研究与细胞学观察,为仙茅的快速繁殖提供技术依据。方法将仙茅幼叶培养在MS培养基,通过设计不同的光照条件,附加不同的激素、水解酪蛋白和活性炭成分,调查出愈率和成苗率。细胞学观察采用石蜡切片法。结果对仙茅叶片的愈伤诱导,黑暗的效果好于光照;在所试验的培养基成分中,适宜的激素配比是2.0mg/L2,4-D或6-BA1.5mg/L+2,4-D2.5mg/L,并且附加300mg/L水解酪蛋白和0.2%活性炭,对于仙茅叶片的离体成苗较好;培养后,愈伤组织主要由叶片的中脉产生,位于中脉上表皮内侧的薄壁细胞首先启动分裂,随后维管束鞘薄壁细胞及其外侧的叶肉细胞也启动分裂,参与愈伤组织的形成。愈伤分化时,芽发生于愈伤组织的表面,根发生于愈伤组织的内部。结论可以通过仙茅幼叶的组织培养进行仙茅的快速繁殖。

石斛兰dfr基因植物表达载体的构建

石斛兰花瓣缺乏橙色、蓝色,这与其二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)活性有着密切的关系。根据已报道的石斛兰dfr基因序列设计引物,从Den.Burana Emerald中分离了dfr基因。将该基因序列正向与反向连接到植物表达载体pCAM BIA1301中,并由组成型启动子CaMV35S驱动,成功构建了dfr基因的正义和反义植物表达载体pC-SDN1和pCSDN2,并导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefacien)EHA105,以期利用转基因技术培育出石斛兰花色新品种。

观赏石斛育种技术研究综述

介绍了观赏石斛育种的目的和意义,综述了近10年来石斛兰育种的主要途径,包括种质资源保护、传统育种、杂交育种、分子标记辅助育种和基因工程育种等。结合石斛兰育种的现状及存在问题,提出了一些解决措施,以期为今后的育种工作提供借鉴。

一个辐射诱变的水稻卷叶突变体的特性研究

通过60Co-γ射线处理籼稻品种青华占的干种子,获得一个稳定遗传的卷叶突变体(γ-rl),对其进行叶片细胞学观察、根形态特性分析及生长素(IAA)和色胺含量的分析。结果显示卷叶突变体γ-rl叶片的中脉面积比野生型增加,而侧脉数目减少;突变体种子萌发后幼苗的主根长度比野生型显著缩短,根总数也显著减少,表明幼苗期γ-rl的根系发育明显差于野生型;突变体γ-rl幼苗的主根生长对外源IAA、IAA抑制剂NPA处理的反应与野生型相比也存在显著差异;在幼苗期,突变体γ-rl叶片内源IAA的含量明显低于野生型,而色胺的含量明显高于野生型,但在抽穗期,突变体γ-rl叶片的IAA和色胺含量与野生型相比均无显著差异。研究结果将为阐明该突变体卷叶突变产生的原因及卷叶相关基因(OsFMO(t))的功能打下基础。

石斛兰dfr基因的克隆、序列分析及原核表达

二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)在不同花色形成中起着关键作用。利用RT-PCR方法从石斛兰中克隆出dfr基因,并命名为Dendfr。该序列全长1164bp,编码352个氨基酸。氨基酸序列分析发现,DenDFR与3种兰科植物的DFR氨基酸序列同源性达81%～86%,与其他非兰科植物的DFR氨基酸同源性在56%～72%之间。在DenDFRN-末端存在一个保守的NADP结合区,序列中存在26个氨基酸组成的底物特异结合区,其中134位氨基酸处存在特异的天冬酰胺N位点。将Dendfr的编码区克隆到pQE30载体中,在大肠杆菌中高效表达了该蛋白,为进一步研究石斛兰花色形成机制及花色改良基因工程打下基础。