抑制HDAC4减少JNK/c-Jun活性及其依赖的神经元凋亡

【目的】研究抑制组蛋白去乙酰化酶成员HDAC4对SD大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响及机制。【方法】将原代培养6~9 d的CGN分为存活对照组(用含K+浓度为25 mmol/L的培养基,即25 K组)、凋亡组(用含K+浓度为5 mmol/L的培养基,即5 K组)和LMK-235处理组(5 K合并LMK-235处理组),在5 K条件下用不同浓度HDAC4抑制剂LMK-235处理细胞。在转染实验中,将CGN分为25 K+siNC组、5 K+siNC组、5 K+siH-DAC4-1组和5 K+siHDAC4-2组,共转染GFP标记目的细胞。用Western blot法检测p-JNK、JNK、p-c-Jun、c-Jun的表达水平,用Hoechst染色法观察并统计核固缩情况,用免疫荧光检测c-Jun磷酸化水平。【结果】Westernblot结果显示,与5 K组比较,LMK-235处理细胞后JNK、c-Jun磷酸化水平下降。核染色结果显示,与25 K组比较,5 K组核固缩率明显增多(P <0.05);与5 K组比较,LMK-235处理细胞后核固缩率明显减少(P <0.05)。与5K+siNC组比较,小分子干扰HDAC4后,HDAC4的表达下调,c-Jun的磷酸化水平降低,CGNs核固缩率明显减少(P <0.05)。【结论】抑制HDAC4通过下调JNK/c-Jun活性使神经元核固缩率减少,从而抑制神经元凋亡。

抑制HDAC4对蛛网膜下腔出血早期脑损伤SD大鼠神经行为的影响

目的观察在SD大鼠蛛网膜下腔出血动物模型中,抑制HDAC4对其早期脑损伤的影响。方法40只SD大鼠随机分为空白注射组和药物注射组各20只,于SAH造模前24h分别行侧脑室立体定位注射给药HDAC4抑制剂LMK235,在术前12h、术后12h和术后24h进行神经生物学评分,在术后24~36h行灌注,取出脑组织的额叶和颞叶皮层,利用WesternBlot检测额颞叶组织中H3及Ac-H4K5的表达来反映脑组织的乙酰化水平。结果在14例成功SAH造模的SD大鼠动物模型中(对照组8只,给药组6只),行神经功能缺损评分后进行统计,给药组的分值低于对照组;额叶及颞叶的皮层蛋白经Western Blot检测及分析,给药组的Ac-H4K5较Vehicle组增高,提示组蛋白的乙酰化水平增高;相关性分析提示组蛋白的乙酰化水平与其神经缺损评分分值的大小呈负相关。结论在SD大鼠蛛网膜下腔出血的早期脑损伤动物模型中,抑制HDAC4可改善其神经行为。