Toll样受体-4在不同人群膝关节液中的表达及其与骨性关节炎病情的关系

目的探索Toll样受体-4（Toll-like receptor-4,TLR-4）在不同人群膝关节液中的表达及其与骨性关节炎（osteoarthritis,OA）病情严重程度之间的关系。方法招募符合标准的受试者,分别纳入正常组、创伤组、轻度OA组、重度OA组,另设阴性对照组和阳性对照组,抽取各组受试者关节液,以ELISA法检测TLR-4,酶标仪读取A值,以t检验比较各组间A值的差异。结果正常组TLR-4水平和阴性对照组相当（t=1.284,P=0.210）,创伤组TLR-4表达较正常组明显增高（t=74.019,P=0.000）,位于5~10ng/mL之间。无论是轻度OA还是重度OA,TLR-4水平均高于正常组（轻度vs.正常：t=169.173,P=0.000;重度vs.正常：t=927.885,P=0.000）,但两组间比较,重度OA组TLR-4水平高于轻度OA组（t=178.186,P=0.000）,前者位于5~10ng/mL之间,后者小于5ng/mL。结论 TLR-4在正常人群膝关节液中无明显表达,在创伤性急性应激患者膝关节液中表达明显增高。在OA患者膝关节液的TLR-4表达高于正常人群,且与OA病情严重程度相关。

Toll样受体4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制

目的:探索Toll样受体(Toll like receptor,TLR)-4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制。方法:Percoll密度梯度离心法分离原代大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),流式细胞术鉴定细胞表面标志物CD34、CD44、CD54、CD90。用Transwell小室建立干细胞(上室)-成骨细胞(下室)共培养体系,在此体系下对BMSCs进行破骨细胞诱导培养。将共培养体系分为TLR-4激活组和空白组,前者以TLR-4激动剂LPS(10 ng/m L)激活,后者加入等体积PBS。在诱导培养第6天,对上室细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色,计数并比较各组破骨细胞数。同时,蛋白质印迹检测各组下室细胞悬液中核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)的蛋白表达,观察电泳条带并行定量分析。结果:密度离心法获得原代大鼠BMSCs,流式细胞分析检测显示CD34阴性、CD44、CD54和CD90阳性。TRAP染色阳性细胞为破骨细胞,细胞计数显示,TLR-4激活组破骨细胞数明显多于空白组(t=13.556,P<0.05)。蛋白质印迹结果显示,TLR-4激活组RANKL的表达明显多于空白组(t=17.630,P<0.05)。结论:在成骨细胞共培养体系下,激活TLR-4能够促进BMSCs向破骨细胞分化,其机制可能与TLR-4促进成骨细胞分泌RANKL有关。

膝关节周围骨折术后关节不稳的危险因素分析

目的探讨造成膝关节周围骨折术后关节不稳的危险因素。方法从我科2010年10月至2013年7月住院患者中选取符合纳入标准的膝关节周围骨折病例116例,其中男67例,女49例,平均年龄(47.3±14.4)岁。车祸伤54例,摔伤50例,高处坠落伤6例,机器绞伤3例,殴打伤2例,重物砸伤1例。所有患者均随访12个月。选取年龄、性别、糖尿病史、原发暴力、骨折程度、开放性损伤、韧带损伤、关节囊损伤、术中出血量、手术时间、冠状位胫股角、伸直受限、屈曲受限为初筛因素,先纳入一元Logistic回归模型,再将有关联性的因素纳入多元Logistic回归模型,寻求造成膝关节周围骨折术后关节不稳的危险因素。结果一元Logistic回归分析发现,骨折程度、开放性骨折、韧带损伤、关节囊损伤情况、术中出血量和关节屈曲受限与术后关节不稳有关,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多元Logistic回归分析发现,上述关联因素中,关节囊损伤和屈曲受限是造成膝关节周围骨折术后关节不稳的危险因素,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论关节囊损伤和屈曲受限是造成膝关节周围骨折术后关节不稳的主要危险因素。因此,在膝关节周围骨折的外科治疗过程中,积极修复损伤的关节囊,避免术中切开关节囊,术后早期功能锻炼,避免关节屈曲受限,能降低术后关节不稳的发生率,促进关节功能的恢复。

Toll样受体-3和-4对干细胞成软骨分化的影响及机制

目的探索Toll样受体(Toll like receptor,TLR)-3和-4在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨分化过程中对蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白形成的影响及机制。方法用Ficoll密度梯度离心法分离SD大鼠BMSCs,并进行传代扩增。流式细胞术检测细胞表面标志物CD34、CD44、CD54、CD90的表达进行细胞鉴定。以Western blot法检测第3代细胞的蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。再随机分为空白组、TLR-3激活组、TLR-4激活组,分别以PBS、TLR-3激动剂、TLR-4激动剂处理后,进行成软骨诱导培养。培养第14天,以阿利新蓝染色检测蛋白多糖,以免疫荧光及Western blot法检测Ⅱ型胶原的表达,以实时荧光定量PCR检测Sox-9的表达。结果 Ficoll密度梯度离心法分离所得细胞,其表面标志物表达为CD34(-)、CD44(+)、CD54(+)、CD90(+),符合BMSCs特点。分组处理前,BMSCs不表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原。经过2周成软骨诱导培养,空白组、TLR-3激活组和TLR-4激活组阿利新蓝染色均为阳性,且3组间无明显差异。免疫荧光及Western blot结果显示,3组均表达Ⅱ型胶原,但空白组表达明显低于TLR-3激活组和TLR-4激活组,且TLR组间无明显差异。PCR结果显示,TLR-3和TLR-4激活组Sox-9相对表达量较空白组增高1倍,而TLR组之间无明显差异。结论经过成软骨诱导培养,BMSCs能够形成基质蛋白多糖及Ⅱ型胶原,初步具有软骨细胞特性。TLR-3和-4对基质蛋白多糖的形成无明显作用,却能够促进Ⅱ型胶原的形成,其机制可能与TLR-3和-4对Sox-9的上调有关。

膝关节囊外复位内固定治疗胫骨平台骨折的疗效观察

目的探讨膝关节囊外复位内固定治疗胫骨平台骨折的安全性和疗效。方法以2011年7月-2013年7月收治且符合选择标准的51例胫骨平台骨折患者作为研究对象,随机分为两组。试验组17例以有限切开膝关节囊外复位内固定治疗,对照组34例以常规打开关节囊直视下骨折复位内固定治疗。两组患者性别、年龄、致伤原因、伤后至入院时间、损伤侧别以及骨折分型比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。比较两组手术时间、术中出血量、切口长度及甲级愈合率,评价手术安全性。X线片观察骨折愈合情况,测量胫股角和胫骨平台关节面塌陷程度;末次随访时采用美国特种手术医院（HSS）膝关节功能评分量表,综合评价两组手术疗效。结果与对照组比较,试验组术中出血量显著减少,手术切口缩短（P〈0.05）;但手术时间以及切口甲级愈合率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。术后两组患者均获随访,其中试验组随访时间为12-30个月,平均20.4个月;对照组为12-31个月,平均18.2个月。X线片示两组骨折均愈合,初步愈合时间比较差异无统计学意义（t=1.382,P=0.173）。两组术后12个月胫股角及末次随访时关节面塌陷程度比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;但试验组HSS总评分显著高于对照组,比较差异有统计学意义（t=3.161,P=0.003）。结论采用膝关节囊外复位内固定治疗胫骨平台骨折,可以减少术中出血量、缩短手术切口;利用关节囊的软组织牵拉复位,可以更好地恢复并协助维持塌陷的关节面,避免关节僵硬,提高术后膝关节功能。

膝关节囊对膝关节周围骨折术后膝关节功能的影响

目的 评价膝关节周围骨折治疗过程中,膝关节囊的损伤及手术切开情况对膝关节远期功能的影响。方法 选取江苏大学附属医院骨科自2010-10—2013-07诊治的膝关节周围骨折129例,原发性关节囊损伤者36例纳入关节囊损伤组,受伤时关节囊完整的93例按治疗过程中关节囊是否切开分为关节囊切开组（58例）和关节囊未切开组（35例）。比较3组末次随访时膝关节功能HSS评分、膝关节活动度、X线片测量膝关节冠状位胫股角。结果 所有患者均获得12-45（24.8±12.9）个月随访。3组间冠状位胫股角的差异无统计学意义（F=2.021,P=0.137）。3组间膝关节功能HSS总评分差异有统计学意义（F=28.732,P〈0.001）。膝关节活动度比较中,无论是屈曲还是伸直,3组间差异均有统计学意义（P〈0.05）。关节囊未切开组关节屈曲和伸直活动度优于其他2组（P〈0.05）,关节囊损伤组关节屈曲和伸直活动度最差（P〈0.05）。结论 在膝关节周围骨折的治疗过程中,尽量修复损伤的关节囊,避免术中切开关节囊,能够提高远期膝关节功能,包括关节稳定性、活动度和行走能力,从而提高治疗效果和患者生活质量。

Toll样受体4在干细胞成骨过程中的作用及机制

目的探讨Toll样受体4(TLR-4)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨过程各阶段的作用及可能机制。方法全骨髓培养法获取大鼠原代BMSCs,并采用流式细胞术鉴定。将细胞分为TLR-4激活组(A组)和空白对照组(B组)。成骨诱导培养14d后,采用Western blot法检测Ⅰ型胶原和骨钙素表达;矿化诱导培养10d后,采用碱性磷酸酶和茜素红染色观察成骨细胞染色强度,Western blot法检测β-连环蛋白表达。结果成功培养BMSCs,CD29、CD95、CD44和HLA-Ⅰ表达阳性,CD14、CD34表达阴性。与B组相比,A组Ⅰ型胶原和骨钙素表达增加,成骨细胞的染色强度减弱,β-连环蛋白表达减少(P<0.01)。结论 TLR-4能促进干细胞向成骨细胞分化,但在成骨细胞矿化阶段起抑制作用;这可能与TLR-4对Wnt信号通路的抑制有关。