DHCR7基因在胃癌中的表达及其与免疫相关基因的关系

目的探究7-脱氢胆固醇还原酶(DHCR7)基因在胃癌中的表达及其与免疫相关基因的关系。方法使用UALCAN、TIMER数据库分析DHCR7基因在不同类型肿瘤中的表达情况。使用GEPIA、TCGA、GEO数据库分析DHCR7基因在胃癌中的表达。Kaplan-Meier Plotter数据库分析DHCR7基因表达与胃癌患者预后的相关性。通过cBioPortal数据库找出与DHCR7共表达的基因,并展示这些基因中相关系数比较高的基因。对胃癌中与DHCR7表达正负相关的基因进行基因本体分析(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,首先分析DHCR7基因与CD8^(+)T细胞以及招募CD8^(+)T细胞相关趋化因子的相关性;其次分析DHCR7基因与免疫激活相关基因的相关性;最后分析DHCR7表达与胃癌患者临床病理学特征的关联。结果DHCR7基因在大多数肿瘤类型中均有高表达趋势。DHCR7基因在胃癌中的表达高于正常胃黏膜。Kaplan-Meier Plotter数据库中201790-s-at芯片结果显示高表达DHCR7组患者生存期较短。与DHCR7负相关基因的GO、KEGG通路富集分析主要富集在免疫相关功能和信号通路上,DHCR7与CD8^(+)T细胞、招募CD8^(+)T细胞相关的趋化因子以及免疫激活基因都具有负相关性。DHCR7高表达与胃癌患者年龄呈正相关。结论DHCR7在胃癌组织中呈高表达,高表达DHCR7患者预后不良,DHCR7基因能够影响胃癌免疫微环境,有望成为胃癌免疫治疗的新靶点。

附睾特异性基因的表达与调控

哺乳动物的附睾是一条高度卷曲的管道系统,附睾上皮是执行附睾功能的重要组成部分。附睾上皮蛋白质的合成与分泌,为精子提供了一个特殊的、不断改变的管腔液体环境,使其在附睾内运行过程中获得运动能力并最终达到功能成熟。附睾特异性表达的基因具有高度区域化的特征,受雄激素和(或)睾丸因子的调控,在出生后发育中呈现时空特异性的表达模式,这些都提示它们在附睾中发挥着重要而独特的作用。

人卵裂期胚胎玻璃化冻融体外培养时间对妊娠结局的影响

目的研究人卵裂期胚胎玻璃化冻融体外培养时间对妊娠结局的影响。方法对我中心进行的解冻胚胎数不超过3枚,解冻胚胎全部存活并全部移植的274例患者分为当日移植组(A组)和次日移植组(B组),比较组间临床妊娠率、种植率和流产率。结果胚胎龄为第2天(D2)的共163个周期,其中A组130个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:23.08%、11.71%和6.67%,B组33个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:27.27%、11.84%和11.11%;胚胎龄为第3天(D3)的共111个周期,其中A组94个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:36.17%、19.35%和8.82%,B组17个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:35.29%、20.45%和16.67%。D2和D3胚胎当日移植组和次日移植组之间的临床妊娠率、种植率和流产率均无统计学差异。结论延长体外培养时间不显著影响玻璃化冻融卵裂期胚胎的发育潜能,可根据需要灵活安排玻璃化冷冻胚胎的解冻时间。

一种简易的促排卵周期挽救性卵子体外成熟培养技术

【目的】探讨人类成熟卵丘细胞在未成熟卵母细胞体外成熟培养中的作用,并建立一种简易的实施技术。【方法】在控制性促排卵周期有未成熟卵母细胞时,将同周期成熟卵丘复合体切出部分卵丘细胞,用1mL注射器抽打分散细胞,贴壁培养。113个治疗周期中,298枚生发泡期卵母细胞经3种不同培养液(A、B、C)体外成熟培养(同一病人的生发泡期卵被随机分到某同一组中):第1组28个周期中73枚(A液):基础培养液+卵泡液;第2组40个周期中115枚(B液):A液+分散贴壁的卵丘细胞;第3组45个周期中110枚(C液):A液+分散贴壁的卵丘细胞+促卵泡生成激素+表皮生长因子。观察其成熟率、受精率及可用胚胎获得率等。【结果】24h成熟率:组间比较有显著性差异(A:45.2%,B:61.7%,C:78.2%,P<0.05);25～48h无显著意义。成熟卵的正常受精率在59%～67%之间,组间比较无显著差异;与第1组(54.5%,11.0%)相比,第2组(83.3%,25.2%)、第3组(90.7%,37.3%)的卵裂率和挽救率均有显著性差异(P<0.05),可用胚胎获得率组间比较依次呈现上升趋势(66.7%,82.9%,83.7%)。【结论】来自控制性促排卵周期的成熟卵丘细胞经简易吹打分散后贴壁培养,可能能协同卵泡液中或外加的生长因子,促进未成熟卵母细胞的体外成熟,而本研究技术简易有效,可用于挽救促排卵周期的未成熟卵。

精液分析:新版《世界卫生组织人类精液分析实验室技术手册》及其在精液和精液病理学研究中的应用

评论最新的、全面的精液分析指南:第5版《世界卫生组织人类精液分析实验室技术手册》(简称手册)。该手册不但描述了精液分析中常规变量的测定方法,还描述了对精子功能检测具有重要价值但不常见的其他多种检测方法。手册记录了体外受精及宫腔内人工授精过程中精液处理的方法和技术,还详述了多种精液评价的实用技术。手册对进行精液分析的实验室均有指导意义。

精液质量分析与正常生育力的概念

世界卫生组织(WHO)为对精液质量参数提供参考范围,对《世界卫生组织人类精液分析实验室技术手册》(简称手册)进行了大幅修订。这引发如何定义"正常"(不包括用此概念表示高斯分布)的问题。其可作为一个纯粹的统计学概念,使用生物学上主观设定的切点值表示异常水平,通常为末端5%的人群。"正常"的另一定义也可根据生物学上常态和非常态的概念,表示生物学功能受损的临界点。这两者都可以用于描述性流行病学,例如研究变化趋势。但在考虑生育时,精液质量和生育力(使配偶妊娠的时间)两者都是连续变量,缺乏确定的阈值。手册使用了生物学意义上的"正常",因为提供的是在12个月或更短时间内使配偶妊娠男性的精液参数分布状态。但真正需要的却是反向的相同信息:获得一个特定的精液检测结果,预期生育能力如何,确定需要大概多长时间使配偶妊娠。从流行病学研究角度考虑,研究重点主要在于内部比较,而不是参考范围。如果更关注绝对值及其功能意义,换言之,如果精液分析数据从生物学角度上得到更好的校准,这将大有裨益。

定义实验室参考值和决定限:人群,区间范围及其解读

简要概述多种分析人类精液检测结果的方法。参考区间(参考值范围)是最常用的解释临床实验结果的工具。参考值范围概念的发展,有赖于20世纪80年代临床化学专家国际联盟对这一概念的详尽阐述。这些指南要求:健康参考人群至少应包括120个健康个体,并对其进行分类,辨别最外延5%的参考值数据来确定双侧或单侧参考区间的界限值。最近,基于流行病学结果分析得出的决定限,也已用来解读分析检测结果。参考群体必须根据检验项目的临床使用要求严格定义:如果参考值范围用于评估男性生育能力,12个月内使配偶成功妊娠的男性应当是最合适的参考人群;如果用于精液检测结果的流行病学评估,随机选择的健康男性应该是最为理想的参考群体。虽然男性个体精液检测结果基于参考值和决定限无疑会在不久的将来成为解释结果的工具,但从长远看,解释精液检查结果的多因素方法或结合女性有关因素的分析,似乎是检测生育能力低下夫妇妊娠可能性的最佳方式。

妊娠期糖尿病对母鼠肠道菌群的影响

目的 探究母鼠妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)对其肠道微生态的影响,从微生物角度对GDM的早期预防与早期治疗提供参考。方法 利用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素构建GDM模型,采用16S rRNA基因高通量测序技术剖析GDM对妊娠期母鼠肠道微生态的影响。结果 GDM造模后,母鼠肠道菌群发生显著改变,肠道菌群物种多样性显著增加,肠道中厚壁菌门和拟杆菌门比例显著降低,乳杆菌和链球菌相对丰度有下降的趋势,Dubosiella、 Lachnospiraceae_NK4A136_group和Allobaculum等多种条件致病菌丰度有增加的趋势。结论 GDM会导致妇女肠道微生态失衡,增加机体血糖代谢负担,需及时监测和采取有效的干预措施。

精子相关研究何去何从——实验精液学的未来

首先祝贺《世界卫生组织人类精液分析实验室技术手册》(简称手册)第5版的出版,这是迄今为止最完善的关于精液常规检测的手册。基于对1900名"新爸爸"的精液分析结果,WHO手册发布了有重要参考价值的精子质量检测参考值范围,还详细介绍了精子功能检测的方案,并增加了关于辅助生殖和冷冻保存时精液处理的新章节。该手册是关于精液常规检测的权威描述,有可能对该领域的未来以及手册未来发展版本的实验技术进行预测。如今,已可应用空前强大的分析技术检测包括精子在内的各类细胞的生化组成。事实上,精子是进行这种分析的完美载体,因为可获得非常纯净的精子悬液,精子天然游离存在,并可以在体外受精进而启动胚胎发育。在这些检测中各种组学技术的应用以及与此匹配的功能评估应该为精液质量缺陷的研究提供生化基础。这些信息将有助于了解男性不育症的原因,并制定合理的治疗方法和可能的预防措施。

c-mos原癌基因在小鼠附睾的表达

目的研究原癌基因c-mos在小鼠附睾的表达及c-Mos蛋白在小鼠附睾上皮细胞的定位。方法采用半定量RT-PCR和间接免疫荧光的方法分别检测c-mos mRNA和蛋白在附睾不同区域的表达,并通过免疫电镜对c-Mos蛋白在附睾上皮细胞内进行精确定位。结果c-mos mRNA表达量在小鼠附睾头部最高,体部最低;仅在附睾头部管腔面检测到c-Mos蛋白表达;电镜观察见c-Mos蛋白定位在附睾上皮细胞的顶部胞质内。结论c-mos原癌基因在小鼠附睾的区域特异性表达以及c-Mos蛋白在附睾上皮细胞的定位,提示c-mos基因可能在精子成熟过程中发挥调节功能。

降低hCG的剂量不影响控制性超促排卵中卵泡的最终成熟及随后冷冻胚胎移植的妊娠结局

目的:在卵巢中等反应和高反应患者中,比较2 000 IU、3 000 IU低剂量hCG与5 000 IU hCG在控制性超促排卵(COH)过程中诱导卵泡成熟及随后冷冻胚胎移植(FET)的妊娠结局。方法:回顾性分析2 166例接受IVF/ICSI治疗的患者的临床资料,根据hCG的剂量分为3组:2 000 IU(A组,n=722),3 000 IU(B组,n=722)和5 000 IU(C组,n=722),观察比较成熟卵母细胞的比例、受精率、临床妊娠率、累计妊娠率及卵巢过度刺激综合征(OHSS)的发生率等。结果:3组患者获得成熟卵母细胞比例(89.92%,91.40%,90.20%)和受精率(79.80%,80.07%,80.51%)均无统计学差异(P>0.05)。A组hCG注射日E2水平、获成熟卵数及优质胚胎数均显著高于B组和C组。3组患者每次移植的临床妊娠率(45.95%,43.97%,44.25%)、继续妊娠率(43.17%,40.91%,42.53%)、种植率(30.74%,27.78%,29.86%)及每位患者的累计妊娠率(CPR)(58.31%,53.60%,54.85%)均无统计学差异。3组的OHSS发生率很低(0.00%,0.14%,0.28%)。结论:对于卵巢中等与高反应患者,2 000 IU hCG与5 000 IU hCG在诱导卵泡的成熟中发挥同样的效果,2 000 IU hCG不仅不影响妊娠结局,而且阻止了OHSS的发生。

降脂益生菌调节胆固醇代谢改善小鼠非酒精性脂肪肝

目的研究一种由鼠李糖乳杆菌DM9054和植物乳杆菌86066构成的降脂益生菌组合对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠胆固醇代谢的影响及其可能机制。方法 24只雄性LDLR-/-小鼠随机分为对照组、模型组和益生菌干预组。高脂饮食(HFD)15周建立小鼠NAFLD模型,造模同时干预组给予鼠李糖乳杆菌DM9054联合植物乳杆菌86066灌胃,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。实验过程中监测各组小鼠体重变化。实验结束后,检测小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL)的水平差异。检测小鼠肝脏组织病理变化。使用Realtime PCR检测小鼠肠道内法尼脂受体(FXR)mRNA、顶端膜钠依赖的胆汁酸转运体(ASBT)mRNA、纤维生长因子15(FGF-15)mRNA和三磷酸腺苷结合盒转运体G5(ABCG-5)mRNA表达水平。Western blot检测小鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)、FXR、三磷酸腺苷结合盒转运体G8(ABCG-8)、清道夫受体BI(SR-BI)、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、胆盐输出泵(ABCB-11)、纤维生长因子受体4(FGFR-4)和胆固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)蛋白表达水平。结果与模型组相比,降脂益生菌干预组小鼠体重减轻(P<0.05);小鼠血清TC、TG、LDL水平降低,HDL水平升高(P<0.05);小鼠肝脏脂肪变性和炎性细胞浸润的现象显著减少;小鼠肠道ASBT mRNA和ABCG-5mRNA表达水平明显降低(Ps<0.05),FGF-15mRNA表达水平明显升高(P<0.05),FXR mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);小鼠肝脏FGFR-4蛋白表达水平升高(P<0.05),SREBP-2和HMGCR蛋白表达水平降低(Ps<0.05),FXR、CYP7A1、SR-BI、ABCG-8和ABCB-11蛋白表达水平差异无统计学意义(Ps>0.05)。结论降脂益生菌可能通过激活FXR-FGF15通路调节胆汁酸代谢;通过下调SREBP-2表达水平,抑制HMGCR表达,减少胆固醇的生成,从而起到改善非酒精性脂肪肝的作用。

非酒精性脂肪性肝病患者肠道菌群及生物化学指标相关性分析

目的探讨不同类型非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者肠道菌群结构与生物化学指标改变的相关性,以期为NAFLD临床诊断和防治提供依据。方法随机纳入NAFLD患者(NAFLD组)48例、NAFLD合并2型糖尿病患者(NAFLD合并2型糖尿病组)40例和体检健康者(健康组)30例,检测其体质量指数及血清中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、尿酸和空腹血糖,用酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子-α和空腹胰岛素并计算胰岛素抵抗指数。用16SrDNA高通量测序检测3组对象肠道菌群,最后综合分析各研究因素间的相关性。各组之间的比较采用χ^2检验,符合正态分布且方差齐的多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较用LSD法,不符合正态分布或方差齐性的多组间比较采用K-W秩和检验。结果NAFLD组体质量指数、天冬氨酸氨基转移酶、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、尿酸、肿瘤坏死因子-α、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数均高于健康组,高密度脂蛋白低于健康组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与NAFLD组比较,NAFLD合并2型糖尿病组年龄、空腹血糖和胰岛素抵抗指数升高,体质量指数、天冬氨酸氨基转移酶、总胆固醇和高密度脂蛋白降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与健康组比较,NAFLD组厚壁菌门丰度降低(P=0.016),NAFLD合并2型糖尿病组厚壁菌门丰度降低(P<0.001)。NAFLD合并2型糖尿病组拟杆菌门丰度高于健康组,差异有统计学意义(P=0.006)。在"属"水平,NAFLD组Roseburia、Subdoligranulum的丰度降低,且NAFLD合并2型糖尿病组Roseburia明显降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05);此外,NAFLD合并2型糖尿病组Faecalibacterium、Blautia、Anaerostipes、Fusicatenibacter丰度均低于健康组,差异均有统计学意义(P值均<0.001)。Fusicatenibacter、Blautia、Anaerostipes、Faecalibacterium、Roseburia均与空腹血糖、胰岛素抵抗指数水平负相关(r<0,P<0.05),与高密度脂蛋白水平正相关(r>0,P<0.05);Fusicatenibacter与肿瘤坏死因子-α水平负相关(r=-0.211,P=0.044);Lachnoclostridium与体质量指数、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平正相关(r>0,P<0.05);Fusobacterium与天冬氨酸氨基转移酶水平正相关(r=0.245,P=0.019);Escherichia-shigella与空腹血糖、低密度脂蛋白、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶水平正相关(r>0,P<0.05);Megamonas与高密度脂蛋白水平负相关(r=-0.231,P=0.027)。结论NAFLD患者肠道菌群结构发生了改变,部分菌属的改变与胰岛素抵抗和炎症反应有关,这可能成为治疗NAFLD的新"靶点"。

自制冷冻片微型载体(Strawtop)微量精液冻存效果的实验研究

目的对自制冷冻片微型载体(Strawtop)法与麦管法冷冻保存人微量精液的冻存效果进行系统评价。方法采用前瞻性研究分析2018年5月1日至2018年6月30日期间于同济大学附属东方医院生殖医学中心行卵胞质内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗的患者捐献的部分精液样本,比较自制Strawtop法与麦管法冷冻人精子复苏后的冷冻复苏率、DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)、超显微结构和受精能力与胚胎发育情况。结果Strawtop法冻存人精子的冷冻复苏率(46.8%±17.1%)显著高于麦管法(23.1%±13.7%,P=0.001);与冷冻前(18.9%±11.6%)相比,麦管法(33.5%±15.0%)冷冻精子复苏后的DFI显著增加(P=0.019),而Strawtop法冻融入精子的DFI(23.4%±11.7%)与冷冻前相比差异无统计学意义(P=0.375);Strawtop法对冷冻精子超显微结构的损伤低于麦管法;Strawtop法冻融精子、麦管法冻融精子和新鲜精子的正常受精率、卵裂率和受精后48 h(第2日)的优质胚胎率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Strawtop法冷冻人微量精液冷冻复苏率高于麦管法,复苏精子的损伤较小,且复苏后无需离心洗涤即可直接用于ICSI,具有较高的临床应用价值。