利用单因子和正交设计双重实验方法优化广藿香ISSR-PCR实验体系

为了建立广霍香优化的ISSR-PCR反应体系,首先通过单因子试验选定其各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验设计的方法,对影响广藿香ISSR-PCR反应的5种因素4水平进行优化试验。结果表明:广藿香ISSR-PCR的优化反应体系最终确定为:在25μL反应体系中,含DNA模板40 ng,Mg2+浓度为2.5 mmol.L-1,引物浓度为0.3μmol.L-1,TaqDNA聚合酶用量为1.5 U,dNTPs浓度为150μmol.L-1。PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,然后按94℃变性45 s,52.7℃退火45 s,72℃延伸90 s,进行40个循环,最后72℃延伸7 min,4℃保存。

广藿香组织培养快繁技术的研究

以广藿香幼嫩叶片为外植体,通过愈伤组织途经诱导出大量丛生芽,然后将丛生芽分别转接到含有不同质量浓度6-BA的增殖培养基和含有不同质量浓度IBA的生根培养基上,筛选出最适增殖培养基:MS+6-BA 0.1～0.2 mg.L-1,最适生根培养基:1/2 MS+IBA 0.25～1.0 mg.L-1。广藿香组培苗株高达5～6 cm时进行炼苗移栽,移栽成活率高达95%。

利用单因子和正交设计双重实验法优化鹧鸪茶RAPD-PCR反应体系

为了建立鹧鸪茶RAPD-PCR的优化反应体系,首先通过单因素试验选定其各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验设计方法,对影响鹧鸪茶RAPD-PCR反应的5种因素进行4水平优化试验。并运用SAS软件对试验结果进行了分析,最后确定优化的RAPD-PCR反应体系为:10×Buffer缓冲液2.5μL+Mg2+2.5mmol/L+dNTPs0.2mmol/L+TaqDNA聚合酶1.5U+S28引物0.48mmol/L+80ng模板,定容至25μL。PCR扩增程序为:94℃预变性4min,然后按94℃变性30s,38℃退火45s,72℃延伸120s,进行45个循环,最后72℃延伸10min;16℃保存。该优化的RAPD-PCR反应体系具有良好的稳定性和重现性,可应用于鹧鸪茶不同居群间亲缘关系和遗传多样性分析。

脂氧合酶基因家族成员在薄皮甜瓜挥发性香气物质合成中的作用

目的与意义:薄皮甜瓜可以作为研究果实成熟特性尤其是香气特性的模式植物.甜瓜成熟果实中挥发性香气物质主要为醛类、醇类和大量的酯类物质,这些香气物质的组成和含量与甜瓜品种密切相关.香气浓郁的甜瓜通常含有大量直链和支链酯类,其中直链酯类是薄皮甜瓜的主要香气物质.植物中直链酯类主要通过脂肪酸途径进行,脂氧合酶(LOX)是脂肪酸途径中第一个关键酶.由于LOX为多基因编码,其基因家族成员参与不同的生理进程,LOX在酯类物质合成过程中的作用还不明确.因此有必要通过不同香气类型甜瓜的香气成分分析和果肉圆片孵育试验,检测LOX酶活性和香气物质成分,并根据己确定甜瓜的LOX基因家族成员序列进行基因的表达差异分析,来研究哪些LOX基因家族成员参与了薄皮甜瓜香气物质的合成过程.为明确LOX在薄皮甜瓜直链酯类合成中的作用以及哪些基因参与直链酯类合成奠定基础.

甜瓜13-脂氧合酶CmLOX18在果实中可能参与C6挥发性物质的合成

目的与意义:浓郁的香气作为薄皮甜瓜最重要的风味特性之一,是近年来研究甜瓜果实品质特性的热点.先前的研究发现,薄皮甜瓜果实中直链酯类含量高达70%,且大部分被认为是通过脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)途径合成.脂氧合酶由18个基因成员编码,而且18个成员中,CmLOX18在成熟果实中高度表达,然而目前关于其功能的研究未见报道.因此,笔者通过酵母真核表达系统和转基因技术,解析CmLOX18在果实挥发性物质合成中的功能,希望能够丰富甜瓜果实香气合成的分子机制.

植物脂氧合酶蛋白特性及其在果实成熟衰老和逆境胁迫中的作用

脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)作为植物脂肪酸氧化途径的关键酶,是多基因家族,在植物生长发育中起重要作用。本文综述了脂氧合酶的蛋白结构特征、催化反应的位置特异性、分类及其代谢途径,重点介绍了LOX代谢途径中的氢过氧化物裂解酶(hydroperoxide lyase,HPL)支路和丙二烯氧化物合酶(allene oxide synthase,AOS)支路,最后阐述了LOXs在植物成熟衰老和逆境胁迫中的作用,为通过基因工程手段改善果实品质以及提高植物抗逆性提供了一定的理论依据。