可吸收生物材料聚羟基乙酸与滑膜细胞共同构建组织工程化腱鞘

目的:目前对于腱鞘的修复主要运用网腱膜、自体静脉和生物膜等腱鞘的替代品,其缺点是无生物学功能,不能达到真正意义上的结构与功能的重建。实验采用可吸收生物材料聚羟基乙酸与滑膜细胞共同构建组织工程化腱鞘,验证其可行性。方法:实验于2005-09/2007-03在上海市第九人民医院组织工程实验室完成。取Leghorn鸡滑膜腱鞘,体外消化培养获得滑膜细胞并大量扩增后,取第2代滑膜细胞与聚羟基乙酸生物材料复合,形成大小1.5cm×1.0cm,厚1.0mm左右的细胞生物学支架,体外培养6d后,将支架包绕在硅胶管上回植到裸鼠皮下及将支架直接回植于鸡爪原位腱鞘缺损处,以未接种细胞的单纯聚羟基乙酸包绕硅胶管为对照组,体内培养3,6周后取材观察。整个实验过程中对滑膜细胞及两种情况下构建形成的组织工程化腱鞘进行形态学和组织学观察。结果:①所获得的滑膜细胞分为A、B型滑膜细胞,A型滑膜细胞形态呈巨噬细胞样,B型滑膜细胞形态呈成纤维样,且随着滑膜细胞的扩增,A型滑膜细胞比例逐渐减少,到第2代时,基本全部为B型细胞。②在裸鼠皮下构建的组织工程化腱鞘第3周、第6周时有新生组织产生,且具有弹性,失去支撑后仍可保持形状,而单纯聚羟基乙酸对照组在第3周时只有少量新生组织,到第6周时新生组织消失。③在Leghorn鸡原位处构建的组织工程化腱鞘第3周时内壁光滑,与肌腱无粘连,第6周时形成与正常腱鞘相似鞘膜。结论:应用组织工程技术可以构建与正常组织相似的组织工程腱鞘。

在装配序列规划中子装配体识别方法研究

提出了基于关联图与基础零件识别子装配体的方法。首先从有向图识别基础零件。通过模糊数学理论建立几何和工艺优先约束因素相对于装配难度的隶属函数,以综合函数值作为权值得到赋权配合关联图。然后通过设置难度系数和以基础件为核心对节点进行合并与组装得到简化配合关联图。在此基础上通过一定的规则和基础零件识别子装配体。最后通过实例验证方法的可行性。

肌腱构建与组织工程技术研究新进展

本文综述组织工程化肌腱领域中取得的多项成果 ,如肌腱组织替代物、种子细胞、组织工程用生物材料及转基因技术应用研究等。论述建立生长、增殖可调的肌腱种子细胞系可行性。

基于轻量化三维产品模型的装配建模技术研究

将装配工艺信息模型包含的数据分为对象信息、约束信息和过程信息三类,对于不同的信息采用不同的模型方式表达。提出了将产品的三维模型先转化成轻量化模型,以轻量化模型为基础进行装配工艺信息建模的方法,并给出了轻量化装配信息模型的整体框架。轻量化的特点和模型信息的完善性,使得该模型完全可以作为装配工艺规划通用装配信息模型来使用。最后通过实例验证了该方法的有效性。

头皮撕脱伤后多尿症状的分析及处理

目的探讨分析头皮撕脱伤患者多尿症状产生的原因及处理方法。方法对1999年1月至2006年8月收治的34例头皮撕脱伤患者的临床资料进行回顾性分析。结果本组34患者中,7例出现多尿等临床表现,平均尿量约6100ml。而其中1例出现尿崩症的临床表现,经及时对症处理后治愈。结论积极控制原发疾病,纠正水电解质紊乱,可以有效地预防严重的并发症发生。

用PGA支架体外构建人口腔黏膜固有层的实验研究

目的:探讨利用可吸收生物材料聚羟基乙酸(polyglycolicacids,PGA)和口腔黏膜成纤维细胞(oralfibroblast,OFC)在体外构建组织工程化口腔黏膜固有层的可能性。方法:取细胞经体外培养,扩增至第3代,与PGA混合培养,形成细胞—生物材料复合物,每2d换液一次。动态观察细胞形态和粘附生长状况,于体外培养1周左右,取组织作电镜观察、组织学和RT-PCR检测。结果:复合物体外培养6d,OFC粘附在生物支架上,沿PGA纤维纵轴方向向两极伸展,细胞分泌基质并形成拉网状结构。HE染色和Masson染色均提示胶原纤维形成,RT-PCR显示胶原成分主要为Ⅰ型胶原。结论:应用PGA支架可以在体外成功构建口腔黏膜固有层组织。

人肌腱与皮肤组织及其细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的比较研究

目的 探讨利用皮肤成纤维细胞作为肌腱构建种子细胞的可行性。方法 取外伤病人术中修剪的多余肌腱和皮肤组织,一部分用于石蜡包埋做组织学检测,一部分用酶消化法培养细胞,取第2代细胞进行细胞学检测。本实验采用偏光显微镜、免疫组织化学技术对人正常肌腱组织和皮肤组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达进行比较;采用免疫细胞化学、免疫细胞荧光、RT-PCR技术从蛋白水平、RNA水平比较第2代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原的情况。结果 偏光显微镜下可见肌腱组织中以粗大的Ⅰ型胶原为主,而皮肤组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原交错排列。免疫组织化学和显示石蜡包埋的肌腱组织和皮肤组织的Ⅰ型胶原染色均为强阳性,肌腱组织Ⅲ型胶原染色阴性,皮肤组织Ⅲ型胶原染色阳性。免疫细胞化学和免疫细胞荧光显示第2代肌腱细胞和皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原染色均为阳性。RT-PCR灰度分析结果示肌腱组织和皮肤组织Ⅰ型胶原灰度比值为1.25±0.03,Ⅲ型胶原肌腱组织不表达。第2代肌腱细胞与皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原灰度比值为1.09±0.05,Ⅲ型胶原灰度比值为0.93±0.08。结论 人正常肌腱组织和皮肤组织中在胶原组成上均以Ⅰ型胶原为主。第2代人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞的生物学特性相近,均合成Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原。皮肤成纤维细胞很有?

丹参对培养的人瘢痕成纤维细胞生长和胶原形成的影响

目的 :探讨丹参对增生性瘢痕成纤维细胞 (FB)及胶原形成的影响。方法 :通过体外培养正常皮肤和瘢痕组织的FB ,以丹参 1 5mg·mL-1和 3 0mg·mL-1培养液培养后 ,检测FB的生长情况及其羟脯氨酸含量。结果 :与空白对照组比较 ,丹参 2个剂量组对正常皮肤FB生长及其羟脯氨酸含量无显著影响 (P均 >0 0 5 ) ;而对增生性瘢痕组织FB生长具有显著抑制作用 ,并使其羟脯氨酸含量降低 ,对于前者 ,丹参 2个剂量组比较无显著差别 ,对于后者含量 ,丹参 2个剂量组之间有极显著差别 (P<0 0 1)。结论

生长因子在人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞中的表达差异

目的 对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究。方法体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,观察细胞的形态特点;用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行检测及比较。结果所测生长因子中除转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、类胰岛素生长因子-结合蛋白3(IGF-BP3)外,其余在肌腱细胞和成纤维细胞中的表达均无明显的差异。结论 人成纤维细胞与人肌腱细胞的生长因子表达基本相似,通过对皮肤成纤维细胞的某些特性的改造,可以使其成为构建组织工程化肌腱的种子细胞。

计算机辅助设计定制化植入体在复杂眶周畸形治疗中的应用

目的探讨计算机辅助设计定制化植入体,对复杂眶周畸形患者治疗的准确性和安全性。方法本文回顾了2009年1月至2012年12月,于我科接受计算机辅助设计定制化植入体治疗的眶周复杂畸形患者共106例,将患者术后6月CT扫描重建影像与术前计算机模拟设计行表面几何学差异分析,判断植入体与术前设计间的差异,并统计患者并发症的发生情况。结果 106例患者中,采集6个月后随访CT共105例,植入体形态平均误差(1.32±1.64)mm,85.72%的患者误差小于2 mm。除1例患者由于反复的额窦感染,在术后2个月取出植入体,其余患者均未发生严重的并发症。结论计算机辅助定制化植入体,治疗眶周复杂畸形高效、准确、安全,可作为复杂眶周畸形临床治疗的推荐方案之一。

口内入路下颌角弧形截骨术矫正重度下颌角肥大

目的探讨口内入路下颌角弧形截骨术对矫正重度下颌角肥大的疗效。方法应用口内入路下颌角弧形截骨术对20例重度下颌角肥大患者进行矫正,通过X线头影测量,比较术前术后数据变化及容貌改变来评价疗效。结果术前面下部宽度12.221±0.765cm,术后面下部宽度10.797±0.688cm;术前下颌角角度111.209±7.946°,术后下颌角角度129.491±6.277°。手术前后比较有明显差异,术后数据接近正常人群。所有患者容貌较术前有明显改观,未出现下颌骨骨折,下齿槽神经损伤。结论针对重度下颌角肥大患者采用口内入路下颌角弧形截骨术,结合良好术前设计截骨线,可以有效矫正下颌角肥大,取得良好效果。

灌区排水沟系水质模拟分析

为研究农田排水对灌区排水沟出口水质的影响,在已有一维水质模型的基础上建立了沟道系统水质模型,对灌区排水沟系水质进行模拟分析。并结合实例进行验证,结果表明,实测资料与计算结果吻合较好,相对误差均在15%以内,模拟值与实测值的泊松相关系数均在0.85以上,在显著性水平α=0.05时,检验统计量|t︱均小于临界值tα/2,所得模型合理;运用模型推求岔河小流域农田控制排水水量和总氮、硝态氮、铵态氮3类污染物浓度阈值的拟合函数,为农田控制排水提供了一定的参考与决策工具。

体内构建组织工程腱鞘的初步研究

目的研究体内构建组织工程化滑膜腱鞘,及其在预防肌腱粘连方面的作用。方法取Leghorn鸡48只,随机分为3组。实验组(n=16),切除肌腱外周滑膜腱鞘,采用自身滑膜细胞-PGA复合物修复缺损;对照组1(n=16),切除肌腱外周滑膜腱鞘后,采用空白PGA支架修复缺损;对照组2(n=16),切除肌腱外周滑膜腱鞘后未修复缺损腱鞘。于术后2周、5周取材,采用大体观察、组织学检查和生物力学测试等方法,研究组织工程腱鞘构建情况,分析肌腱表面粘连情况。结果大体观察及HE染色可见实验组形成组织工程化腱鞘,肌腱与腱周组织间空隙明显,较对照组粘连形成较少。力学检测在0.1N的拉力下,实验组肌腱拉伸位移3.24±0.22mm,优于对照组1和对照组2(分别为2.49±0.19mm,2.28±0.23mm)。结论采用组织工程技术可以成功构建组织工程化滑膜腱鞘,并具有正常腱鞘结构,对于减轻肌腱粘连具有一定作用。

颅面部骨纤维异常增生症28例临床分析

目的探讨颅面部骨纤维异常增生症的手术方法及疗效。方法2006年至今,28例颅面部骨纤维异常增生症患者,均手术切除部分增生骨质,修正形态。伴有视神经压迫症状的患者还予以视神经减压术。结果28例患者术后外形满意,随访6个月至5年,无复发病例。结论颅颌面骨纤维异常增生症手术切除部分增生骨质,即可获得较好的疗效,患者面形改善明显。青春期后手术复发率小,为手术最佳时间。

新型结核病疫苗的研究与应用进展

结核病是由结核杆菌复合群引起的一种人兽共患病。全球约三分之一的人感染结核,约10%发展为活动性结核病,严重者导致死亡。动物结核病除导致动物生产的损失外,还是人结核病的重要来源。BCG是人结核病预防的唯一疫苗,但存在一定缺陷。已报道了多种新型结核疫苗,如重组BCG、减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗,病毒活载体疫苗等,其中一部分已经进入人体临床试验。动物结核疫苗的研究刚刚起步。獾BCG疫苗是第一个获执照的动物结核疫苗,牛、鹿、刷尾负鼠等动物的结核疫苗正在研究之中。但目前为止,还没有一个能取代BCG的商业化新型疫苗,结核疫苗研发工作任重道远。

骨缝牵引成骨动物模型的建立及应用

目的建立兔颅骨矢状缝牵引成骨的动物实验模型,评价该模型的可行性,并探讨局部应用rhBMP-2对牵引成骨的作用。方法以微型牵引种植钉(Miniscrew implants,MSI)作支抗,镍钛弹簧为牵引力源,建立MSI兔颅骨矢状缝弹力牵引成骨模型。应用该牵引系统对11周龄的新西兰白兔作矢状缝牵引成骨。将动物随机分为实验组(牵引+rh BMP-2,n=7),对照组(单纯牵引,n=7)。牵引29天,于0、5、11、17、23及29 d,应用X线及Micro-CT评价骨缝牵开情况;第7、27天注射四环素,第17天注射钙黄绿素,作为术后荧光组织切片观察标记。观察动物对该牵引成骨系统的耐受性,比较各组骨缝牵开的距离,并观察矢状缝组织形态学变化,验证兔颅骨矢状缝牵引成骨模型的可行性。结果MSI弹力牵引系统成功率为86%,牵引成骨实验可顺利完成。对照组矢状缝牵开的距离大于实验组(D29),两组矢状缝牵开的距离随着牵引持续时间的增加而递增,但骨缝牵开呈现先快后慢的趋势。骨组织形态学显示,两组骨缝间均有新生骨组织形成,说明该牵引成骨模型既能有效牵开骨缝,也能诱导骨缝间成骨。而实验组骨缝间新生骨组织形成速度大于对照组。结论本实验采用自行研制的微型种植钉MSI弹力牵引系统,成功建立了兔矢状缝弹力牵引成骨模型。骨缝牵引过程中,局部应用rhBMP-2可促进骨缝成骨,但导致了骨缝融合。

改良横切纵缝法矫正内眦赘皮

目的探讨应用改良横切纵缝法矫正内眦赘皮的方法及疗效。方法 2010年3月至2013年4月,对69名患者采用改良横切纵缝法矫正内眦赘皮,随访并评估术后效果。结果本组中53例患者术后随访6~18个月,内眦均已完全敞开或大部分敞开,内眦处瘢痕不明显,无复发,效果满意。结论改良横切纵缝法矫正内眦赘皮简单有效,能减轻术后瘢痕并减少复发。

FGF-2与BMP-2在颅缝细胞成骨分化中的相互作用

目的探讨碱性成纤维生长因子2(FGF-2)与骨形成蛋白2(BMP-2)在颅缝细胞成骨分化中的相互作用及其机制。方法获取新生SD大鼠颅骨矢状缝及冠状缝处颅缝细胞,在培养体系中添加FGF-2,观察BMP-2表达情况。同时在培养体系中添加FGF-2及BMP-2,ALP染色、矿化染色、qPCR检测成骨标志物,观察颅缝细胞成骨分化情况。添加BMP-2抑制剂Noggin后,观察颅缝细胞成骨分化的转归。结果FGF-2可促进BMP-2在颅缝细胞中的表达,呈浓度依赖性及时间依赖性;两者同时作用颅缝细胞可促进其晚期成骨分化,抑制其早期成骨分化。Noggin阻断BMP-2信号通道后,FGF-2及FGF-2+BMP-2促进颅缝细胞晚期成骨分化作用均减弱。结论BMP-2是FGF-2调控颅缝细胞晚期成骨分化不可或缺的下游因子。

利用增强型绿色荧光蛋白体外表达探讨逆转录病毒转染软骨细胞的最佳条件(英文)

背景:增强型绿色荧光蛋白是目前最佳标记分子,具有荧光特异性高、易于检测等独特的优势,利用基因工程技术构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,转染同种异体软骨细胞值得研究。目的:构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,探讨转染同种异体软骨细胞的最佳条件。设计:随机对照观察。单位:上海交通大学。材料:选用30只出生1周的新西兰白兔,雌雄不限,均购自中国科学院实验动物研究中心。双嗜性逆转录病毒包装细胞系PT67购自Clontech公司;小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞购自ATCC公司;DH5a大肠杆菌由本实验室保存;逆转录病毒载体pLNCX2购自Clontech公司;带有增强型绿色荧光蛋白的pEGFP-C1质粒由中科院细胞所丛笑倩教授惠赠。方法:实验于2005-08在上海交通大学完成。分离提取并培养新西兰白兔软骨细胞,利用基因工程技术构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,转染培养后的新西兰白兔软骨细胞,荧光显微镜观察转染的效果。于直径10cm的平皿接种6×105个软骨细胞,分别立即转染及接种12,24,48h后转染逆转录病毒-EGFP,1周后作流式细胞仪测定EGFP表达效率,观察逆转录病毒转染原代软骨细胞最佳时机。软骨酶消化后的软骨细胞接种24h后转染逆转录病毒,分别于第2,3,4,5,6天加250mg/LG418进行筛选。PBS洗涤后作流式细胞仪检测其效率,观察G418筛选的最佳时机。主要观察指标:①EGFP-pLNCX2转染效果。②逆转录病毒转染原代软骨细胞及G418筛选最佳时机。结果:①重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2转染原代兔软骨细胞,经G418初步筛选而获得的高表达格局,可见软骨细胞经过筛选和表达绿色荧光蛋白后,保持正常的形态学,细胞伸出伪足贴壁,基质分泌旺盛。②逆转录病毒转染原代软骨细胞的最佳时机为细胞接种培养后24h,第7天用流式细胞仪测定转染效率为19.14%,G418筛选的最佳时机为培养后第5天,第7天测定表达效率提升为55.75%。结论:重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2能有效地转染软骨细胞,逆转录病毒转染原代软骨细胞的最佳时机为细胞接种培养后24h,G418筛选的最佳时机为培养后第5天。

新型重组卡介苗的免疫原性研究

结核病是一种慢性消耗性人畜共患病,不仅严重影响人类的身体健康,还对畜牧业造成惨重的经济损失。卡介苗是目前官方唯一认可使用的疫苗,但仅对儿童具有较好的保护力;部分国家也将卡介苗应用于动物结核病的预防中。但效果一般。本研究以小鼠为实验模型,对前期通过基因工程方法构建的增强型重组卡介苗GM-CSF-Ag85B-Rv3872-CFP10-ESAT6-BCG的免疫效果进行了评价,证实了该候选疫苗对小鼠的安全性,且能够产生针对BCG外源蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫,对结核病具有一定的保护作用。