短发夹RNA下调Notch2表达对食管鳞癌Eca109细胞增殖的影响

目的 :探讨通过转染短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)下调Notch2表达的方法阻滞Notch2信号通路对食管鳞癌Eca109细胞增殖的影响。方法 :首先应用实时荧光定量-PCR法检测包括食管鳞癌Eca109细胞在内的多种肿瘤细胞中Notch受体的表达水平。然后将无效shRNA(Control-shRNA)和针对Notch2基因的shRNA(Notch2-shRNA)分别转染高表达Notch2的Eca109细胞。实时荧光定量-PCR法检测转染后Notch2及其下游靶基因Hes1的mRNA表达,蛋白质印迹法检测转染后Notch2蛋白的表达,CCK-8(cell counting kit-8)法检测Eca109细胞增殖情况,FCM法检测细胞周期变化。结果:食管鳞癌Eca109细胞中Notch2 mRNA高表达。与Control-shRNA转染组相比,Notch2-shRNA转染后Eca109细胞中Notch2 mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.01),下游靶基因Hes1的mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Notch2-shRNA转染72 h后,Eca109细胞增殖率明显降低(P<0.05);G0/G1期细胞所占百分率为(70.66±6.25)%,明显高于Control-shRNA组的(45.34±1.88)%和未转染对照组的(47.10±1.70)%(P<0.01)。结论 :Notch2在体外培养的食管鳞癌Eca109细胞中高表达,下调Notch2表达可以通过诱导G0/G1期细胞阻滞而减缓Eca109细胞的体外增殖。