从石蜡包埋组织高效提取RNA的优化及Shh的RT-PCR检测

从石蜡包埋组织中提取高质量的RNA是对肿瘤实体组织进行分子生物学研究的重要方法之一 .利用人的胃肠道肿瘤材料 ,通过蛋白酶K消化 ,经酚 氯仿、异戊醇抽提去蛋白及异丙醇沉淀 ,优化了 1套从石蜡包埋组织中提取RNA的方法 ,提高了所提取RNA的质量和产量 .所得RNA经电泳检测 ,并进行RT PCR扩增Shh(sonichedgehog)信号分子 ,结果良好 .故认为此提取RNA的方法值得推广 .

胫骨前肌的神经支配及其各肌肉单元间的功能联系

目的:以胫骨前肌为例,探讨支配各肌肉单元的初级神经分支的感觉成分在脊髓后角传入位点的空间排列关系;探讨相邻的肌肉单元间及其协同肌长伸肌间的功能联系。方法:分离胫骨前肌、长伸肌及其初级神经分支(TA1、TA2、EHL);打开椎管,暴露L4、L5背根,在其进入脊髓处按前后顺序平分为5份;应用电生理技术,于L4.1～L5.5背根各分支上记录各初级神经分支的传入电位。单脉冲刺激TA1,依次记录TA2及EHL上的反射性传出电位,并进行平均叠加处理。结果:①TA1的传入电位在L4.1～L5.2脊髓节段均有分布,其中在L4.2、L4.3的峰值最大,平均幅值分别为(97.5±3.7)μV、(50±2.2)μV;TA2在脊髓的传入分布同TA1有重叠,但峰值在L4.3、L4.4最大,平均幅值分别为(70±3.4)μV、(45±1.8)μV。EHL的传入性电位分布于L4.2～L5.3,峰值位于L4.4、L5.1,平均幅值均为(40±0.5)μV。统计表明,胫骨前肌各初级神经分支及长伸肌初级神经分支感觉成分在脊髓后角的传入位置有明确的顺序性,P<0.001;②刺激TA1,可在TA2记录到反射性传出电位,平均幅值(36.89±3.25)μV,潜伏期为(10.16±1.07)ms。当刺激幅度增至0.5V时,在EHL上也记录到反射性电位,平均幅值(29.03±2.24)μV,潜伏期为(13.75±1.16)ms。结论:支配骨骼肌的初级神经分支的传入传出系统在?

慢性痛大鼠背根神经元基因表达的研究

目的研究与慢性痛相关基因的特异表达,比较大鼠背根神经节损伤神经元与正常神经元之间基因表达的差异,以寻找构成神经病性疼痛的内在因素。方法应用mRNA差异显示方法从损伤背根神经节中寻找特异表达的基因。结果损伤侧背根节中cDNA条带(25.75±4.7)明显多于对照侧(18.0±5.0)。反向杂交后进行亚克隆得到10个含插入片段的阳性质粒,并对其中4个进行测序。结论神经轴突损伤可导致胞体基因表达改变,其中某些可能与痛觉异常有关,也可能与细胞结构恢复及免疫功能改变有关。

用差减cDNA文库筛选由热激导致的小鼠睾丸中差异表达的基因

采用抑制性差减杂交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)方法,构建正常和热激小鼠睾丸组织的差减cDNA文库,以期筛选出小鼠生精过程中对热敏感的基因。分别从正常和热激小鼠睾丸组织提取总RNA,反转录成cDNA,以正常小鼠睾丸组织cDNA作为待检组织(tester),以热激小鼠睾丸组织cDNA作为驱动组织(driver),经过2轮杂交和抑制性PCR扩增,产物与T载体连接,经蓝白斑筛选,提取质粒,经EcoRI酶切鉴定插入片段并测序,由此构建了2种组织间差异表达基因的差减cDNA文库。用半定量RT-PCR方法,进一步验证了该文库中差减出的基因基本上为差异表达的基因。对随机挑选其中的932个克隆测序,对有效测序的565个基因序列与GenBank数据库中发布的序列进行同源性比较,大部分片段都可以检索到同源序列。结果显示,cPGES/p23等13个基因热激后表达量上调;septin2等120个基因热激后表达量下调。其中cPGES/p23为本研究中首次发现的小鼠生精过程中对热敏感的基因。