基于特征图谱及多成分定量的首乌藤饮片与标准汤剂量值传递规律研究

本文建立首乌藤的含量测定方法和指纹图谱评价方法,研究首乌藤饮片到标准汤剂的量值传递规律。收集全国主产地和道地产地具有代表性的20批首乌藤药材,按《中国药典》2020年版规定制备成首乌藤饮片,并按《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》制备成首乌藤标准汤剂;采用HPLC建立适用测定含量及指纹图谱方法,以转移率、出膏率及指纹图谱相似度为指标,分析首乌藤饮片到标准汤剂的量值传递规律。结果显示,20批首乌藤标准汤剂出膏率为10.4%~16.1%,均值为12.9%,均位于均值的±30%范围内。除了四川产地的样品外,其余产地首乌藤饮片及其标准汤剂HPLC对照指纹图谱相似度均良好(>0.9),且二者具6个共有峰,并通过对照品指认其中的4个峰分别2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚。四个已知成分的转移率分别为26.58%~53.07%(2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)、12.37%~42.84%(大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷)、3.83%~18.71%(大黄素)、0.35%~4.13%(大黄素甲醚)。本文建立了首乌藤饮片及其标准汤剂含量测定方法和指纹图谱方法,阐明了二者之间的化学成分的量值传递规律,为首乌藤水提物及其配方颗粒质量控制提供参考。

基于指纹图谱结合化学计量学的不同产地首乌藤标准汤剂研究

目的:通过指纹图谱结合聚类分析等统计学方法针对首乌藤标准汤剂质量标准,探究不同产地首乌藤标准汤剂的差异成分,为其质量标准制定提供据。方法:首先通过前处理考察得到的最佳指纹图谱制样方法,标定20批首乌藤标准汤剂的指纹图谱共有峰,然后结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)评价各共有峰相似度,最后结合化学模式识别方法,筛选出不同产地的差异性标志物。结果:20批首乌藤标准汤剂含有8个共有峰,其相似度评价值均在0.85以上,其中共指认出4个色谱峰;通过聚类分析和主成分分析将20批样品分为4类,同产地样品为一类;根据偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)分析筛选可知,不同产地的主要差异标志物分别是峰1(2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)、6、7(大黄素)、8(大黄素甲醚)。结论:本研究所建立的指纹图谱方法及差异性标志物的研究可为首乌藤标准汤剂及其制剂的质量标准的提升提供参考。

不同产地宽筋藤药材质量研究

目的:建立宽筋藤药材UPLC特征图谱及含量测定方法,对不同产地宽筋藤药材进行综合评价。方法:对21批不同产地宽筋藤药材进行特征图谱及含量同法测定,并结合聚类分析、偏最小二乘法分析对其质量进行评价。结果:所建立的特征图谱共确定了20个共有峰,并通过对照品比对指认了其中2个成分,分别为紫丁香苷和木兰花碱,聚类及偏最小二乘法分析显示21批样品可以分为两类,含量测定结果则显示不同产地之间的样品含量差异较大。结论:所建立的方法科学合理,能更全面反映不同产地宽筋藤药材的质量,为宽筋藤药材的质量控制提供了参考。

不同产地首乌藤指纹图谱及4种成分的含量测定

目的 建立首乌藤药材高效液相色谱指纹图谱,并同时测定4种有效成分的含量,评价不同产地首乌藤药材质量的差异。方法 采用高效液相色谱法进行测定,色谱柱为Waters Xselect HSS T3 C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,流速为1.0m L·min^(-1),柱温为30℃,波长为290 nm,进样量为10μL;建立15批首乌藤药材指纹图谱,通过对照品比对,对共有峰进行指认,并对4种有效成分的含量进行测定;对15批首乌藤药材指纹图谱进行相似度评价和主成分分析(PCA),并利用正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)寻找不同产地首乌藤药材的差异性成分。结果 首乌藤药材指纹图谱有8个共有峰,指认出其中4个峰,分别为2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素和大黄素甲醚;除四川产区的样品外,同一省份样品的相似度值均大于0.80;PCA分析将15批首乌藤药材聚成5类,分别对应5个不同的产区,OPLS-DA法确定4个差异标志物。不同产地首乌藤主要化学成分含量差异很大,说明不同产地间首乌藤的化学成分存在较大的差异。结论 该方法能有效地分析不同产地首乌藤药材质量的差异性,为不同产地首乌藤药材质量的评价提供参考。

基于化学计量学和熵权TOPSIS法对不同产地白茅根药材的质量评价

目的:采用UPLC法建立白茅根指纹图谱,测定5个酚酸类成分含量,并进行综合评价。方法:采用Waters CORTECS T3 C_(18)(150 mm×2.1 mm,1.6μm)色谱柱;以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;建立21批白茅根指纹图谱,并以指纹图谱共有峰峰面积为依据,进行聚类分析(CA)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA);对21批白茅根样品中新绿原酸、咖啡酸、绿原酸、隐绿原酸和对羟基肉桂酸的含量进行TOPSIS综合评价。结果:白茅根指纹图谱共确定14个共有峰,CA结果与OPLS-DA结果一致,均可将21批样品分为3类,并筛选出3个VIP值>1的差异性成分。由TOPSIS法分析得出21批白茅根样品中河北产地的质量最优,其次为河南产地。结论:该研究建立的方法能有效分析不同产地白茅根药材质量的差异性,为不同产地白茅根药材的质量评价提供参考。

王不留行炮制前后的UPLC指纹图谱比较及刺桐碱和王不留行黄酮苷的含量测定

目的:比较王不留行炮制(清炒)前后的指纹图谱差异,并测定其炒制前后刺桐碱、王不留行黄酮苷的含量。方法:采用超高效液相色谱(UPLC)法,色谱柱为YMC Trait C_(18),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.35 mL/min,检测波长为219 nm,柱温为35℃,进样量为1μL。以王不留行黄酮苷为参照,绘制王不留行生品及其炮制品(各17批,编号分别为S1~S17、CS18~CS34)的指纹图谱;采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行相似度评价及共有峰指认;采用SPSS 20.0软件进行聚类分析、主成分分析和因子分析。采用上述UPLC法测定王不留行生品及其炮制品中刺桐碱、王不留行黄酮苷的含量。结果:17批王不留行生品及其炮制品的UPLC指纹图谱中均有共有峰5个,相似度均大于0.99;共指认了刺桐碱和王不留行黄酮苷等2个共有峰。聚类分析结果显示,S1~S17聚为一类,CS18~CS34聚为一类;主成分分析及因子分析结果显示,第1主成分的方差贡献率为76.418%,刺桐碱、王不留行黄酮苷在第1主成分上有较高载荷(特征值分别为0.976、0.966)。刺桐碱、王不留行黄酮苷检测质量浓度的线性范围分别为6.437~321.832、7.729~386.437μg/mL(r均大于0.999);检测限、定量限分别为0.085、0.284 ng(生品)和0.739、2.465 ng(炮制品);精密度、重复性、稳定性(12 h)、耐用性试验的RSD均小于3%(n=6或n=5);平均加样回收率分别为96.42%(RSD=0.85%,n=6)、99.13%(RSD=1.74%,n=6)。两种成分的含量分别为0.11%~0.20%、0.42%~0.63%(生品)和0.08%~0.11%、0.34%~0.50%(炮制品)。结论:成功建立了王不留行生品及其炮制品的UPLC指纹图谱。王不留行炒制前后的化学成分虽一致性较好,但炒制后刺桐碱、王不留行黄酮苷的含量均有所降低。

基于主成分分析及聚类分析的王不留行UPLC指纹图谱研究

目的建立王不留行药材UPLC指纹图谱评价方法,对不同产地的王不留行药材的质量进行全面评价。方法采用YMC Trait C18(100 mm×2.1mm,1.9μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.35 mL/min,检测波长为219 nm,柱温为35℃。采用相似度评价、聚类分析和主成分分析对15批王不留行药材指纹图谱进行研究。结果建立了王不留行药材的UPLC指纹图谱,确定了5个共有峰,指认了其中的刺桐碱和王不留行黄酮苷2种成分;15批王不留行药材的相似度均在0.98以上,表明不同产地的王不留行药材质量比较一致;主成分分析亦显示不同产地的样品质量差异不大。结论该方法为王不留行药材的质量控制提供了较为全面、有效的、快速评价方法。

不同产地桑白皮饮片的UPLC指纹图谱及聚类分析研究

目的:建立桑白皮饮片的超高效液相指纹图谱的方法,为完善桑白皮饮片的质量控制提供参考。方法:采用Agilent SB C18(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸水,梯度洗脱,流速0.38 mL·min^-1;检测波长320 nm;柱温30℃。结果:建立了桑白皮饮片的UPLC指纹图谱共有模式,标定了14个共有峰,各色谱峰有较好的分离。根据聚类分析结果,建立的特征图谱可以区分云南产的桑白皮饮片,但是无法区分四川和广西不同产区的样品,三大主产区的桑白皮饮片具有较高的相似性。结论:该法简单、高效,可用于桑白皮饮片的质量评价。

基于UPLC指纹图谱的不同产地墨旱莲药材质量评价

目的建立墨旱莲药材UPLC指纹图谱评价方法,对不同产地墨旱莲药材的质量进行全面评价。方法采用Agilent ZORBAX SB C 18(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-磷酸缓冲液(含0.53%磷酸和0.8%三乙胺)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.30 mL/min,检测波长为330 nm,柱温为30℃。建立墨旱莲药材UPLC指纹图谱共有模式,采用相似度、聚类分析和主成分分析法对墨旱莲质量进行综合评价。结果18批墨旱莲药材指纹图谱有8个共有峰,指认了其中的4个峰,分别是咖啡酸、木犀草苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和蟛蜞菊内酯;相似度在0.85~0.99之间,聚类分析及主成分分析将18批药材分为3类,与相似度评价结果一致。结论建立的方法可用于墨旱莲药材的质量评价。

佛手配方颗粒UPLC指纹图谱研究

目的建立佛手配方颗粒UPLC指纹图谱,比较佛手配方颗粒、水煎液和饮片的UPLC指纹图谱,为佛手配方颗粒质量控制提供方法。方法采用超高效液相色谱法,以Waters HSS T3 C_(18)色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm)为色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸水,梯度洗脱;流速:0.4mL·min^(-1);柱温:30℃;检测波长:320nm。结果初步建立了佛手配方颗粒的UPLC指纹图谱,标记出了10个共有峰,均能在饮片和水煎液指纹图谱中追溯到,指认了橙皮苷色谱峰,10批饮片、10批水煎剂、10批配方颗粒的指纹图谱相似度分别为0.968~0.998、0.929~0.993、0.969~0.990。结论该方法简单、准确、快速、重复性好,能有效地对佛手配方颗粒的质量进行评价。

白茅根标准汤剂超高效液相色谱指纹图谱研究

目的建立白茅根标准汤剂超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以甲醇-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速0.32 mL/min,检测波长325 nm,柱温40℃,建立15批白茅根标准汤剂指纹图谱。采用相似度评价、聚类分析和主成分分析对15批白茅根标准汤剂指纹图谱进行研究,并测定样品中绿原酸的含量。结果建立了白茅根标准汤剂的UPLC指纹图谱,标定了13个共有峰,15批样品相似度为0.821~0.998,通过聚类分析将样品大致分为三类。绿原酸在1.8539~185.3931μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为101.77%。结论本研究建立的白茅根标准汤剂指纹图谱方法准确可靠、重复性好,可为白茅根标准汤剂及其相关制剂的质量评价提供参考。

菟丝子盐炙前后HPLC指纹图谱的变化研究

目的建立菟丝子和盐菟丝子的指纹图谱,并采用化学计量学评价两者间的差异。方法采用HPLC法进行测定,色谱柱为Waters Xselect HSS T3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈‐0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,波长为360 nm,柱温为30℃,进样量为10μL,建立了15批菟丝子以及盐菟丝子的指纹图谱,并进行相似度评价及主成分分析(PCA),利用正交偏最小二乘法‐判别分析(OPLS‐DA)寻找菟丝子炮制前后差异性成分。结果建立了菟丝子炮制前后HPLC指纹图谱共有模式,以金丝桃苷峰为参照峰,以菟丝子炮制前后的HPLC指纹图谱中的12个共有峰作为特征峰,并指认出其中3个特征峰,分别为绿原酸、金丝桃苷和异槲皮苷。相似度评价结果显示,菟丝子和盐菟丝子与对应对照指纹图谱相似度较高。PCA能明显区分炮制前后的菟丝子样品,OPLS‐DA分析确定5个区分菟丝子和盐菟丝子的差异标志物,分别为峰3、峰6、峰2、峰7、峰11。结论该方法可用于菟丝子及盐菟丝子药材的指纹图谱分析,且能有效区分菟丝子和盐菟丝子。

菟丝子不同炮制品指纹图谱及多指标成分定量研究

目的建立菟丝子指纹图谱及多指标含量测定方法探究菟丝子炮制后的变化。方法以Agilent SB柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)为色谱柱,乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为40℃,检测波长为360 nm。采用相似度评价结合主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析等模式探讨影响菟丝子炮制前后指纹图谱中总体化学成分的变化。结果菟丝子生品和炮制品指纹图谱具有一定的差异,菟丝子标定了10个共有峰,炒菟丝子和盐菟丝子标定了12个共有峰,其中峰11、峰12为炒菟丝子和盐菟丝子炮制后产生的新成分,分别为新绿原酸、隐绿原酸。指认了8个色谱峰并对其进行定量分析,结果显示,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷和槲皮素含量在炮制后发生了变化。结论该方法可控制菟丝子炮制品的质量。

墨旱莲不同药用部位UPLC特征图谱及5种成分含量测定研究

目的建立墨旱莲超高效液相色谱(UPLC)特征图谱及咖啡酸、木犀草苷、异绿原酸B、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、蟛蜞菊内酯的含量测定方法,对墨旱莲不同药用部位的质量进行评价。方法采用Agilent SBC_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈-0.53%磷酸溶液(含0.8%三乙胺)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长330 nm。采用外标法测定11批墨旱莲药材及其花、叶、茎中5种成分的含量。采用SPSS20.0软件对数据进行聚类分析和主成分分析。结果建立了墨旱莲UPLC特征图谱共有模式,确定了9个共有峰,指认了5个色谱峰,并测定不同药用部位5种成分的含量。通过聚类分析和主成分分析可将11批样品分为三类,与特征图谱和含量测定结果基本相符,表明墨旱莲不同药用部位的质量存在差异。结论本研究建立的方法简便,结果稳定、准确,可为墨旱莲药材的质量控制提供依据。

基于UPLC特征图谱的不同基原车前草差异成分研究

目的对比车前与平车前药材的特征图谱及含量差异性。方法利用UPLC建立车前草药材特征图谱,采用Agilent Zorbax SB C18(100 mm×2.1 mm,1.8mm)色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温30℃,检测波长330 nm,对25批次不同基原车前草药材的特征图谱与4个指标成分进行同时测定,并进行相似度评价、聚类分析、主成分分析。结果建立了车前草药材UPLC特征图谱,其中车前确定7个共有峰、平车前确定7个共有峰,聚类分析可将25个样本按基原聚为2类;通过主成分分析可将不同基原的车前草药材进行区别;大车前苷和木犀草苷均在车前和平车前中被检出,车前草苷D在车前中被检出,毛蕊花糖苷在平车前中被检出。车前中大车前苷含量较平车前高,木犀草苷含量相近。结论本研究建立的方法简便、快捷、可靠,为不同基原车前草药材的质量控制和基原鉴别提供可靠的分析方法。

龙脷叶药材UPLC指纹图谱及主成分分析研究

目的建立龙脷叶药材UPLC指纹图谱的分析方法,为该药材的质量控制与资源开发提供参考。方法采用UPLC方法,以Agilent SB C_(18)柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm)为色谱柱,以甲醇(A)-0.4%磷酸(B)为流动相,流速0.30 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长为349 nm,采用SPSS软件对数据进行分析。结果建立了龙脷叶药材的UPLC指纹图谱,检出共有峰8个,指认了2个共有峰,通过主成分分析得知不同产地的样品质量存在差异性。结论建立的UPLC指纹图谱较全面地反映了龙脷叶药材的化学成分,分析方法准确可靠、重复性好,采用主成分分析对龙脷叶药材质量作出综合评价,为有效地控制龙脷叶药材的质量提供了新的评价方法和参考依据。

鸡冠花药材HPLC指纹图谱及黄酮类成分含量测定研究

目的:建立鸡冠花药材HPLC指纹图谱测定方法,对市售鸡冠花药材的质量进行较全面的评价。方法:采用Waters HSS T3色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2%磷酸溶液(含0.2%三乙胺)为流动相进行梯度洗脱,指纹图谱检测波长为290 nm,山柰素、异鼠李素、山奈酚-4’-O-甲醚含量测定检测波长为365 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min。采用相似度评价、聚类分析对15批鸡冠花药材指纹图谱进行研究。结果:建立了鸡冠花药材的HPLC指纹图谱,确定了8个共有峰;通过相似度评价、聚类分析结果可知15批鸡冠花药材质量差异不明显,并比较了样品中山柰素、异鼠李素、山奈酚-4’-O-甲醚的含量。结论:该方法为鸡冠花药材的质量控制提供了较为全面、有效的快速评价方法。

基于HPLC特征图谱和含量测定的仙鹤草药材质量控制研究

目的采用高效液相色谱法,建立仙鹤草药材的特征图谱和含量测定方法,为仙鹤草药材的质量控制提供参考。方法特征图谱采用XSelect HSS T3(4.6×250mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为320nm,柱温为30℃,并进行相似度评价、聚类分析及主成分分析。采用XSelect HSS T3(4.6×250mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,等度洗脱,检测波长为254nm,柱温30℃,测定仙鹤草药材中槲皮苷的含量。结果仙鹤草药材特征图谱有7个特征峰,除样品S20(河南产区)之外,不同产区的仙鹤草药材相似度均大于0.95;聚类分析将不同产地的仙鹤草药材分为3类,主成分分析显示,特征峰1、3、4和6是造成批次间差异的关键色谱峰;不同产地仙鹤草药材中槲皮苷含量范围为0.09%~0.22%,产地差异性较小。结论所建立的HPLC特征图谱和含量测定方法可用于仙鹤草药材的质量控制。

基于UPLC指纹图谱评价不同产地浮萍的质量

目的建立浮萍药材的UPLC指纹图谱,综合比较不同产区浮萍的质量。方法采用UPLC建立浮萍药材的指纹图谱;应用PCA分析法和聚类分析对UPLC指纹图谱进行分析。结果浮萍药材UPLC指纹图谱共7个共有峰,其中4个为牡荆素、荭草苷、木犀草苷、木犀草素;产自江苏、山东、湖北和福建4个产地的浮萍药材相似度为0.987~1.000;主成分分析结果表明,荭草苷、牡荆素、木犀草苷、木犀草素等7个特征峰对评价浮萍质量具有重要作用;通过聚类分析18批药材被分成2类,产自山东的3批归为一类,其他15批归为一类。结论 UPLC指纹图谱结合PCA和聚类分析,可以客观地评价不同产地浮萍药材的质量。

基于标准汤剂的苍术配方颗粒质量标准研究

目的:建立基于标准汤剂的苍术配方颗粒的质量评价方法。方法:收集14批不同产地的苍术药材,根据技术要求,制备14批苍术标准汤剂及3批配方颗粒,分别以出膏率、绿原酸的含量、转移率及指纹图谱的相似度,对苍术配方颗粒进行质量评价。结果:标准汤剂出膏率均值为32.68%;3批配方颗粒的出膏率分别为27.47%、28.38%、28.13%;标准汤剂中绿原酸的含量均值为0.547mg/g,转移率均值为48.29%;3批配方颗粒中绿原酸的含量分别为0.826mg/g、0.994mg/g、0.809mg/g,转移率分别为32.9%、48.2%、40.9%。标准汤剂和配方颗粒指纹图谱均标识出19个共有峰,通过比对对照品指认出其中两个特征峰分别为绿原酸和苍术素。配方颗粒与标准汤剂对照指纹图谱的相似度分别为0.994、0.994、0.990。结论:3批苍术配方颗粒的质量指标与标准汤剂基本一致,该方法能够为苍术配方颗粒质量标准的制定提供依据。