表达TGF-βⅡ受体的腺相关病毒载体抑制小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞的增殖和肺转移

目的研究腺相关病毒(AAV2)介导的TGF-βⅡ受体(TβRⅡ)胞外结构域和IgG2a Fc段融合基因对小鼠4T1细胞在体内增殖和迁移的影响。方法通过分子克隆构建表达sTβRⅡ-Fc的腺相关病毒核心质粒载体pAAV-sTβRⅡ-Fc,转染至HEK 293T细胞验证分泌性sTβRⅡ的表达。在HEK 293T细胞中共转染重组腺相关病毒核心质粒pAAV-sTβRⅡ-Fc、衣壳蛋白表达质粒pAAV2和辅助质粒pHelper以制备AAV2-sTβRⅡ,碘克沙醇密度梯度离心法纯化病毒。Western blot检测AAV2-sTβRⅡ对TGF-β信号通路下游关键蛋白Smad2/3磷酸化水平的影响,以及经治疗后各组小鼠4T1移植瘤内E-钙黏蛋白、波形蛋白、p-Smad2/3的表达水平。构建Luciferase标记的4T1细胞并荷瘤BALB/c小鼠,荷瘤小鼠随机分为处理组AAV2-sTβRⅡ、对照组AAV2-GFP和溶剂对照组PBS(6只/组),各组病毒均经尾静注射到小鼠体内。小动物活体成像观察AAV2-sTβRⅡ在小鼠体内对4T1移植瘤增殖的影响。免疫组织化学检测肿瘤组织Ki67蛋白的表达水平。免疫荧光检测小鼠肝脏内sTβRⅡ蛋白的表达水平。H&E染色观察小鼠肺部肿瘤转移灶和主要脏器的病理学改变。结果pAAV-sTβRⅡ-Fc重组质粒构建成功并在HEK 293T细胞中分泌表达sTβRⅡ。AAV2-sTβRⅡ能够感染4T1细胞并显著降低TGF-β1诱导的Smad2/3蛋白磷酸化(P<0.05)。AAV2-sTβRⅡ可显著抑制小鼠4T1移植瘤在体内的增殖(P<0.05)与肺转移,同时处理组肿瘤组织中E-钙黏蛋白表达水平显著上升(P<0.05)、波形蛋白表达水平显著下降(P<0.01)、Smad2/3磷酸化水平显著下降(P<0.05)、肿瘤组织Ki67蛋白显著下降。sTβRⅡ可在肝脏中表达,AAV2-sTβRⅡ未引起小鼠体质量下降和心、肝、脾、肾组织的病理学变化(P>0.05)。结论重组腺相关病毒载体AAV2介导的TβRⅡ胞外结构域编码序列,可阻断4T1细胞中的TGF-β信号通路,显著抑制小鼠体内4T1细胞增殖和肺转移。

腺相关病毒在脂代谢研究和降脂基因治疗中的应用

动脉粥样硬化性心脑血管疾病是当前全球死亡率最高的疾病,而脂代谢紊乱是动脉粥样硬化性心脑血管疾病的主要病因,其既可以导致心肌梗死、脑卒中、急性胰腺炎等急性病,也可以导致慢性肾脏疾病。近年来基因治疗技术的快速发展,为脂代谢机制研究提供了有效的手段,特别是使先天性脂代谢异常患者的治愈成为可能。腺相关病毒(adeno associated virus,AAV)宿主范围广、安全性高、免疫原性低、表达长期稳定,是当前单基因遗传病基因治疗首选的递送工具。以AAV为载体的多种降脂基因治疗药物目前已经得到临床应用或正在进行临床试验。本文综述了AAV载体在脂质代谢机制研究的新进展及其在降脂基因治疗中的应用和前景。

浅谈双创教育视角下的医学生创新能力培养策略

现如今,随着国家创新驱动发展战略的深入实施,"双创"(即创新创业)教育已成为高等教育改革的重要方向。在医学教育领域,培养具有创新意识和创业能力的医学生是提升医疗卫生服务水平、促进医疗健康产业发展的关键。本文旨在分析当前医学生双创教育的现状与挑战,并提出相应的策略和建议,以期为医学教育改革提供建议与参考。

基于神经网络的汽车摩擦异响风险预测研究

摩擦异响是导致整车异响的重要因素,会影响整车的安静度。为有效判定摩擦异响风险,通过材料对间摩擦噪声测试获得响度数据;对响度-时间曲线进行响度分级设定,通过数值积分获得一种表征摩擦异响风险参数SLCP值;以该参数为输入层,以摩擦试验过程中异响风险主观评价为输出层,建立神经网络模型,通过样本数据训练形成一种预测摩擦异响风险的方法。验证结果表明,预测模型有效并能保证一定的精度。

基于P450酶的雷公藤多苷致大鼠肝损伤及其与复方甘草酸苷配伍减毒研究

目的明确雷公藤多苷(tripterygium glycosides,TG)肝毒性的剂量-时间-效应关系,基于细胞色素P450酶的调控研究TG致大鼠肝损伤的毒性机制,探讨复方甘草酸苷(compound glycyrrhizin,CG)配伍TG的减毒机制,为TG临床安全应用提供理论依据。方法雄性SD大鼠30只,按体重随机分为对照组、TG 189.0 mg·kg^(-1)组、TG472.5 mg·kg^(-1)组、TG 189.0 mg·kg^(-1)和TG 472.5 mg·kg^(-1)剂量分别与CG 20.25 mg·kg^(-1)剂量联合用药组,共5组,每组6只。每日给药1次,连续3周。分别于给药后1、2、3周,测定血清中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)含量;末次给药结束,计算肝系数,行组织病理学检查,对CYP2B1和CYP3A1基因的转录水平进行检测。结果给药1周后,TG 189.0、472.5 mg·kg^(-1)组血清中ALB水平均降低(P<0.05),TG 472.5 mg·kg^(-1)组ALT升高(P<0.01);至给药3周,除上述指标的改变外,TG189.0、472.5 mg·kg^(-1)组进一步引起大鼠血清TP含量的降低(P<0.05);与CG联合用药3周后,TG472.5 mg·kg^(-1)剂量联合用药组与同等剂量的TG单独用药组比较,可降低ALT含量(P<0.01),升高ALB、TP含量(P<0.05)。至给药3周,TG 189.0 mg·kg^(-1)组的大鼠肝细胞轻微肿胀,汇管区少量淋巴细胞浸润;TG 472.5 mg·kg^(-1)组的大鼠肝重量和肝系数较对照组增加(P<0.05,P<0.01),肝被膜下见片状坏死灶伴出血,肝细胞空泡变性、肿胀,汇管区淋巴细胞浸润。与CG联合用药后,大鼠肝脏的组织结构得到修复。189.0、472.5 mg·kg^(-1)剂量的TG均可导致大鼠肝组织中CYP2B1和CYP3A1 mRNA水平的升高(P<0.05,P<0.01);TG与CG联合用药后,CYP2B1 mRNA水平下调。结论连续3周给予大鼠189.0、472.5 mg·kg^(-1)剂量的TG,可对大鼠造成不同程度的肝损伤。其中,TG 472.5 mg·kg^(-1)组肝损伤更为严重,给药3周较给药1周时肝毒性更显著,具有剂量-时间-效应关系。大鼠肝细胞内细胞色素P450酶CYP2B1和CYP3A1 mRNA过表达为其毒性机制之一;CG可通过下调CYP2B1 mRNA水平,减轻肝毒性。

BMI-1抑制剂PTC-596对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 分析BMI-1抑制剂PTC-596对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法以人乳腺癌MCF-7细胞为肿瘤细胞模型,正常培养为阴性对照组,25、50 nmol/L PTC-596处理SGC-7901细胞48 h为低、高药物浓度实验组。利用CCK8法分析细胞增殖能力;流式细胞术分别结合PI单染、DCFHDA探针、JC-1探针以及PI/FITC-Annexin V双染分析细胞周期、活性氧(reactive oxygen species, ROS)累积、线粒体膜电位和凋亡细胞比例;Western blot法检测细胞BIM-1蛋白和周期相关蛋白CyclinD1、CyclinB1、P21以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、c-PARP蛋白相对表达水平。结果 与对照组相比,PTC-596高效抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,处理48 h后IC_(50)为(49.33±7.02)nmol/L。低、高药物浓度实验组细胞中BMI-1表达显著减少(P <0.01)。实验组细胞中CyclinB1和P21相对表达增加,CyclinD1表达减少,细胞有丝分裂被抑制,出现G_2/M期周期阻滞;同时活性氧累积增多,线粒体膜电位下降,Bax表达上调,Bcl-2表达下调,c-PARP增加,凋亡细胞比例从2.04%显著上升为10.56%、26.74%。与对照组相比较,以上结果差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 PTC-596高效杀伤人乳腺癌MCF-7细胞,其机制可能与抑制BMI-1、诱导细胞周期阻滞和内源性线粒体途径细胞凋亡密切相关。

天麻促智颗粒的脑保护机制研究

目的 :探讨天麻促智颗粒 (TMC)的脑保护机制 ,为其治疗老年血管性痴呆的作用提供药理学依据。方法 :利用小鼠双侧颈总动脉结扎 再灌手术造成的学习记忆障碍动物模型 ,观察不同剂量的TMC对脑内神经递质受体 (N 甲基 D 天冬氨酸受体即NMDA受体、胆碱能M受体 )及谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx)活性的影响。结果 :TMC可不同程度地抑制小鼠脑损伤引起的大脑皮层、海马两部位NMDA受体活性 ;增强两部位的M受体活性 ;还可增加皮层、海马和肝脏中GPx的活性。结论 :TMC治疗血管性痴呆的机制可能与其抑制脑内兴奋性氨基酸受体活性、提高胆碱能神经功能以及增加抗过氧化酶活性有关。

某中巴客车侧窗遮阳帘异响原因分析及对策研究

某中巴客车在城郊路面、试验场比利时路、鹅卵石路等较差路况行驶时,车辆侧窗顶部有明显类金属“卡啦”声、侧窗遮阳帘拉杆明显抖动异响以及定置状态下下拉遮阳帘布时刮擦异响。从现象分析入手,首先排查锁定异响源为遮阳帘下拉杆、遮阳帘内部弹簧锁止机构以及遮阳帘顶部外壳,深入研究其内部结构及异响产生机理,最后针对异响真因对遮阳帘下拉杆、遮阳帘顶部卷筒及内部锁止机构制定优化措施,并验证了措施的有效性,从而解决了该异响问题。对于深入研究遮阳帘总成异响发生的成因,寻找有效的控制对策具有一定的工程实践意义。

人精胺氧化酶的原核表达及多克隆抗体制备

目的:克隆、原核表达有酶活性的重组人精胺氧化酶(SMO)蛋白,并制备兔抗人SMO多克隆抗体。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞株总RNA中克隆人精胺氧化酶cDNA,构建SMO原核表达质粒pET-15b/SMO。将SMO原核表达质粒转化E.coli的BL21(DE3)菌并使用IPTG诱导重组SMO表达。表达的蛋白产物经Ni-NTA亲和层析纯化、透析复性后,化学荧光法测定其酶活性。使用制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、纯化重组人SMO蛋白,以此蛋白作为抗原皮内接种日本大耳白兔来制备抗人SMO多克隆抗体。分别以ELISA、Westernblot和免疫细胞化学法检测兔血清中抗体的滴度和抗原特异性。结果:纯化并透析复性后的重组人SMO蛋白具备快速氧化精胺的酶活性。用此重组蛋白制备的抗体具有较高抗体滴度和针对人SMO的特异性。结论:建立了人SMO原核表达、纯化系统,获得了有酶活性的高纯度人SMO蛋白并成功制备了兔抗人SMO的多克隆抗体,为以SMO为靶点的抗肿瘤基础和临床研究提供了有力的研究工具。

小鼠钙网蛋白的克隆与原核表达

目的:克隆小鼠钙网蛋白(CRT)并在E.coli中原核表达和纯化.方法:采用RT-PCR法从昆明鼠肝总RNA中克隆小鼠钙CRTcDNA,构建CRT原核表达质粒(pET-15b/CRT)并转化E.coli的Rossetta(DE3)菌株.IPTG诱导后,表达蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,然后透析复性.分别用SDS-PAGE和Westernblot法鉴定CRT的表达和纯化.结果:从昆明鼠肝总RNA中成功克隆获得小鼠CRTcDNA,该cDNA序列被成功克隆入pET-15b原核表达载体.DNA测序表明,重组质粒pET-15b/CRT构建正确.转化pET-15b/CRT的E.coli,Rossetta(DE3)能够诱导性表达重组小鼠CRT蛋白,该蛋白可经Ni-NTA树脂亲和层析高度纯化.结论:成功克隆昆明小鼠CRTcDNA并建立了小鼠CRT原核表达和纯化的实验方法,为后续的CRT蛋白功能研究奠定了基础.

钙网蛋白与凋亡细胞清除

钙网蛋白(calreticulin,CRT)是细胞内质网/肌浆网中主要的Ca2+结合蛋白,具有细胞内钙稳态调节、分子伴侣、抗原提呈等多种生物学功能。近来的研究发现,CRT在机体对凋亡细胞的有效识别、清除过程中起关键作用。

重组人钙网蛋白的克隆与原核表达

目的:克隆人钙网蛋白(calreticulin,CRT)并进行原核表达和纯化。方法:采用RT-PCR法从人非小细胞肺腺癌A549细胞总RNA中克隆人钙网蛋白cDNA,构建CRT原核表达质粒(pE15b/CRT)并转化E.coli的Rossetta菌株。IPTG诱导后,表达蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化,然后透析复性。分别用SDS-PAGE和Western blotting鉴定CRT表达和纯化状态结果:从A549细胞总RNA中成功获得人CRTcDNA克隆,重组质粒pET-15b/CRT构建正确。转化pET-15b/CRT的E.coliRossetta诱导性表达重组人CRT蛋白,该蛋白可经Ni-NTA树脂亲和层析高度纯化。结论:成功建立了CRT原核表达和纯化的实验方法,该方法为后续的CRT蛋白功能研究奠定了基础。

基于ADAMS的刮板输送机单油缸伸缩机尾仿真与分析

针对刮板输送机单油缸伸缩机尾,在ADAMS/View里建立模型并进行仿真分析。通过仿真确定了伸缩油缸的合理工作行程,对仿真数据进行分析,揭示了单油缸伸缩机尾的受力情况,为合理设计提供了理论支持。

研究生医学专业英语课程体系构建初探

随着新时期国家对医学硕士专业人才培养要求的不断提高,对医学专业课程体系进行改革与探索以适应新时期国家对培养具有国际视野和具有国际交流能力医学研究生需求显得尤为重要。为此,文章对医学专业英语课程体系进行了初步探索和实践,重点在提高医学研究生对本专业英文文献的阅读能力、专业英文交流能力、专业英文论文写作能力等方面设置了专门的教学模块,收到了初步成效。

如何在因特网上查找分子生物学学术信息

:Internet正日益成为分子生物学研究不可或缺的工具。本文简要介绍了 Internet上的分子生物学资源 ,包括各种核酸、蛋白质数据库 ,文献检索数据库 ,专业软件 ,学术交流 ,学术期刊和杂志 ,相关试剂仪器等信息的检索和使用方法。

N^1-乙基-N^11-(环庚烷基)甲基-4，8-二氮杂癸烷对宫颈癌细胞的作用

目的探讨N1-乙基-N11-(环庚烷基)甲基-4,8-二氮杂癸烷(CHEN)对宫颈癌细胞株Siha的抗肿瘤作用。方法MTT法检测细胞的生长情况;流式细胞术及DNA片段化分析法检测细胞凋亡;化学分析法测定精胺氧化酶(SMO)活性。结果CHEN可显著抑制Siha宫颈癌细胞生长,且抑制作用随药物浓度增加而增强,用10μmol·L-1 CHEN处理细胞,24和48h生长抑制率分别高达61%和75%。细胞凋亡分析发现,CHEN处理可诱导Siha细胞凋亡,导致凋亡峰出现和细胞核DNA片段化。在0~20μmol·L-1浓度范围内,CHEN作用24h对Siha细胞SMO活性无明显影响。结论CHEN通过诱导细胞凋亡而抑制宫颈癌细胞生长,该抑制作用与SMO活性无关。

缺失内质网驻留信号肽的小鼠钙网蛋白在B16-F1细胞中的表达

目的:克隆无内质网驻留信号肽的钙网蛋白(CRT),构建表达分泌性钙网蛋白的B16-F1肿瘤细胞株.方法:以前期构建的小鼠钙网蛋白真核表达质粒为模板,采用突变PCR技术获得无内质网驻留信号肽的钙网蛋白cDNA并克隆入真核表达载体中.以脂质体转染法将该质粒转染B16-F1细胞后,用G418筛选单克隆细胞株.分别以PCR,WesternBlot法鉴定成功转染和表达分泌型CRT的B16-F1细胞株.流式细胞术分析该细胞株的细胞周期.结果:成功获得无内质网驻留信号肽编码序列的小鼠CRT真核表达质粒.稳定转染并筛选出表达分泌性钙网蛋白的B16-F1细胞株,CRT在此细胞株中表达并分泌至培养基质中.稳定转染前后的B16-F1细胞株细胞周期没有明显变化.结论:删除CRT编码序列中内质网驻留信号肽(KDEL)后,CRT失去了驻留在细胞内质网中的能力从而以分泌蛋白的形式出现在细胞外培养基质中.本研究为CRT的细胞外转移提供了一条新的途径,同时为以CRT为基础的抗肿瘤免疫研究提供了新的研究工具.

基于ANSYS/CFX的防爆柴油机水洗箱气液两相流模拟

采用ANSYS/CFX软件对防爆柴油机水洗箱内的气液两相流动进行分析,通过模拟防爆柴油机水洗箱内的气液流动状况,然后计算排放口的尾气温度,为水洗箱的优化设计提供参考,使防爆柴油机水洗箱满足标准要求。

多胺类似物CHEN通过诱导细胞程序性凋亡抑制宫颈癌细胞生长

发现肿瘤细胞的快速生长对多胺（腐胺、精脒和精胺）呈高度依赖，以及多种肿瘤组织内有多胺代谢异常后，多胺代谢途径逐渐成为当今抗肿瘤药物设计的热点靶途径。已设计和合成出一批与天然多胺有类似化学结构的多胺类似物（Polyamine Analogue），用于抗肿瘤的基础研究和前期临床。

天智颗粒治疗老年血管性痴呆临床观察

目的 :观察天智颗粒 (TZK)治疗老年血管性痴呆 (vasculardementia ,VaD) ;以肝阳上亢型为主症的临床疗效。方法 :将 2 0 0例VaD患者采用TZK治疗 ,每次 1包 (5 .0 g/包 ) ,每日 3次口服 ,1个月为一个疗程 ,连续 2个疗程。结果 :给药后可以显著改善认知功能和行为能力 ,与阳性药都可喜比较未见显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,同时可显著改善中医临床证候及生活能力 ,对异常血粘度患者可以降低其不同切变率下全血粘度、降低血浆粘度 ,对红细胞变形和聚集指数异常均有显著改善作用。结论 :TZK对肝阳上亢型老年血管性痴呆有一定的疗效。