应用HRM技术对CYP2C19*2和CYP2C19*3进行双重SNP分型

氯吡格雷是一种广泛用于预防静脉血栓形成的抗血小板药物。研究表明,携带有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C19*2、CYP2C19*3的病人,其体内代谢氯吡格雷成为其活性形式的能力降低,导致氯吡格雷抑制血小板聚集功能减弱。文章旨在建立一种利用高分辨率熔解曲线分析(High-resolution melting curveanalysis,HRM)技术在闭合单管中同时对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行简便、准确分型的方法。本实验针对两个SNP位点分别设计特异性的HRM引物,并在两个位点引物的5′端分别加上富含AT和GC的序列,保证两个位点的扩增产物熔解峰无重叠。利用HRM技术,快速、灵敏地对64例随机DNA样本的CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行了基因分型,且HRM方法的分型结果与测序验证结果完全一致。因此,利用HRM技术可以实现在闭合单管中简便、准确地对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点同时进行基因分型。该方法有望应用于临床,指导氯吡格雷的个体化用药。

保存温度和时间对外周血样本染色体制备的影响

目的 探索外周血样本保存温度和保存时间对染色体G显带核型制备效果的影响。方法 以有核细胞数、有丝分裂指数和分裂相细胞数作为评价指标,分别对4℃和室温(RT,18~22℃)条件下,保存不同时间(0、3、5、7 d)的外周血样本染色体制备效果进行评估。结果 4℃或RT条件下,收获的有核细胞数量均随着样本保存时间的延长而减少。与新鲜外周血样本相比,4℃保存7 d以内或RT保存3 d以内的样本,有丝分裂指数分别为6.2 (1.8)%vs 7.2(1.9)%、8.2(2.0)%vs 7.2(1.9)%;4℃条件下保存3 d的样本,有丝分裂指数为9.7(2.9)%vs 7.2(1.9)%,以上差异均没有统计学意义(P>0.05)。4℃保存7 d以内或RT保存3 d以内的样本,均可获得足够数量的分裂相细胞用于染色体核型分析,其中4℃保存3 d以内的样本收获的分裂相细胞与新鲜样本相比,差异没有统计学意义[10.7(3.2)×104vs 11.4(3.5)×104,P>0.05]。结论 4℃保存7 d以内或RT保存3 d以内的外周血样本,均可以进行染色体核型制备。