河南地区新记录蝇种郭氏欧麻蝇形态和DNA条形码鉴定

目的:应用形态学分类和DNA条形码技术对采自新郑机场口岸区域的蝇类样本进行种属鉴定。方法:提取蝇类后足的基因组DNA,用通用引物LCO1490/HCO2198扩增线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因片段,测序后与NCBI和BOLD中的序列进行分析比对,用Mega 7.0软件以邻接法、最大简约法、最大似然法和最小进化法构建系统发育树,并结合传统形态学方法鉴定该蝇类。结果:所获得DNA条形码序列与NCBI和BOLD中的郭氏欧麻蝇(Sarcophaga depressifrons)的序列相似度均为99.84%。结合形态学和分子生物学的鉴定结果,该蝇类标本为郭氏欧麻蝇,经查阅文献,确认为河南地区新记录蝇种;结论:郭氏欧麻蝇为河南地区新记录蝇种;应加强口岸检疫及监测力度,防止外来物种及传染病入侵。

应用重组酶介导逆转录扩增技术快速登革病毒血清型鉴定

目的本研究建立了基于逆转录重组酶介导核酸扩增技术(RT-RAA)快速鉴定登革病毒血清型的方法。方法选取登革病毒基因组NS1基因片段分别设计DV I型、DVⅡ型、DVⅢ型和DVⅣ型引物和探针,建立登革病毒血清型鉴定RT-RAA检测方法,并分别对其灵敏度、特异性和重复性进行测试。结果建立的方法检测时间短(<30min),与基孔肯雅病毒、黄热病毒、寨卡病毒、乙型脑炎病毒等黄病毒属病毒及DV不同血清型间无交叉反应,检测的灵敏度可达102copies/μl,试验的重复性好。结论建立的登革病毒血清型鉴定RT-RAA方法具有快速、特异以及灵敏的特点,为探究登革病毒是否本土化,确定登革病毒分子流行病学趋势提供技术支持。

乙脑病毒实时荧光重组酶介导逆转录扩增方法的建立

目的建立基于逆转录重组酶介导核酸扩增技术(RT-RAA)快速进行乙脑病毒(JEV)分型鉴定方法。方法根据乙脑病毒NS1基因设计通用型引物和探针,针对E基因分别设计Ⅰ型和Ⅲ型JEV特异性引物和探针,建立JEV RT-RAA检测方法,并分别对其灵敏度、特异性和重复性进行测试。结果建立的方法检测时间短(<20 min),与登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、寨卡病毒及无交叉反应,检测灵敏度可达100拷贝/μl,JEVⅠ检测体系的灵敏度可达10拷贝/μl;方法的重复性好。结论建立的JEV分型鉴定RT-RAA方法快速、特异、灵敏,适用于口岸现场JEV的快速检测。