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针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定
1
作者
徐双媛
刘钧
+7 位作者
曹李妍
丁睿清
尚月月
康喜龙
顾丹
焦新安
潘志明
孟闯
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期20-27,共8页
目的研制SARS-CoV-2的N蛋白单克隆抗体,并对其特异性识别真核表达N蛋白等特性进行鉴定,为下一步应用奠定材料基础。方法利用大肠杆菌表达并纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,制备并筛选分泌N蛋白特异性单克隆抗体的阳性B细胞杂交瘤,制备腹水后...
目的研制SARS-CoV-2的N蛋白单克隆抗体,并对其特异性识别真核表达N蛋白等特性进行鉴定,为下一步应用奠定材料基础。方法利用大肠杆菌表达并纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,制备并筛选分泌N蛋白特异性单克隆抗体的阳性B细胞杂交瘤,制备腹水后利用间接ELISA法测定单抗的效价、亚型和亲和力;通过Western blot、间接免疫荧光试验分析其与原核、真核表达SARS-CoV-2重组N蛋白的特异性结合能力;通过间接ELISA法评价其在不同冠状病毒N蛋白检测中的应用潜力。结果成功地表达和纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,筛选获得1株特异性识别重组N蛋白的单克隆抗体并命名为11F4,其亚型为IgG1,腹水效价为2.0×10^(7)以上,亲和力为4.44×10^(8)M^(-1);Western Blot分析表明其能与SARS-CoV-2重组N蛋白特异性反应,间接免疫荧光试验显示其能特异性识别HEK-293T细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,表明该蛋白免疫反应性良好;间接ELISA法结果表明其可特异性识别真核细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,而与MERS-CoV和HCoV-229E的N蛋白无交叉反应。结论成功获得可特异性识别细胞表达及体外制备的SARS-CoV-2 N蛋白的单克隆抗体,具备特异性检测SARS-CoV-2的潜能,为下一步研究提供了重要生物材料。
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关键词
SARS-CoV-2
核衣壳蛋白
原核表达
真核表达
单克隆抗体
特异性
下载PDF
职称材料
沙门菌H:t抗原表位单克隆抗体的制备及初步应用
2
作者
尚月月
丁睿清
+7 位作者
曹李妍
徐双媛
胡凌芸
宋丽
康喜龙
焦新安
孟闯
潘志明
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期1442-1449,共8页
山夫顿堡沙门菌、加利福尼亚沙门菌、奥拉宁堡沙门菌等含有H:t表位的血清型沙门菌具有较广泛的流行性和致病性,研制特异性识别H:t表位的单克隆抗体可为这些血清型沙门菌的快速、高效检测提供重要生物材料。本研究选用奥拉宁堡沙门菌鞭...
山夫顿堡沙门菌、加利福尼亚沙门菌、奥拉宁堡沙门菌等含有H:t表位的血清型沙门菌具有较广泛的流行性和致病性,研制特异性识别H:t表位的单克隆抗体可为这些血清型沙门菌的快速、高效检测提供重要生物材料。本研究选用奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白作为免疫原,通过经典B细胞杂交瘤技术筛选制备特异性识别沙门菌H:t抗原表位单克隆抗体,利用间接ELISA、Western blot方法对其亚型、效价、亲和力、特异性等生物学特性进行分析。结果显示,筛选获得2株单抗并命名为4H4和5G10,其亚型均为IgG1,其中4H4单抗的细胞培养上清效价达2.0×10^(5),腹水效价达1.0×10^(7),亲和力为2.04×10^(10)mol/L。Western blot分析显示4H4单抗与含H:t抗原表位的奥拉宁堡沙门菌、山夫顿堡沙门菌、加利福尼亚沙门菌特异性反应,而与不含H:t抗原表位的沙门菌和非沙门菌不反应。将该单抗用于鸡肉模拟污染样品中沙门菌的ELISA检测,能够检测出含H:t表位的血清型沙门菌,而不含H:t表位的沙门菌和非沙门菌均为阴性。本研究制备了沙门菌H:t抗原表位特异性单抗,可应用于ELISA检测含H:t表位的沙门菌造成的食品污染,为建立特定血清型沙门菌相关免疫学检测方法提供了重要材料基础。
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关键词
沙门菌
鞭毛蛋白
H:t抗原表位
单克隆抗体
ELISA检测
原文传递
题名
针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定
1
作者
徐双媛
刘钧
曹李妍
丁睿清
尚月月
康喜龙
顾丹
焦新安
潘志明
孟闯
机构
扬州大学
扬州大学
扬州大学
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期20-27,共8页
基金
江苏省重点研发计划(现代农业)重点项目(No.BE2021331)
国家自然科学基金项目(No.32002295)
高等学校学科创新引智计划(No.D18007)联合资助。
文摘
目的研制SARS-CoV-2的N蛋白单克隆抗体,并对其特异性识别真核表达N蛋白等特性进行鉴定,为下一步应用奠定材料基础。方法利用大肠杆菌表达并纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,制备并筛选分泌N蛋白特异性单克隆抗体的阳性B细胞杂交瘤,制备腹水后利用间接ELISA法测定单抗的效价、亚型和亲和力;通过Western blot、间接免疫荧光试验分析其与原核、真核表达SARS-CoV-2重组N蛋白的特异性结合能力;通过间接ELISA法评价其在不同冠状病毒N蛋白检测中的应用潜力。结果成功地表达和纯化SARS-CoV-2重组N蛋白,筛选获得1株特异性识别重组N蛋白的单克隆抗体并命名为11F4,其亚型为IgG1,腹水效价为2.0×10^(7)以上,亲和力为4.44×10^(8)M^(-1);Western Blot分析表明其能与SARS-CoV-2重组N蛋白特异性反应,间接免疫荧光试验显示其能特异性识别HEK-293T细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,表明该蛋白免疫反应性良好;间接ELISA法结果表明其可特异性识别真核细胞表达的SARS-CoV-2 N蛋白,而与MERS-CoV和HCoV-229E的N蛋白无交叉反应。结论成功获得可特异性识别细胞表达及体外制备的SARS-CoV-2 N蛋白的单克隆抗体,具备特异性检测SARS-CoV-2的潜能,为下一步研究提供了重要生物材料。
关键词
SARS-CoV-2
核衣壳蛋白
原核表达
真核表达
单克隆抗体
特异性
Keywords
SARS-CoV-2
nucleocapsid protein
prokaryotic expression
eukaryotic expression
monoclonal antibodies
specificity
分类号
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
沙门菌H:t抗原表位单克隆抗体的制备及初步应用
2
作者
尚月月
丁睿清
曹李妍
徐双媛
胡凌芸
宋丽
康喜龙
焦新安
孟闯
潘志明
机构
扬州大学
扬州大学
扬州大学
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第7期1442-1449,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(32002295,31902278)
江苏省重点研发计划(现代农业)资助项目(BE2021354)
+1 种基金
江苏省政策引导类计划(国际科技合作港澳台科技合作)资助项目(BZ2020013)
扬州大学科技创新团队(2016)资助项目。
文摘
山夫顿堡沙门菌、加利福尼亚沙门菌、奥拉宁堡沙门菌等含有H:t表位的血清型沙门菌具有较广泛的流行性和致病性,研制特异性识别H:t表位的单克隆抗体可为这些血清型沙门菌的快速、高效检测提供重要生物材料。本研究选用奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白作为免疫原,通过经典B细胞杂交瘤技术筛选制备特异性识别沙门菌H:t抗原表位单克隆抗体,利用间接ELISA、Western blot方法对其亚型、效价、亲和力、特异性等生物学特性进行分析。结果显示,筛选获得2株单抗并命名为4H4和5G10,其亚型均为IgG1,其中4H4单抗的细胞培养上清效价达2.0×10^(5),腹水效价达1.0×10^(7),亲和力为2.04×10^(10)mol/L。Western blot分析显示4H4单抗与含H:t抗原表位的奥拉宁堡沙门菌、山夫顿堡沙门菌、加利福尼亚沙门菌特异性反应,而与不含H:t抗原表位的沙门菌和非沙门菌不反应。将该单抗用于鸡肉模拟污染样品中沙门菌的ELISA检测,能够检测出含H:t表位的血清型沙门菌,而不含H:t表位的沙门菌和非沙门菌均为阴性。本研究制备了沙门菌H:t抗原表位特异性单抗,可应用于ELISA检测含H:t表位的沙门菌造成的食品污染,为建立特定血清型沙门菌相关免疫学检测方法提供了重要材料基础。
关键词
沙门菌
鞭毛蛋白
H:t抗原表位
单克隆抗体
ELISA检测
Keywords
Salmonella
flagellin
H:t antigen epitopes
monoclonal antibodies
ELISA
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
R535 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
针对SARS-CoV-2核衣壳蛋白的单克隆抗体的制备和鉴定
徐双媛
刘钧
曹李妍
丁睿清
尚月月
康喜龙
顾丹
焦新安
潘志明
孟闯
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
2
沙门菌H:t抗原表位单克隆抗体的制备及初步应用
尚月月
丁睿清
曹李妍
徐双媛
胡凌芸
宋丽
康喜龙
焦新安
孟闯
潘志明
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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