肠道微生物群在血栓形成及心脑血管疾病中的研究进展

心脑血管疾病作为临床常见病,具有高发病率、高致残率及高死亡率的特点。研究认为血小板黏附、活化及聚集引起的血管内血栓是导致心脑血管疾病发生的重要原因之一,因此,探索和明确有关血小板活化及血栓形成的因素是预防和控制心脑血管疾病的重要切入点。最近的研究显示肠道微生物群作为人体内最大最复杂的微生态系统参与到血小板功能的调控中。笔者对肠道微生物群参与血栓形成及作为血栓性疾病治疗手段的最新进展进行综述,从而为肠道微生物群为基础的治疗方案在心脑血管疾病中的临床应用提供新的思路和理论依据。

SMAD7在多发性骨髓瘤中的表达及对细胞增殖和耐药的影响

目的·分析Sma和Mad相关蛋白7 (Sma-and Mad-related protein 7,SMAD7)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中的表达,以及其对MM细胞的增殖和耐药的影响。方法·获取基因表达综合(gene expression omnibus,GEO)数据库中的3个数据集,分析SMAD7在健康捐献者和MM患者中的差异表达。通过收集8例健康捐献者和20例MM患者的骨髓标本,采用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)检测骨髓CD138+细胞中SMAD7 mRNA的相对表达,并分析其与患者临床资料的关系。在MM细胞KMS11中过表达SMAD7后,通过CCK8实验、细胞周期实验观察SMAD7对MM细胞增殖的影响。采用不同浓度的硼替佐米处理过表达SMAD7的KMS11细胞后,观察SMAD7对MM细胞的耐药影响及细胞的凋亡情况。结果·数据集中SMAD7表达数据的分析显示,与健康捐献者相比,SMAD7在MM患者中表达较高(均P<0.05)。qPCR检测结果显示,SMAD7 mRNA相对表达水平在MM患者中有上调(P=0.002),但未显示出与临床资料间存在关联。与对照细胞相比,过表达SMAD7后,KMS11的细胞活力均较高(均P<0.05);且细胞周期分布亦发生了变化,S期细胞的比例有所下降(P=0.016)、G2/M期细胞的比例有所上升(P=0.005);而经硼替佐米处理后,过表达SMAD7细胞的药物敏感性及凋亡水平均较低。结论·SMAD7在MM中表达上调,过表达SMAD7可促进MM细胞的增殖和耐药能力。

使用Leader引物和FR1引物检测IGHV突变的结果比较

目的比较Leader引物和FR1引物检测免疫球蛋白重链基因可变区(IGHV)体细胞高频突变的差别,优化IGHV突变检测流程。方法收集2021年9月—2022年8月苏州大学附属第一医院血液科就诊的187例患者的IGHV突变标本,分别使用Leader引物和FR1引物进行PCR扩增、基因测序(单克隆峰使用Sanger测序,双克隆峰使用TA克隆测序),将序列与免疫球蛋白数据库中已知的胚系基因标准序列进行比较,以确定IGHV突变状态,比较不同引物扩增后结果的一致性。结果送检的187例标本中单克隆166例,双克隆21例。统计结果显示,使用Leader引物的阳性率(89.76%)高于使用FR1引物的阳性率(84.94%),两者差异无统计学意义(P>0.05)。两种扩增后的PCR产物中位长度分别为295 bp和252 bp,使用Leader引物扩增的V区完整性(100%)高于使用FR1引物扩增的V区完整性(85.62%),两种引物的使用差异有统计学意义(P<0.0001)。准确性方面,使用Leader引物和FR1引物对结果判读整体上差异无统计学意义(P=0.106),而当同源性百分比处于判读的阈值以上范围≥98%和临界范围97%~99%时,两者差异有统计学意义(P=0.003、P=0.008),表明使用Leader引物的结果准确性要高于使用FR1引物的结果准确性。结论IGHV突变检测时,建议优先使用Leader引物,这样的检测体系准确、快速,能显著提高报告单时效。

基于靶向扩增子测序的快速二代测序策略在诊断髓系肿瘤中的临床应用

目的探讨基于靶向扩增子测序的快速二代测序(NGS)策略在诊断髓系肿瘤中的应用价值。方法观察性研究。收集2021年2月至2022年8月就诊于苏州大学附属第一医院的682例患者的骨髓或外周血标本,同步进行快速NGS和常规NGS检测,分别采用本地Ion Reporter软件和自主建立的生物信息学分析平台进行测序结果分析,比较2个测序平台的检测时效性,同时采用Kappa一致性检验来评估2个测序平台结果的一致性。应用快速NGS结合多重PCR和原位荧光杂交技术,在72 h内对年龄18~59岁的新诊断急性髓系白血病(AML)患者进行筛选,筛选出欧洲白血病网(ELN)2017高危组AML进行个体化诱导治疗。结果从样本接收到报告单发放,快速NGS和常规NGS检测周期时间分别为3(2,4)d和13(11,15)d,差异有统计学意义(Z=-22.636,P<0.001)。682份标本共计1507个突变位点,快速NGS共检出1499个突变位点,检出率为99.5%,检出674份结果准确,准确率为98.8%;常规NGS共检出1506个位点,检出率为99.9%,检出681份结果准确,准确率为99.9%。682份标本,181份未检出突变,501份检出突变,快速NGS漏检8份,常规NGS漏检1份。Kappa一致性检验显示,2种NGS检测结果一致性较好(Kappa=0.967,P<0.001)。通过快速诊断的286例AML患者中,筛选出ELN不良风险AML 78例,其中42例患者入组,年龄39(33,52)岁,在接受1个疗程的维奈克拉联合地西他滨诱导治疗后,78.6%(38/42)的患者获得复合完全缓解。104例其他髓系肿瘤中,快速NGS检出突变80例,检出率为76.9%,其中89.0%(215/242)的突变位点可以作为骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性肿瘤和骨髓增生异常/骨髓增殖性肿瘤诊断分型、预后评估及靶向用药的依据。结论基于靶向扩增子测序的快速NGS与常规NGS一致性较好且缩短了诊断时间,检测灵敏度及检测范围已经满足髓系肿瘤诊断分型、预后分层及靶向治疗的需求。