鲍曼不动杆菌整合子研究

目的明确我院鲍曼不动杆菌中整合子的分布及基因盒结构。方法采用K-B法测定68株鲍曼不动杆菌对12种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)分析其整合子。结果鲍曼不动杆菌对含舒巴坦制剂头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦耐药率最低分别为20.6%和47.1%,亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为77.9%、75.0%,对其他抗菌药物的耐药率均在70%以上。36株细菌整合子PCR阳性,片段长度为2939bp,携带有aacA4、catB8和aadA1基因。结论鲍曼不动杆菌整合子主要介导对氨基糖苷类及氯霉素的耐药性。

对鲍曼不动杆菌整合子相关的耐药基因分析

目的明确我院鲍曼不动杆菌中整合子的分布及基因盒结构。方法采用K-B法测定68株鲍曼不动杆菌对12种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)分析其整合子。结果鲍曼不动杆菌对含舒巴坦制剂头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦耐药率最低分别为20.6%和47.1%,亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为77.9%、75%,对其他抗菌药物的耐药率均在70%以上。36株细菌整合子PCR阳性,片段长度为2939bp,携带有aacA4、catB8和aadA1基因。结论鲍曼不动杆菌整合子主要介导对氨基糖苷类及氯霉素的耐药性。

绍兴市MSM人群HIV-1分子传播网络特征分析

目的 分析浙江省绍兴市男男性行为人群(MSM)艾滋病病毒1型(HIV-1)分子传播网络特征,为MSM人群艾滋病防治提供依据。方法 选择2021年1月—2023年9月绍兴市新报告MSM人群艾滋病病毒感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)为研究对象,收集抗病毒治疗前血浆样本,采用反转录PCR和巢式PCR扩增HIV-1 pol基因,构建系统进化树分析基因亚型;采用HIV-TRACE法构建1.5%基因距离的分子传播网络,分析成簇情况和分子簇内病例特征。结果纳入2021年1月—2023年9月绍兴市MSM人群HIV/AIDS病例216例,获得合格序列179例。HIV-1亚型以CRF07_BC和CRF01_AE为主,分别为95和66例。在1.5%基因距离下共形成20个分子簇,61个节点和58条边。61条序列入网,入网率为34.08%。绍兴市各县(市、区)均有MSM人群HIV/AIDS病例入网。节点数≥10个的大分子簇1个,涉及5个县(市、区) 12例病例;节点数4~5个的中分子簇3个;节点数2~3个的小分子簇16个。边数≥4条的高传播风险病例有7例,均为CRF07_BC亚型;其中2例来自大分子簇,5例来自嵊州市、新昌县病例组成的同一分子簇。结论 绍兴市MSM人群HIV/AIDS病例HIV-1基因亚型以CRF07_BC和CRF01_AE为主,存在跨地区HIV传播,嵊州市和新昌县可能存在潜在传播风险点。

绍兴市新确证HIV-1感染者分子传播网络及耐药基因分析

目的 通过HIV毒株基因序列构建监测绍兴市新确证感染者传播关系的分子网络,分析网络特征为疫情流行趋势和防治提供依据。方法 分析2021年10月至2022年9月绍兴市新确认未经ART的249例感染者样本,采用RT-PCR和nest-PCR方法扩增HIV-1的pol基因,构建系统进化树分析亚型和不同基因距离的分子网络,通过美国斯坦福大学HIV耐药数据库HIVdb Program在线软件工具分析耐药突变位点。结果 获得186例样本序列,发现6种亚型,分别为CRF07_BC(96例,51.6%)、CRF01_AE(58例,31.2%)、CRF08_BC(22例,11.8%)、CRF85_BC(2例,1.1%)、CRF55_01B(5例,2.7%),以及独特重组型(CRF01_AE/CRF07_BC,3例,1.6%)。在0.75%为基因阈值,共形成20个分子簇,55条序列入网,入网率为29.6%(55/186),最大的分子簇C1包含13例病例,12例均为50岁以上人群,10例(76.9%)携带NNRTI耐药突变K103 N。C2分子簇为4例学生,均通过男男性行为途径感染。25例存在导致耐药的突变,治疗前耐药率为13.4%(25/186),其中NRTI耐药突变4例,分别为T69D、T215S/TA和L74I,NNRTI耐药突变21例分别为K103 N、E138A/EV/G、P225PH和Y188F,PI耐药突变4例,分别为L90LM、M46I、K20KT和N88 ND。结论 CRF07_BC亚型通过高危人群持续传播;50岁以上有推断的传播关系的老年人簇与MSM感染簇是绍兴市需要干预的重点目标,需要更有效的干预以防止病毒传播。

2018年至2019年浙江省绍兴市新确证人类免疫缺陷病毒1型感染者的分子传播网络特征分析

目的分析浙江省绍兴市新确证人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染者传播关系的分子网络特征,为疫情流行趋势和防治提供依据。方法纳入2018年8月至2019年12月绍兴市新确证未经抗病毒治疗的423份HIV-1感染/艾滋病病例血液样本,获得375份样本序列,采用反转录聚合酶链反应和巢式聚合酶链反应扩增HIV-1的pol基因,采用MEGA 6.0软件构建系统进化树分析亚型,并采用HyPhy软件和Cytoscape 3.7.2。生成不同基因距离的分子网络,通过美国斯坦福大学HIV耐药数据库在线软件工具分析耐药突变位点。结果375份样本序列中发现8种亚型,优势亚型为流行重组型(circulating recombinant form,CRF)07BC 215份(57.33%),CRF01AE 103份(27.47%),其他包括CRF08BC、CRF85BC、CRF5501B、B、C和CRF01AE/B亚型。在基因距离为1.50%时,共形成24个分子簇,194条序列入网,入网率为51.73%。在分子簇最多的0.75%基因距离时,共形成30个分子簇,129条序列入网,入网率为34.40%,35例以老年人为主的病例聚集成CL1簇。42份样本存在监测性耐药突变(surveillance drug resistance mutation,SDRM),耐药传播率为11.20%(42/375),其中非核苷类反转录酶抑制剂耐药突变38例,分别为K103N(32/375,8.53%)、K103S(4/375,1.07%)、Y188L(1/375,0.27%)和G190A(1/375,0.27%),蛋白酶抑制剂耐药突变4例,分别为M46I(3/375,0.80%)和V82A(1/375,0.27%)。分子簇C2序列携带高比例耐药突变(94.29%,33/35)。结论绍兴市HIV-1亚型丰富多样,CRF07BC亚型传播迅速;在0.75%基因距离仍聚集的CL1簇老年病例亟待干预,防止该耐药毒株的进一步快速传播。

浙江省绍兴市50岁及以上人群HIV-1分子网络和传播簇特征分析

目的分析浙江省绍兴市2018年7月至2020年6月报告的50岁及以上中老年人HIV-1分子网络特征,掌握HIV-1在该人群中传播网络的危险因素和特点,为制订有效的干预措施提供依据。方法2018年7月至2020年6月连续收集新报告感染HIV-1的50岁及以上中老年人血液样品147份,采用反转录聚合酶链式反应和巢式聚合酶链式反应扩增HIV-1的pol基因,构建系统进化树分析亚型和不同基因距离的分子网络,对研究对象进入网络的相关因素及成簇病例特征进行分析。结果147份样品序列中检测到4种基因型,其中以CRF07_BC(76例,51.70%)为主,其次为CRF01_AE(36例,24.49%)、CRF08_BC(33例,22.45%)和B(2例,1.36%)。共74条序列进入网络,入网率为50.34%,形成12个分子簇,簇内个体数分别在2~30例。对进入网络的影响因素分析,发现文化程度和艾滋病相关知识知晓率低、确诊前不关注艾滋病相关话题、商业性行为从未使用安全套和暗娼价格低于50元更容易进入网络。多因素logistic回归结果显示,暗娼价格低是进入网络的影响因素。入网病例中,CRF07_BC亚型的构成比最高(30例,40.54%),并形成一个包含30例病例的大簇,其病例大多居住在越城区城南街道及附近,均在附近有商业性行为;此外CRF01_AE亚型形成一个包含暗娼感染者在内的7例病例分子簇,簇内病例居住在齐贤街道及附近;12个分子簇中有12对夫妻双阳性病例,均为男性商业性行为引起的家庭内传播。结论绍兴市50岁以上中老年感染者HIV-1亚型多样,进入网络的相关因素主要为对艾滋病防治知识匮乏和与低档暗娼发生不安全性行为;簇内病例呈现地理的相对聚集性以及家庭内传播,应加强疫情聚集街道中老年人群干预和HIV筛查,有效遏制艾滋病的传播。

核酸定量检测试验应用于HIV-1感染诊断的评价

1型艾滋病病毒(HIV-1)感染的诊断依赖于实验室检测,不同的检测方法由于标志物的不同而有不同的窗口期。常规的酶联免疫吸附试验(ELISA)+蛋白印迹试验(WB)的检测策略存在早期感染漏检的风险。在可疑人群中应用更高效的检测策略,可以有效地诊断HIV-1的早期感染。

绍兴市HIV-1毒株的耐药变异研究

目的了解绍兴市1型艾滋病病毒(HIV-1)株的耐药变异情况。方法分析2013-2014年绍兴地区新确认未经抗病毒治疗的130例HIV-1感染者,以及2014年前抗病毒治疗满一年且病毒未抑制的34例感染者样本,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和巢式-聚合酶链式反应(Nested-PCR)方法扩增HIV-1的pol基因区全长,参照美国斯坦福大学HIV耐药数据库,确定HIV亚型及耐药突变位点。结果 34例新诊断HIV感染者及33例病毒未抑制感染者的样品检测到耐药突变,主要亚型为CRF01_AE和CRF07_BC。仅在病毒未抑制感染者中检测到针对核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)的耐药突变,主要类型有M184V(42.42%)、K70R(15.15%)、D67N(12.12%)。在新确认感染者和病毒未抑制感染者两组人群中,均检测到针对非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药的突变,主要类型有V179D/E/T(10.00%和18.18%)、K103N(2.22%和21.21%);在病毒未抑制感染者中还有Y181CY(21.21%)、V90I(12.12%)、G190A(15.15%)。在反转录酶(RT)区和整合酶(IN)区仅检测到少量次要耐药突变。结论绍兴市HIV经抗病毒治疗后易产生耐药性,部分可在新感染人群中传播,应对HIV耐药变异加强监测。

绍兴市HIV-1未治疗人群潜在耐药性研究

目的了解浙江省绍兴市新确诊HIV-1感染者传播性耐药情况。方法分析2013年-2014年绍兴地区新确认未经抗病毒治疗的130例HIV-1感染者样本,采用逆转录PCR和巢氏PCR方法扩增HIV-1的pol基因区全长,构建系统进化树分析基因亚型,参照美国斯坦福大学HIV耐药数据库,确定HIV耐药突变位点及其对各种抗逆转录病毒药物的敏感性。结果共90例样品获得合格的pol区序列结果,发现CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC、B和重组亚型CRF01_AE/CRF07_BC 5种亚型。34例样品出现耐药突变,占37.78%;7例样品同时存在2个耐药突变,均为次要耐药位点,其中CRF01_AE亚型4例,CRF07_BC、CRF08_BC和B亚型各1例;27例样品出现1个耐药突变,其中主要耐药位点突变11例(12.22%),次要耐药位点突变23例(25.56%)。NNRTIs的耐药突变位点包括V179D/E、K103N;蛋白酶区的次要耐药突变位点有A71V、L10I、L31I、I47M;整合酶区的次要耐药突变位点包括L74I/M、L68V、E157Q、A128T。结论绍兴市HIV原发耐药突变率相对较高,HIV病毒有较高的潜在耐药性,应加强监测。

HIV抗体不确定样品的随访结果

目的了解HIV抗体检测产生不确定结果的特点及随访情况。方法对绍兴市2007—2013年HIV抗体确证检测为不确定结果样品的来源、复检结果及蛋白印迹试验(WB)带型特点进行分析并跟踪随访。结果 955份复检阳性标本经WB试验报告结果为不确定29份,占3.03%。对29份标本的人作追踪随访,完成随访16人,复检ELISA和RT结果均为阳性的8人随访后均转为阳性;复检单项阳性的8人随访后均转为阴性。29份不确定结果中共检测到6种带型,gp160(+)、p24(+)和gp160(+)p24(+)3种带型最为常见,占89.65%。结论复检结果双阳性的样品阳转率较高,应加强随访并寻求替代确认策略,以减少非特异性反应导致假阳性结果。

68家艾滋病实验室室间质评结果分析

目的了解绍兴市艾滋病实验室HIV抗体检测质量,探讨存在的问题,提高检测质量。方法每年对辖区内有资质的艾滋病实验室进行盲样考核,分析2005—2012年室间质量考评结果。结果参评实验室数量8年间增加126.67%,增加的实验室以医疗机构为主。检测试剂以国产第三、四代为主,部分使用进口第四代试剂。定性结果判断正确率100.00%,每年定量结果满意率≥90.00%,但相应的原始记录和室内质控还不够规范。结论通过实验室室间质评反映本市的艾滋病抗体检测水平总体较好,证明实验室检测系统的准确性和可靠性,但质量控制和规范化管理还有待提高。

重症医学科耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌耐药基因研究

目的了解鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型,探讨其耐药性与治疗策略。方法分离2014年-2016年重症医学科(ICU)耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌208株,用VITEK 2全自动微生物鉴定系统进行菌种鉴定及药敏检测,PCR法检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58基因。结果耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌对ICU常用药物除头孢哌酮/舒巴坦外耐药率均> 50%。OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58基因的检出率分别为89. 95%、0. 00%、100. 00%、67. 72%。结论 ICU耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌广泛携带OXA型耐药基因,需要调整用药,加强监测。

浙江省绍兴市HIV-1亚型及流行病相关因素分析

目的了解绍兴地区艾滋病病毒(HIV)基因亚型分布特点,建立本地区HIV-1分子生物学及流行病学数据库。方法回顾性分析2013年1月-2014年7月本地区新确认的100例感染者样本,采用RT-PCR和nest-PCR方法扩增HIV-1的gag/pol区全长基因并测序,基因序列构建Neighbor-Joining系统树分析确定基因亚型。结果共获得82例样品的序列结果,发现CRFO1_AE,CRFO7_BC、CRFO8_BC和B4种亚型,各占46.34%、,35.37%,9.76%和8.54%;经性传播感染HIV/AIDS达96.34%(79例),不同途径感染的HIV-1亚型差异无统计学意义。CRFO7_BC,CRFO8_BC亚型与云南及广西病毒株相近,B亚型则与河南输血传播病毒株相近,CRFO1_AE亚型分为两簇,一簇与福建株相近,另一簇与北京、辽宁MSM病毒株相近。结论―绍兴地区HIV主要通过性途径传播,主要流行的亚型为CRFO1_AE和CRF07_BC。

绍兴市艾滋病治疗患者HIV耐药基因分析

目的了解绍兴市抗病毒治疗患者的耐药基因变异情况,以进一步指导抗病毒药物的选择。方法分析2013年7月-2014年5月绍兴地区抗病毒治疗大于1年且病毒未抑制的36例感染者样本,采用RT-PCR和nest-PCR方法扩增HIV-1的pol基因区全长,参照美国斯坦福大学HIV耐药数据库,确定HIV亚型及耐药突变位点。结果病毒耐药率为6.85%(33/482),33例病毒未抑制感染者样品检测到耐药突变,主要亚型为CRF01_AE和CRF07_BC。检测到针对核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)的耐药突变,主要类型有M184V、K70R、D67N,针对非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药的突变,主要类型有V179D/E/T、K103N、Y181CY、V90I、G190A。结论绍兴市HIV经抗病毒治疗后易产生耐药性,应加强对HIV耐药变异监测和患者服药依从性干预。

3例HIV早期感染者抗体检测结果报道

艾滋病病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）感染的诊断依靠实验室HIV抗体检测,制定适合中国国情的实验室检测策略,对疫情监测、诊断和治疗有十分重要的意义。目前《全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）》是实验室HIV抗体检测的依据,一份可疑样品需经过初筛试验、复检试验和确证试验后报告最终结果,如确证试验阴性,报告HIV抗体阴性;如呈阳性反应,报告HIV-1抗体阳性。

浙江省绍兴市46例男男性行为者HIV感染基因特征分析及流行病相关因素分析

目的了解浙江省绍兴市男男性行为者(MSM)人群中HIV-1感染者的亚型类型和特征。方法分析2013年1月至2014年7月本地区新确证未经抗病毒治疗的50例MSM感染者样本,采用RT-PCR和nest-PCR方法扩增HIV-1的gag和pol全长基因区,成功扩增46份样品,构建系统进化树分析基因亚型。结果 46份样品中发现CRF01_AE、CRF07_BC和B三种亚型和1株AE、BC重组亚型,各占52.17%、39.13%、6.52%和2.17%。结论绍兴市HIV-1感染的MSM人群中主要流行的亚型为CRF01_AE和CRF07_BC,该人群感染率高,应加强监测。

HBV-LP与HBV-DNA检测法在HBeAg阴性乙肝患者及正常人中的比较

目的:通过检测餐饮从业人员、学生等公共卫生体检人员中乙肝病毒大蛋白(hepatitis B virus large proteins,HBV-LP)的情况,探讨HBV-LP与HBV-DNA检测法在HBeAg阴性HBV患者和正常人中检测效果的异同。方法:采用酶联免疫法(ELISA)测定乙肝两对半(HBV M)以及乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP);采用Real-time PCR法检测HBV-DNA,对各类体检人员的709份血清标本和200份正常人的血清标本分别进行检测。结果:(1)在489份HBeAg阴性乙肝患者的标本中,HBV-LP与HBV-DNA检测法的检测结果差别无统计学意义(χ2=0.58,P>0.05)。(2)HBV-LP S/CO值与HBV DNA拷贝数呈正相关(r=0.951,P<0.05)。(3)在乙肝二对半(HBV-M)均阴性200份餐饮从业人员的标本中,两种方法的检测结果差别亦无统计学意义(χ2=0.40,P>0.05)。结论:乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)像HBV-DNA一样能够有效、真实地反映HBV病毒复制情况,该方法可以在体检领域推广使用。