肝细胞癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞代谢重编程的研究进展

肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)是肝癌微环境中数量最多的免疫细胞,具有高度可塑性与异质性,是造成肝癌抑制性免疫微环境的重要亚群之一。为满足自身快速增殖、侵袭和迁移的需要,肿瘤细胞提高其代谢速率,进而造成了缺氧和酸性的肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)。随着肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展,TAMs不断进行代谢重编程以调节其表型和功能,从而适应TME的变化。此外,TAMs代谢重编程中产生的代谢物质对TME免疫特性的重塑及对其他免疫细胞的作用,如抑制T淋巴细胞和自然杀伤细胞的抗肿瘤活性,进而促进HCC的发生发展及转移。本文对HCC微环境中TAMs代谢重编程的研究进展进行了简要综述。

靶向脑胶质瘤的Ang外泌体递送系统的构建

目的构建可以精准靶向胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的外泌体。方法构建靶向GBM的Ang-Lamp2b-HA质粒,将Ang-Lamp2b-HA质粒和对照pcDNA3.1载体质粒分别转染入HEK293T细胞后提取工程化外泌体Ang-exo和对照未修饰外泌体Unmod-exo,使用蛋白免疫印迹技术观察两组外泌体标志蛋白表达情况,使用扫描电镜和纳米颗粒分析仪观察两组外泌体形态学表征。建立基于Transwell系统的bEnd.3/LN229体外血脑屏障模型,上下腔室分别接种bEnd.3细胞和LN229细胞,生成完整屏障后,分别在上腔室中加入已染色的Ang-exo和Unmod-exo,通过共聚焦激光扫描显微镜观察两组外泌体在下腔室中胶质瘤细胞荧光强度,验证Ang-exo穿透血脑屏障能力和靶向的能力。已染色的Ang-exo和Unmod-exo外泌体分别通过尾静脉注射入荷瘤小鼠模型,通过活体动物成像和离体器官成像观察两组外泌体在荷瘤小鼠体内荧光分布变化,验证其穿透血脑屏障能力和靶向效果。将Ang-exo与生理盐水分别尾静脉注射入健康小鼠体内,观察比较器官变化情况,对比血液生物化学和炎性因子指标差异。结果转染Ang-Lamp2b-HA质粒和对照pcDNA3.1载体质粒的HEK293T细胞分别产生分泌Ang-exo和Unmod-exo,两组外泌体外形和粒径大小无明显差异。经过体外血脑屏障模型功能鉴定,与Unmod-exo组相比,Ang-exo组穿透血脑屏障的数目明显较高(P<0.05)。与Unmod-exo组相比,Ang-exo组脑部肿瘤区域的荧光强度较高(P<0.05)。与生理盐水组比较,Ang-exo组小鼠血液学指标天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)等肝肾损伤标志物水平,γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)等血清炎性细胞因子水平,脑、心、肺、肝、脾和肾等器官均无明显变化(P>0.05)。结论Ang-exo可以精准靶向GBM,是一种可靠的药物运载平台,为GBM治疗药物的递送提供了新的策略。

外泌体包裹GDF15 siRNA靶向治疗肝癌的研究

目的 在外泌体表面表达肝癌靶向肽SP94,并将生长分化因子15(GDF15)的siRNA包裹至外泌体中,研究其对肝癌的治疗作用。方法 首先设计合成GDF15的siRNA,转染Hepa1-6和H22细胞作为实验组,无靶向的siRNA作为对照组,通过实时定量PCR、蛋白免疫印迹和流式细胞术验证GDF15 siRNA的功能。再构建一个靶向肝癌的SP94-Lamp2b-HA质粒,转染入HEK293T细胞后提取工程化外泌体SP94-外泌体,用SP94-外泌体包裹GDF15 siRNA作为SP94-siRNA-外泌体实验组,空载SP94-外泌体作为空载对照组,通过尾静脉注射法将两组外泌体导入小鼠体内,研究小鼠原位肝癌模型的治疗效果,并对小鼠的生存期进行观察。另外,将SP94-siRNA-外泌体尾静脉注射入健康小鼠体内,观察器官变化情况,对比血液生物化学和炎性因子指标差异。结果 成功合成GDF15 siRNA,在转染Hepa1-6和H22细胞后,GDF15的mRNA和蛋白水平表达明显降低(P<0.05)。在对原位肝癌小鼠的治疗中,与对照组相比,实验组SP94-siRNA-外泌体明显抑制肿瘤的增长(P<0.05),同时延长小鼠的生存期。实验组与对照组小鼠器官、血液生物化学和炎性因子指标无明显差异(P>0.05),表明SP94-siRNA-外泌体对小鼠基本无毒副作用。结论 SP94-siRNA-外泌体可以精准靶向肝癌,并有效地抑制肝癌的生长。

siRNA干扰Geminin基因对脑胶质瘤放疗敏感性的影响

目的观察敲低Geminin对人脑胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。方法利用GEPIA和CGGA数据库分析Geminin在脑胶质瘤组织中的表达及与生存期的相关性。实验分为两组:si-GL2组(对照组)和si-Gem组(干扰组),设计siRNA干扰序列(si-Gem)和阴性对照序列(si-GL2),分别转染脑胶质瘤细胞LN229和U87,qRT-PCR和Western blot检测转染效率及蛋白表达水平。流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后DNA含量分布,进而分析敲低Geminin对DNA再复制的影响。通过AnnexinⅤ-FITC/PI法,用流式细胞术检测敲低Geminin对细胞凋亡的影响。CCK-8细胞增殖实验检测敲低Geminin对胶质瘤细胞LN229和U87放疗敏感性的影响。Western blot检测Geminin相关分子Cdt1和DNA相关损伤蛋白γ-H2AX的表达水平。结果脑胶质瘤组织中Geminin的表达水平高于癌旁正常组织,且Geminin表达越高,脑胶质瘤患者预后越差(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin在LN229和U87细胞中的表达降低(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组敲低Geminin可诱导脑胶质瘤细胞出现DNA再复制表型、细胞凋亡比例显著增加(P<0.05),脑胶质瘤细胞对放疗敏感性增强(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin相关分子Cdt1蛋白表达水平降低,γ-H2AX的蛋白表达水平升高。结论敲低Geminin可以诱导脑胶质瘤细胞出现DNA再复制表型,造成DNA复制压力,并引起自发性细胞周期阻滞及细胞凋亡增多,进而增强脑胶质瘤细胞放疗敏感性,Geminin有望成为脑胶质瘤治疗的新靶点。

重组人B7-H1 IgV疫苗的初步毒理学研究

目的:对重组人B7-H1 Ig V疫苗进行重复给药毒性研究,为后续系统临床前研究提供依据。方法:常规免疫BALB/c小鼠,检测疫苗及佐剂对小鼠一般毒理学指标的影响及疫苗的免疫毒性。结果:B7-H1疫苗及氢氧化铝佐剂对小鼠的进食、体重等一般状况,血液学和血清生化学指标,重要脏器组织的大体病理学,组织病理学情况及相对重量均无显著性影响;B7-H1组小鼠的CD4+T细胞百分率和CD4+/CD8+T细胞比值明显增高。结论:B7-H1疫苗及氢氧化铝佐剂对小鼠一般毒理学指标未见显著影响;疫苗组小鼠的CD4+T细胞百分率和CD4+/CD8+T细胞比值明显增高,提示该疫苗诱导了明显的免疫应答;该研究为重组人B7-H1 Ig V疫苗的进一步临床应用提供了重要证据。