单核细胞增多性李斯特菌iap基因的克隆、表达与p60蛋白的纯化

以单增李斯特菌基因组DNA为模板,利用自行设计的引物,通过PCR法扩增出单增李斯特菌的iap基因。在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ2个酶切位点将其克隆到pMD-18T载体上,构建克隆载体pMD-18T-iap。经测序正确后,将iap基因克隆至表达载体pET-28a上构建表达质粒pET-28a-iap。在IPTG诱导下,携带pET-28a-iap的E.coliBL21(DE3)高效表达分子质量约为60kD的可溶性蛋白及包涵体形式的蛋白,其中可溶性蛋白占总p60蛋白含量的76.3%左右。诱导表达的可溶性蛋白通过Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在95.6%以上的重组p60蛋白,其提取率为68.3%左右。

单核细胞增多性李斯特菌p60蛋白表达条件的优化

在成功构建重组表达载体pET-28a-p60和获得重组宿主菌E.coliBL21(DE3)的基础上,对重组宿主菌E.coliBL21(DE3)进行表达p60蛋白条件的优化研究。结果表明:将重组大肠杆菌培养至OD600nm达0.7～0.8左右时,加入浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),在摇床温度为25℃,转速为150r/min条件下诱导表达6h,可得到重组表达的p60蛋白占总蛋白的比例为42.32%,其中可溶性蛋白占总p60蛋白的比例为85.36%左右,为p60蛋白诱导表达的最优条件。

如何加强施工管理提高建筑质量

近些年来,在城市化进程的快速推进中,我们国家的建筑工程逐渐成为经济发展的助力者。现实中的很多建筑工程会因为企业经营理念不当以及施工技术人员综合素质参差不齐而影响到整个建筑工程的质量管理。更为重要的是,很多的建筑企业很多时候只是一味追求经济利益,而未能保证建筑工程的稳定性、耐久性、牢固性等,其最终将会造成经济损失。综合以上内容,追本溯源则是缺乏合理的施工管理而造成的。对于实际的建筑工程,未能进行有效的管理监督,任施工方对其进行肆意修缮,从而最终造成严重的建筑工程质量低下的局面。因此,本文从现状分析、建设成本、优化结构设计等多方面对提升建筑质量的管理策略进行分析讨论,从而最终为推动我国建筑工程发展提供重要的参考意见。

浅探老爷庙的神秘及建筑特色

老爷庙坐落在江西省都昌县多宝乡龙王山西端，面临鄱阳湖。地处东经116°03′3413″，北纬29°22′38．5″。东距多宝乡镇约6公里，南距都昌县城约30公里，西距星子县城约25公里。交通便利，是鄱阳湖生态旅游区著名景点之一。（图一）。

江西都昌鹤舍村古建筑格局与文化价值初探

鹤舍村位于都昌县苏山乡苏山村委会,距苏山乡政府四公里,属苏山乡的第二小集镇.距九景高速十公里,省级袁多公路穿村而过.从九江市驱车至本地,只要一小时.环鄱阳湖游船,从湖口鞋山上水,不要半小时即可登陆,发展古村旅游的区位、交通优势明显(图一).

高精度空对地“智能”武器

高精度空对地“智能”武器武装直升机和攻击机是战场上能够击毁大量装甲车辆和其它要害目标的决定性武器系统。高机动性及全天候超低空的奇袭作战能力，点目标攻击准确性和准确到达投弹目标，在很短时间内大量射击的性能，使旋翼和固定翼飞机能够完成大区域的作战任务。...