基于模式生物斑马鱼对口腔炎合剂的胚胎及肝肾发育的影响

目的利用斑马鱼为动物模型,初步分析口腔炎合剂对胚胎及肝肾发育的影响。方法待斑马鱼发育至受精后10 h(10 hpf)时以简单随机方法分组并添加梯度浓度的口腔炎合剂。药物作用72 h后在显微镜下观察口腔炎合剂对胚胎及肝肾发育,并记录图像数据。结果当口腔炎合剂稀释浓度高于1.625×10^(-5)g/mL时对10 hpf斑马鱼开始出现胚胎发育毒性,表现为发育迟缓、心腔狭窄等。当口腔炎合剂稀释浓度高于6.500×10^(-5)g/mL时对36 hpf斑马鱼产生肝肾发育毒性,主要表现为肝脏与周边组织分界线不太明显,肾脏和鱼鳔区域明显增大,并伴有水肿瘀滞现象。结论口腔炎合剂具有一定的胚胎及肝肾毒性,孕妇和哺乳期妇女,以及肝肾功能不全者原则上不得使用本品,必须使用时应严格限量,并在医生指导下谨慎使用。

益母草注射液通过其生物碱成分上调Tie-2、VEGFR2和VEGF促进斑马鱼血管新生

目的:研究益母草注射液在斑马鱼血管损伤模型中的促血管生成作用,并阐明潜在的物质基础和分子机制。方法:采用HPLC-PAD和TLC技术检测益母草注射液的主要成分;利用舒尼替尼诱导转基因Tg(flk1:eGFP)斑马鱼血管损伤模型,益母草注射液干预治疗后,测量斑马鱼节间血管(ISVs)长度,QT-PCR检测血管生成相关基因的表达水平。结果:发现益母草注射液的主要成分是水苏碱、胆碱和葫芦巴碱;其中,益母草注射液、葫芦巴碱和胆碱可减轻化学诱导的斑马鱼血管损伤,其作用机制涉及益母草注射液上调Tie-2、VEGF和VEGFR2的表达,其主要成分葫芦巴碱上调Tie-2和VEGF的表达,胆碱上调VEGF和VEGFR2的表达。结论:益母草注射液及其主要生物碱成分可通过上调Tie-2、VEGFR2和VEGF来促进血管生成。

丹蒽醌通过MAPK-HNF4α信号通路抑制乙型肝炎病毒复制的作用机制研究

目的:本课题旨在研究丹蒽醌对HBV复制的抑制作用及其在体外抗HBV的分子机理。方法:运用MTT法检测丹蒽醌对Hep G2.2.15细胞的细胞毒性;利用Q-PCR检测丹蒽醌对Hep G2.2.15细胞内HBV DNA表达量的抑制效果;利用蛋白免疫印迹实验检测丹蒽醌对Hep G2.2.15细胞内蛋白信号的调控作用。结果:丹蒽醌在不影响Hep G2.2.15细胞增殖的浓度下就能够显著抑制其HBV cccDNA的复制,IC_(50)约为20.43μM。分子层面研究表明,丹蒽醌可以通过激活MAPK通路,从而降低乙肝复制相关的HNF4α蛋白的表达,同时还能下调乙肝复制相关的HBx表达从而有效阻止HBV的复制。结论:丹蒽醌通过激活MAPK1/3通路从而抑制Hep G2.2.15细胞中HBV的复制。

响应面法优化南方红豆杉中10-DAB提取工艺及其含量测定

为探究南方红豆杉(Taxus wallichiana var.mairei)中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DAB)的最佳提取工艺,本研究以南方红豆杉中10-DAB含量为指标,以料液比、提取时间及超声温度为考察因素,采用单因素试验结合响应面法优化10-DAB的提取工艺,并采用超高效液相色谱(UPLC)法检测不同采摘部位、不同生长年限及不同采收时节的10-DAB含量差异。结果表明,南方红豆杉中10-DAB的最佳提取工艺条件为料液比1∶15(g/mL)、提取时间23 min、超声温度40℃,该工艺条件下10-DAB的含量为1.18%,与理论值相对偏差为0.42%。UPLC检测结果表明,南方红豆杉叶的10-DAB含量显著高于枝和树皮,且10-DAB全年累积含量受季节影响明显,10月份达到最高值。该研究可为南方红豆杉中10-DAB的提取利用提供参考依据。

紫草素对斑马鱼胚胎毒性和血管抑制作用

目的评价紫草素（shikonin）对斑马鱼的胚胎发育毒性及其血管抑制作用。方法将受精后0、10、24、48 h（hours post fertilization,hpf）发育正常的斑马鱼胚胎分别置于含有不同剂量紫草素的胚胎培养液中12、24、36、48 h后,显微镜下观察紫草素对斑马鱼胚胎的畸形率、死亡率、心率和血管生成的影响。结果给药24 h后,紫草素对不同发育阶段斑马鱼的LD50在0.73~1.56 mg/L之间。给药48 h后,该LD50值在0.25~0.39 mg/L之间。在给药大于0.5 mg/L时,紫草素能在12 h内引起斑马鱼的发育畸形,分别在1 h和24 h内均能引起斑马鱼心率衰减（P〈0.01）,在12 h内可以显著抑制斑马鱼正常血管的生长。结论紫草素对斑马鱼胚胎发育具有毒性,并对斑马鱼血管生成具有一定的抑制作用。

广藿香油及其主要成分对斑马鱼胚胎发育毒性的比较研究

目的:观察和比较广藿香油及其主要成分广藿香醇、广藿香酮对斑马鱼胚胎发育的毒性。方法:分别将发育10h的胚胎置于梯度浓度的广藿香油、广藿香醇和广藿香酮中培养,于24h、48h、72h、96h观察和统计各组斑马鱼胚胎的死亡率、畸形率、胚胎形态、摆尾次数和心率。结果:随作用时间延长,三种药物毒性表现越明显;24h时广藿香醇和广藿香酮对斑马鱼的LD50分别为50.3、12.9mg/L,广藿香油组无明显致死现象;96h时广藿香油、广藿香醇和广藿香酮对斑马鱼胚胎的LC50分别为21.22、12.863、11.76mg/L。对比12mg/L浓度下三种药物的毒性,广藿香醇和广藿香酮在24h时主要表现为生长缓慢、止于体节期,96h时表现为导致幼鱼脊柱侧弯,心脏肿大,卵黄囊肿大、摆尾次数和心率明显下降等现象;广藿香油在各时间点主要表现为延缓黑色素的生成和轻微的心脏毒性;对比结果表明,广藿香酮毒性最明显。结论:广藿香油、广藿香醇和广藿香酮对斑马鱼均有胚胎发育毒性,毒性大小:广藿香酮>广藿香醇>广藿香油。

木香及藏木香挥发油对斑马鱼胚胎发育毒性研究

目的:以斑马鱼胚胎为模型,研究木香及藏木香挥发油对斑马鱼胚胎发育毒性及心脏发育毒性的影响。方法:采用斑马鱼胚胎模型,将其暴露于含有不同浓度(50、25、12.5、6、3、1.5mg·L-1)的木香及藏木香挥发油中培养96h,于24,48,72,96hpf观察斑马鱼胚胎发育形态,畸形率,24hpf摆尾率,48hpf心率及各时间点的死亡率。结果:24hpf,藏木香挥发油和木香挥发油对斑马鱼胚胎毒性的LC50分别为12.71、44.88mg·L-1;96hpf藏木香挥发油和木香挥发油对斑马鱼胚胎毒性的LC50分别为7.11、17.18mg·L-1。在6mg·L-196hpf藏木香挥发油胚胎发育主要表现为脊柱侧弯、心脏水肿、卵黄囊水肿;而相同浓度、相同剂量的木香挥发油则未监测到该现象。12mg·L-1藏木香挥发油可致斑马鱼摆尾次数和心率明显下降(P<0.01),木香挥发油则无明显影响(P>0.05)。结论:藏木香和木香挥发油对斑马鱼毒性大小:藏木香挥发油>木香挥发油。

异甘草素对斑马鱼胚胎发育、血管生成和心脏的影响

目的研究异甘草素对斑马鱼Danio rerio var.胚胎发育、血管生成以及心脏的影响。方法异甘草素处理受精后10 h、24 h的正常斑马鱼胚胎,显微镜下观察并记录药物作用12 h、24 h、36 h、48 h后斑马鱼胚胎发育、血管生成、心率以及心脏形态。结果异甘草素浓度为4μg·mL^(-1)时可轻度抑制斑马鱼胚胎尾部发育,浓度为12μg·mL^(-1)及以上时会严重抑制胚胎发育。异甘草素具有抑制斑马鱼胚胎血管生成作用,浓度为2μg·mL^(-1)时即可抑制血管的生成,8μg·mL^(-1)时甚至完全抑制尾部静脉血管的生成。异甘草素可显著降低斑马鱼胚胎心率,中低剂量下,心率随着作用时间增加呈先降后升的趋势,对心脏形态无影响;高剂量下,心率随作用时间增加而降低,异甘草素致斑马鱼胚胎心包与卵黄囊肿大。结论中低剂量异甘草素具有良好的抗血管生成和减慢心率的作用,高剂量时随着作用时间延长具有一定的抑制发育作用。

凤仙花色素最佳提取工艺研究

通过试验确定凤仙花色素提取的最佳工艺条件:以75%乙醇溶液(pH=1)为浸提剂,料液比为1:100,于80℃下浸提30min。

凤仙花色素最佳提取工艺研究

通过实验确定了凤仙花色素提取的最佳工艺条件,以75%乙醇溶液(pH=1)为浸提剂,料液比为1∶100,于80℃下浸提30min。

补骨脂乙素通过调控Sirtuins相关信号通路抑制非小细胞肺癌进程

目的:观察补骨脂乙素对人非小细胞肺癌增殖、凋亡和周期的影响,探究补骨脂乙素抑制H460细胞活性的分子机制。方法:采用MTT法检测补骨脂乙素对H460细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测补骨脂乙素对H460细胞周期阻滞的影响;Annexin V-FITC/PI染色法探究补骨素乙素对H460细胞凋亡的影响;免疫印迹法检测细胞内信号通路中关键蛋白的表达情况。结果:与空白对照组相比,补骨脂乙素(60μM)和SirReal2(50μM)给药组明显抑制细胞增殖,促使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞内ROS生成以及细胞凋亡,并且明显抑制了SIRT1和SIRT2的去乙酰化活性,促使其相关蛋白C-myc,Cyclin D1,Bcl-2表达减少,Bax和乙酰化的α-tubulin表达明显增多。结论:补骨脂乙素对H460细胞的增殖和细胞周期具有明显抑制作用,并且还会诱导ROS生成从而导致细胞凋亡,其分子机制可能是通过影响细胞内Sirtuins相关的信号通路实现的。

广藿香醇通过PKM2和NF-κB诱导MV4-11细胞凋亡相关机制

目的:探讨广藿香醇(PA)诱导MV4-11细胞凋亡,并探讨其可能存在的相关活性。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测PA对人结、直肠癌细胞HCT116,人肝癌细胞Hep G-2,人肺癌细胞A549,人急性淋巴髓单核细胞白血病细胞MV4-11,人皮肤黑色素瘤细胞A375,小鼠乳腺癌细胞4T1,人单核细胞型淋巴瘤细胞THP-1,人正常胚肾293A细胞的增殖抑制作用;采用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;通过Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法并应用流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化M2型丙酮酸激酶(p-PKM2),核转录因子-κB(NF-κB),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)凋亡蛋白的表达。结果:PA能抑制人HCT116,Hep G-2,A549,MV4-11,A375,4T1,THP-1,293A细胞的增殖,半抑制浓度(IC50)分别为0.26,0.32,0.28,0.09,0.37,0.23,0.24,0.33 mmol·L-1;作用于MV4-11细胞24 h后可使细胞核皱缩,染色质凝聚,形成明显的凋亡小体。0.1,0.2,0.5 mmol·L-1PA能诱导MV4-11细胞凋亡,凋亡率分别为7.9%,13.6%,22.0%,与溶剂组比较,结果具有统计学差异(P<0.05);Western blot检测显示,PA使细胞NF-κB,p-PKM2,Caspase-3蛋白表达发生明显改变(P<0.05)。结论:PA能抑制人白血病细胞MV4-11细胞的增殖,并诱导其发生凋亡,作用机制可能与NF-κB,p-PKM2,Caspase-3蛋白量的改变有关。

重楼皂苷Ⅰ诱导G_2/M期阻滞及干扰微管结构抗结肠癌HCT116细胞作用机制

目的:探讨重楼皂苷Ⅰ(PPI)对人结肠癌HCT116细胞周期的影响,并研究其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测PPI对HCT116细胞的体外抑制活性;采用Hoechst33258染色法观察PPI对HCT116细胞核数量的影响;采用流式细胞仪检测PPI对HCT116细胞周期的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶(CDC2)和细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(CDC25C)蛋白的表达和活性,利用细胞免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜检测PPI对HCT116细胞微管的影响。结果:PPI以剂量-时间依赖的方式抑制HCT116的体外增殖,Hoechst 33258染色发现PPI处理组双核细胞数量明显增加(P<0.05,P<0.01);将其细胞周期阻滞于G2/M期;PPI未能抑制G2/M期相关蛋白CDC2,CDC25C的表达和活性,却有促进作用;PPI可导致细胞微管结构紊乱。结论:PPI会导致HCT116细胞阻滞在G2/M期,其作用机制与干扰细胞内微管结构有关。

木香挥发油诱导人白血病细胞MV4-11凋亡及其作用机制的探讨

目的:以人急性髓性白血病MV4-11细胞为研究对象,探讨木香挥发油对MV4-11细胞增殖与凋亡抑制作用及其作用机制。方法:以质量浓度分别为3,6,12,25,50,100 mg·L^(-1)的木香挥发油作用于人急性髓性白血病MV4-11细胞不同时间,另设空白组,采用噻唑蓝(MTT)法检测木香挥发油对其增殖抑制作用,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化,Annexin V-FITC,PI双染及PI单染法应用流式细胞术检测细胞凋亡和周期,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测蛋白激酶B(AKT),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)凋亡蛋白的表达。结果:木香挥发油对MV4-11细胞的半抑制浓度(IC50)为13.33 mg·L^(-1);木香挥发油作用于MV4-11细胞24 h后可使细胞核皱缩,染色质凝聚,形成明显的凋亡小体;与空白组比较,木香挥发油G0/G1期和G2/M期细胞明显减少,S期细胞明显增多(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,12,25,50,100,150 mg·L^(-1)木香挥发油能诱导MV4-11细胞凋亡(P<0.05);与空白组比较,25,50,100,150 mg·L^(-1)木香挥发油可抑制AKT的磷酸化,并促进Caspase-3蛋白的降解(P<0.05,P<0.01)。结论:木香挥发油能抑制人白血病细胞MV4-11细胞的增殖,其作用机制可能与抑制AKT活性进而诱导细胞凋亡效应有关。

一种茚酮衍生物的合成及其体内外抗肿瘤活性研究

目的:制备新型茚酮衍生物,研究其抗肿瘤活性。方法:以水合茚三酮、反式β-硝基苯乙烯和戊烯醛为原料,用仲胺催化的MBH-麦克加成-环化"一锅法"反应和后续的碘关环反应制备茚酮骨架与呋喃并吡喃骨架桥接的茚酮衍生物;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定新型茚酮衍生物对人肿瘤细胞株MV4-11,THP-1,U87,H1975,A549,Lncap,DU145,Huh-7,Raji,HCT116,MDA-MB-231,MKN45,Capan-2,A2780,A2780/Taxol,A2780/CP,MCF7/ADR的增殖抑制作用;用人急性髓性白血病MV4-11细胞和人结肠癌HCT116细胞皮下注射小鼠建立小鼠肿瘤模型,考察新型茚酮衍生物对肿瘤体内生长的影响。结果:得到结构确证的茚酮骨架与呋喃并吡喃骨架桥接的产物;能抑制MV4-11,THP-1,U87,H1975,A549,Lncap,DU145,Huh-7,Raji,HCT116,MDA-MB-231,MKN45,Capan-2和A2780细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)分别为1.31,3.23,3.88,3.23,3.46,2.57,2.86,4.17,4.34,4.18,4.63,3.25和3.26 mmol·L-1;能抑制耐药肿瘤细胞A2780/Taxol,A2780/CP,MCF7/ADR增殖,IC50分别为4.62,4.33和3.71 mmol·L-1;体内抗肿瘤研究中,茚酮衍生物抑制MV4-11(12.5,25和50 mg·kg^(-1),ig)和HCT116(12.5,25和50 mg·kg^(-1),ig)模型小鼠肿瘤生长,且抑制作用呈剂量依赖。结论:新型茚酮衍生物((3S,3aR,4S,5S,7a S)-3-碘-2,2-二甲基-5-硝基-苯基-2H,3H,3a H,4H,5H,7a H-螺[呋喃[2,3-b]吡喃-6,2'-茚]-1',3'-二酮)具有良好的体内外抗肿瘤活性,可作为新的抗肿瘤药物先导化合物进行进一步的研究与开发。

木香挥发油对斑马鱼胚胎发育毒性的初步研究

目的:探讨梯度浓度木香挥发油对斑马鱼胚胎发育的影响。方法:用梯度浓度的木香挥发油处理2、12、24hpf的斑马鱼胚胎,36h后检测木香挥发油对不同发育期斑马鱼的半数致死剂量(LD50),同时分别在加药后12、24、36h记录木香挥发油对12hpf或24hpf斑马鱼胚胎畸形率以及心脏形态和心率的影响。结果:药物作用36h后,木香挥发油对2、12、24hpf斑马鱼胚胎的LD50分别为2.35、6.83、26.9μg/m L;在浓度>3μg/m L时,木香挥发油对12hpf的斑马鱼胚胎表现出明显的致畸性,对24hpf的斑马鱼表现出延迟发育和一定的特异性心脏毒性,导致心脏畸形、心包水肿、心率随浓度增大而减小。结论:木香挥发油对斑马鱼胚胎发育有一定毒性,而且发育期越早,毒性越大,对24hpf的斑马鱼表现为延迟发育和特定的心脏毒性。

凤仙花色素最佳提取工艺研究

通过试验确定凤仙花色素提取的最佳工艺条件:以75%乙醇溶液(pH=1)为浸提剂,料液比为1∶100,于80℃下浸提30min。