人鼻粘膜类器官冠状病毒感染模型可用于抗病毒药物的筛选和评价

目的利用人鼻粘膜类器官建立冠状病毒(CoV)感染模型,并用于药物抗病毒作用体外评价,探讨人类鼻粘膜类器官病毒感染模型用于病毒研究和抗病毒药物开发的可行性。方法使用人源鼻粘膜类器官,测试其对SARS-CoV-2和HCoV-OC43假病毒的易感性。在P3实验室中,评估鼻粘膜类器官对SARS-CoV-2原始株及4种变异株的感染情况,优化感染条件。通过荧光定量PCR检测不同时间点培养基中病毒含量,并利用免疫荧光法定位新冠病毒衣壳蛋白,以确定病毒感染细胞的类型。在优化后的鼻粘膜病毒感染模型中,分析已知具有抑制新冠病毒作用的化合物,如卡莫司他和佛手柑素,单因素方差分析推断其在类器官中的抑制效果并预测其机制。结果通过培养体系和感染条件的优化,使用SARS-CoV-2不同亚型感染鼻粘膜类器官,结果显示,2~24 h受感染鼻粘膜类器官上清液中的病毒载量明显增加,鼻粘膜类器官可被SARS-CoV-2,HCoV-OC43假病毒感染(P<0.001)。真病毒感染实验证实,SARS-CoV-2原始株及4种变异株,均能稳定感染鼻粘膜类器官,证实病毒感染模型的建立。卡莫司他和佛手柑素,在鼻粘膜类器官中均剂量依赖性抗病毒作用(P<0.0001)。结论人鼻粘膜类器官能够作为新冠病毒感染模型,用于抗病毒药物筛选和评价,特别是经鼻腔给药方式的提供了理想的体外研究模型。

CD36和胞外信号调节激酶通路在脂多糖诱导炎症因子中的作用研究

本研究以鼠源巨噬细胞RAW264.7为模型,研究CD36和胞外信号调节激酶(ERK)通路对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞分泌炎症因子的影响。首先用100ng/ml LPS刺激正常及小干扰RNA(siRNA)技术沉默CD36表达的巨噬细胞16h,检测巨噬细胞的ERK活性及分泌炎症因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-10的水平;继而以20nmol/L ERK抑制剂处理细胞,再用LPS刺激,检测以上各项指标的变化,进一步明确ERK通路与LPS诱导巨噬细胞分泌炎症因子的相关性。结果显示,经LPS刺激,巨噬细胞的ERK活性显著增强,分泌的促炎因子TNF-α和IL-6显著增高,抑炎因子IL-10水平无明显变化;与CD36正常表达的巨噬细胞相比,CD36表达下降的巨噬细胞ERK活性及促炎因子TNF-α、IL-6水平显著下降,抑炎因子IL-10显著增多。与未处理组相比,ERK抑制剂预处理的巨噬细胞中LPS诱导的ERK活性显著降低,促炎因子TNF-α和IL-6水平降低,抑炎因子IL-10水平升高。结果提示,LPS能通过其受体——CD36,激活巨噬细胞内ERK活性,进而促进巨噬细胞促炎因子的分泌。