敲减CCAAT/增强子结合蛋白α通过增加O-GlcNAc糖基化水平促进肝癌细胞体外增殖

目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝癌细胞增殖中的作用及其机制。方法利用靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞系,构建C/EBPα肝癌细胞系敲减模型。采用q RT-PCR和Western blot分别检测C/EBPαm RNA和蛋白表达水平,采用CCK-8检测敲减C/EBPα后对Hep3B细胞增殖的影响,采用在正常高葡萄糖(NG,4.5 g/L)和低葡萄糖(LG,1 g/L)条件下培养细胞的增殖变化,采用Western blot法检测不同葡萄糖浓度条件下在C/EBPα敲减细胞和对照细胞乙酰葡糖胺转移酶(OGT)、乙酰葡糖胺水解酶(OGA)和整个O-Glc NAc糖基化水平。结果靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞后,C/EBPαm RNA水平下调了(7.5±2.3)倍(P<0.05),蛋白表达水平下调了(8.8±0.25)倍(P<0.001),提示C/EBPα敲减细胞系构建成功;敲减C/EBPα后明显促进肝癌细胞的体外增殖;在低葡萄糖条件下刺激48 h和72 h,敲减C/EBPα分别促进细胞增殖15.4%(P<0.05)和25.0%(P<0.01);敲减C/EBPα后细胞OGA蛋白表达水平在正常高糖和低糖刺激24 h和48 h时分别下调了70.1%(P<0.01)、51.4%(P<0.05)和61.2%(P<0.05),整体O-Glc NAc糖基化表达水平上调,在低糖刺激48 h时升高80.6%。结论敲减转录因子C/EBPα可以提高细胞整体O-Glc NAc糖基化水平,从而促进肝癌细胞的体外增殖。

粪菌移植联合聚乙二醇治疗顽固性功能性便秘的疗效观察

目的:探讨粪菌移植(FMT)联合聚乙二醇治疗顽固性功能性便秘的临床疗效及对患者生活质量及心理状态的影响。方法:选择第四军医大学西京消化病院2013年11月至2015年5月门诊顽固性功能性便秘患者35例,所有患者均行FMT治疗,同时联合聚乙二醇电解质散剂,疗程4周,采用便秘患者症状评分量表(KESS)、生存质量量表(PAC-QOL)、Zung焦虑自评量表(SAS)及抑郁自评量表(SDS)观察治疗前后及随访3个月便秘患者症状、生活质量及心理状态的改变。结果:治疗后及随访3个月时,患者的临床治愈率分别为37.1%、34.3%,改善率分别为77.1%、71.4%,KESS、PAC-QOL、SAS、SDS总评分均较治疗前明显减低(P<0.05)。治疗及随访期间均未发生严重不良反应。结论:FMT联合聚乙二醇能安全、有效的改善顽固性功能性便秘患者的相关症状,提高生活质量,改善异常心理状态,值得临床推广。

粪菌移植对顽固性功能性便秘患者临床疗效及生活质量的影响

目的评价粪菌移植(FMT)治疗顽固性功能性便秘的临床效果。方法选取2013年11月至2015年5月第四军医大学消化病院门诊就诊的顽固性功能性便秘患者,将符合纳入标准的60例患者采用数字表法随机分为治疗组和对照组,对照组给予聚乙二醇电解质散剂,治疗组在此基础上加以FMT,疗程4周。观察治疗前后患者Bristol粪便性状量表(BSFS)、便秘症状自评量表(KESS)的变化,进行疗效评价;采用便秘患者生活质量量表(PAC-QOL)评定治疗前后患者生活质量的改变。结果治疗前,治疗组和对照组患者BSFS[(1.23±0.50)vs.(1.20±0.48)分]、KESS[(27.93±4.98)vs.(25.60±5.48)分]及PAC-QOL[(111.40±15.06)vs.(110.30±19.11)分]评分差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组患者BSFS评分均明显增加、KESS及PAC-QOL评分均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05),与对照组相比,治疗组BSFS评分明显增加[(2.37±1.20)vs.(3.10±1.13)分],KESS评分明显下降[(16.97±7.37)vs.(12.43±7.48)分],PAC-QOL评分明显下降[(87.13±27.52)vs.(63.10±26.40)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组总有效率为83.3%,对照组总有效率为53.3%。两组治疗期间均未发生严重不良反应。结论 FMT联合聚乙二醇电解质散能安全、有效地改善顽固性功能性便秘患者的相关症状,提高患者的生活质量,为临床治疗顽固性功能性便秘提供了新的治疗方法,值得临床推广。

SIRT6对肝细胞脂质合成的影响及其转录基因分析

目的:在肝脏L-02 SIRT6-KO细胞系中,观察SIRT6在肝脏脂滴形成中的作用,初步研究在肝脏脂质代谢中SIRT6相关的转录差异基因发挥作用的分子机制。方法:利用基因敲除技术TALEN技术,构建肝脏L-02 SIRT6特异性敲除细胞系,并经q PCR和Western blot检测其表达水平;利用油酸刺激L-02 SIRT6-KO细胞及其对照组,体外模拟肝脏脂肪变的条件,并经高内涵和油红染色验证其脂滴形成能力;利用基因芯片检测L-02 SIRT6-KO及其对照细胞系中相关差异基因,并经生物信息学分析筛选脂代谢相关差异基因。结果:建立人肝脏SIRT6特异性敲除细胞系,q PCR显示m RNA下降50%,但Western blot证明SIRT6完全敲除;BODIPY实验及油红O染色发现,L-02 SIRT6-KO细胞比对照组其脂滴形成数量增多,高内涵荧光检测显示L-02 SIRT6-KO细胞中脂滴荧光强度比对照组增强(176.38±2.55 vs 104.26±2.08);通过对差异转录基因分析,发现了一组在脂质代谢中和SIRT6相关的关键基因如STEAP4、HMGA2、PDE1A、INSL4等。结论:成功建立人肝脏L-02 SIRT6-KO细胞系,并经实验证明SIRT6缺失能够促进脂滴形成;筛选到一组和SIRT6相关参与脂质代谢的关键基因。

SIRT1在小鼠肝纤维化中的作用及转录差异基因分析

目的:观察肝脏特异性SIRT1敲除(SIRT1-LKO)小鼠在四氯化碳(CCL4)诱导下的肝纤维化情况,系统地探讨SIRT1及转录差异基因在肝纤维化中的作用和机制。方法:利用Cre-Lox P重组酶系统构建SIRT1-LKO小鼠模型,经腹腔注射CCL4橄榄油溶液来诱导小鼠肝纤维化,通过血清生化检测肝功能,使用天狼星红染色观察肝脏胶原蛋白沉积,检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达来观察肝星状细胞(HSCs)的活化,并进一步利用基因芯片技术和生物信息学分析来筛选转录差异基因。结果:在CCL4诱导下,SIRT1-LKO小鼠比同窝野生(WT)小鼠的肝损伤更加严重,肝纤维化也更为显著(P<0.05);通过对转录差异基因进行GO生物过程和KEGG通路分析,发现了一组可能与SIRT1和肝纤维化都存在相关的关键基因(TNC、TPM1、E2F1、DEFB1、LRTM1)。结论:SIRT1缺失会增加CCL4诱导的小鼠肝损伤,加重肝纤维化;SIRT1可能与上述基因协同参与了肝纤维化的发生发展。

粪菌移植的临床研究进展

人类的肠道菌群种类超过1000种,总数多达100万亿,肠微生态失调与肠内外多种疾病密切相关。粪菌移植是将健康人的粪菌移植到患者胃肠道内,帮助纠正患者失衡的肠道菌群和重建具有正常功能的肠道微生态。目前,粪菌移植对难辨梭状芽孢杆菌感染具有良好疗效已获广泛认同;其对于与菌群失调相关的其他肠道内外疾病的治疗作用也成为研究热点,但是众多研究的结论并不一致,存在较多争议。另外,有关粪菌移植技术标准化、安全性评估以及发挥治疗作用的机制等方面尚未形成共识,仍待更多深入研究。本文就肠道菌群与肠内外疾病的联系、粪菌移植实施方案及其治疗潜力等内容结合国内外最新进展进行综述,为粪菌移植能更好服务于临床提供参考。

RNA特异腺苷脱氨酶1(p150亚型)抑制肝细胞脂质合成

目的:在油酸诱导的肝细胞脂肪变模型中,检测RNA特异腺苷脱氨酶1 p150亚型(ADAR1-p150)高表达细胞系中脂肪合成的变化。方法:利用本课题组前期摸索的油酸刺激人胚胎肝细胞L-02细胞系脂肪变的条件,q RT-PCR和Western-Blot检测油酸刺激组和对照组ADAR1-p150表达变化;将构建成功的ADAR1-p150过表达慢病毒载体GV166-ADAR1-p150及空载体病毒GV166-control感染L-02细胞,检测感染细胞中ADAR1-p150的m RNA和蛋白表达水平;通过油红O染色和BODIPY染色观察L-02 ADAR1-p150和L-02 control细胞中脂滴形成,并进一步利用高内涵系统检测其荧光强度,对脂滴合成作定量分析。结果:L-02细胞在油酸刺激后ADAR1-p150的m RNA和蛋白水平降低;成功构建ADAR1-p150过表达慢病毒载体GV166-ADAR1-p150及空载体病毒GV166-control,q RT-PCR及Western-Blot检测显示病毒转染GV166-ADAR1-p150后ADAR1-p150在细胞中的表达水平显著升高;油红O染色和BODIPY染色发现L-02 ADAR1-p150较L-02 control细胞胞质中脂滴数量减少。高内涵筛选系统检测提示L-02 ADAR1-p150组中脂滴的荧光强度明显较L-02 control组低。结论:成功构建ADAR1-p150过表达稳定转染L-02细胞系,并证实高表达ADAR1-p150能够抑制脂肪合成。