改良Trizol法提取高质量蒙古沙冬青总RNA

以木本植物蒙古沙冬青的叶片和根为材料,采用改良Trizol法提取总RNA。结果表明,与传统Trizol法相比,改良Trizol法能有效去除提取过程中残留的异硫氰酸胍、β-巯基乙醇以及植物本身的糖、酚类物质,获得高质量总RNA。改良Trizol法提取总RNA技术已被成功应用于蒙古沙冬青转录组数据库的建立。该方法可为木本植物提取高质量RNA提供借鉴。

蒙古沙冬青AmDREB2.1基因的克隆及表达分析

基于已建立的蒙古沙冬青[Ammopiptanthus mongolicus(Masxim.)Cheng f.]根的转录本数据库,分离到1个编码DREB类转录因子基因,命名为AmDREB2.1。该序列全长978 bp,包括531 bp的开放阅读框(ORF),编码176个氨基酸,具有典型的DREB转录因子保守的AP2结构域。实时荧光定量PCR分析表明,该基因能在根、叶中表达,但对干旱、低温响应不同,AmDREB2.1主要参与根的干旱胁迫应答。

蒙古沙冬青AmDREB2.2基因的克隆与植物表达载体构建

从前期建立的蒙古沙冬青[Ammopiptanthus mongolicus(Masxim)Cheng f.]根转录本数据库中克隆得到1个编码DREB类转录因子基因。结果表明,Am DREB2.2基因序列全长1 045 bp,开放阅读框(ORF)为597 bp,编码198个氨基酸,具有典型的DREB转录因子保守的AP2结构域。实时荧光定量PCR分析表明,该基因能在根、叶中表达,但对干旱、低温响应不同,Am DREB2.2主要参与根的干旱胁迫应答。在Am DREB2.2基因的编码区两端分别加入Bam HⅠ和SacⅠ酶切位点,双酶切植物表达载体p PZP212和带有酶切位点的Am DREB2.2基因PCR产物,成功获得了Am DREB2.2的植物过表达载体p PZP212-Am DREB2.2。