党参原产地及其迁地引种后AFLP与HPLC指纹图谱分析

目的:探讨自然环境对不同基原党参原植物遗传和化学成分的影响。方法:采用AFLP分子标记与HPLC指纹图谱技术分别对3个种群24个居群和10批党参药材进行遗传多样性和指纹图谱分析。结果:UPGMA方法聚类分析结果显示24个居群按照物种分类聚为3类。自甘肃文县和四川九寨沟县迁地引种的素花党参居群聚为第Ⅰ类。自湖北省板桥镇引种的川党参居群单独归为第Ⅱ类。迁地引种的党参居群与山西不同地理分布的野生及家种党参居群聚为第Ⅲ类。迁地引种的3个基原10批党参药材与对照图谱之间的相似度大于0.8,其化学成分趋于相似,有较好的一致性。结论:包括原产地及其迁地引种的不同基原党参种群间遗传差异由其物种内在的遗传特性引起,党参种内居群间遗传相似性与地理分布又呈一定相关性,而3个基原党参药材的化学成分则更易受到栽培环境因素的影响。

潞党参多糖含量测定

目的：对潞党参及其他产地党参多糖含量测定，为制订潞党参药材质量标准提供依据。方法：以无水葡萄糖为对照品，采用苯酚一硫酸法显色，利用紫外分光光度法测定潞党参及其他产地党参多糖含量。结果：葡萄糖在5．4—54．0μg／mL范围内与吸光度呈良好的线性关系（以r=0．999）；平均回收率为97．56％。潞党参多糖含量的平均值为18．39％。结论：测定方法操作简单，重复性好，结果准确可靠。可用于潞党参多糖含量测定。

党参根组织RNA提取的研究与优化

目的：建立党参根组织高质量总RNA的提取方法。方法：针对党参根组织多糖含量高的特点，比较了CTAB—LiCl，CTAB—PVP，改良Trizol法3种总RNA的提取方法。结果：CTAB—LiCl法无法提取得到总RNA，CTAB—PVP法提取的总RNA有多糖等杂质污染，改良Trizol法提取的总RNA无DNA及其它杂质污染，党参根组织的产量为120．8μg·g-1，A260／A280在1．8-2．0间，A260／A230大于2．0。结论：改良Trizol法操作简单，提取时间短，提取的RNA可以用于后续分子生物学研究。

党参多糖对番泻叶所致脾虚模型小鼠的补脾作用研究

目的:研究党参多糖对脾虚模型小鼠的补脾作用。方法:将60只雄性ICR小鼠随机分为空白组,模型组,党参多糖高、中、低剂量组[1.6、0.8、0.4 g/(kg·d)]和四君子汤组[30 g/(kg·d),以生药总量计],每组10只。除空白组外,其余各组小鼠均灌胃番泻叶溶液(0.4 g/d)构建脾虚模型。造模后,各给药组小鼠灌胃相应药液,空白组和模型组小鼠灌胃20 mL/kg生理盐水;每天给药1次,连续6周。给药结束后,测定小鼠体质量并进行一般行为学观察,记录其全血中红细胞计数,测定其血清中D-木糖、胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)、淀粉酶(AMS)、免疫球蛋白(IgG和IgM)、脂多糖(LPS)含量,并测定其结肠组织中密封蛋白(Claudin)、闭合蛋白(Occludin)mRNA及其蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠体质量显著减轻(P<0.05),出现了背毛稀疏、无光泽等脾虚症状;全血中红细胞计数和血清中D-木糖、SS、VIP、AMS、IgG、IgM含量以及结肠组织中Claudin、Occludin mRNA及其蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),血清中GAS、MTL、LPS含量均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,党参多糖高剂量组小鼠体质量显著增加(P<0.05),脾虚症状显著改善;除党参多糖低剂量组小鼠血清中D-木糖、IgM含量和结肠组织中Claudin、Occludin mRNA及其蛋白表达水平差异无统计学意义外(P>0.05),其余各组小鼠上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:党参多糖对番泻叶所致的脾虚模型小鼠具有改善作用,其作用机制可能与调节其胃肠激素分泌、增强免疫以及保护肠黏膜屏障有关。

不同基源、产地对党参总多糖中低分子量果聚糖的影响

目的分析不同基源、产地对党参总多糖中低分子量果聚糖的影响。方法通过高效凝胶渗透色谱(HPGPC)和高效液相色谱(HPLC),对潞党参、纹党参、白条党参、板桥党参总多糖及其单糖组成进行分析。结果潞党参、纹党参、白条党参、板桥党参总多糖主要分布于4.41×10^5~5.92×10^6、1.59×10^3、3.78×10^3 Da,其中潞党参中1.59×10^3、3.78×10^3 Da果聚糖峰面积没有显著差异;纹党参、白条党参中1.59×10^3、3.78×10^3 Da果聚糖峰面积有显著性差异,且1.59×10^3 Da高于3.78×10^3 Da;板桥党参中1.59×10^3、3.78×10^3 Da果聚糖峰面积有显著性差异,且3.78×10^3 Da高于1.59×10^3 Da果聚糖面积。各品种党参总多糖的主要单糖组成均为果糖和葡萄糖,以果糖含有量最高。结论潞党参、纹党参、白条党参、板桥党参总多糖主要为低分子量果聚糖,并且其分布与产地有关,而与基源无关。

党参不同组织化学成分分布及转录组学分析

目的:分析党参不同组织转录组特征,解析党参根中活性成分积累的遗传基础,为党参的高品质生产与种植提供理论依据。方法:选取盛花期党参根、茎、叶、花不同组织为实验材料,采用高效液相色谱法(HPLC)检测党参苷Ⅰ、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ含量,利用RNA-Seq对不同组织进行转录组测序,通过基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库富集分析筛选分析差异表达基因,探讨党参不同组织化学成分分布特征及转录谱特征。结果:党参根中党参多糖及党参苷Ⅰ含量显著高于其他各组织。党参根转录谱与茎、叶、花存在显著差异,差异基因表达聚类分析、GO、KEGG富集分析发现差异基因主要富集在黄酮类、苯丙烷类生物合成、蔗糖淀粉代谢、植物激素信号传导、植物病原菌互作、MAPK级联信号传递、三磷酸腺苷结合转运盒(ABC)转运蛋白等途径。苯丙烷类化合物生物合成相关基因在根、花中表达量显著上调,ABC转运蛋白则多在花中高表达,党参多糖合成关键酶基因蔗糖:蔗糖1-果糖基转移酶(1-SST)、果聚糖1-外切水解酶(1-Feh)及大量与次生代谢产物积累密切相关的胁迫响应基因等在党参根中显著上调表达。结论:党参根中活性成分含量与转录谱特征与茎、叶、花等组织存在显著差异,表现出组织特异性,同时胁迫响应相关基因及活性成分菊粉型果聚糖、苯丙烷类化合物合成相关基因在根中表达上调。

党参转录组中SSR位点信息分析

目的采用生物信息学方法分析党参转录组文库EST序列简单重复序列(SSR)位点,快速、大规模鉴定党参功能性SSR。方法使用MicroSAtellite(MISA)软件分析党参高通量转录组SSR的分布频率和重复基元的类型特征,利用软件Primer3设计引物,并通过SSRFinder校验SSR,筛选SSR引物。结果从45 511条Unigenes中共搜到7 327个SSR位点,分布在6 017条Unigenes序列中,发生频率为12.22%,共有415种重复基元,平均每4 520 bp含1个SSR位点,二核苷酸重复占主要地位,发生频率为58.67%,在所有重复基元中,AG/CT出现频率最高。共获得4 329条SSR引物。结论大规模的SSR分子标记开发将有助于党参遗传多样性与分子育种研究。

基于SSR标记的党参属部分药用植物的遗传多样性和遗传结构评价

目的:采用简单重复序列(SSR)标记技术对来自中国6个省市的党参属4种药用植物进行分析,为党参核心种质资源构建和分子标记辅助育种积累资料。方法:利用10对SSR分子标记引物对党参的遗传多样性和分化程度进行分析,并对党参属的3种药用植物(党参、素花党参、川党参)居群进行聚类分析和遗传结构评价。结果:党参10对SSR引物各位点平均等位基因数(Na)和多态性位点百分率(PPL)分别为4. 1和100%;观察杂合度(Ho),期望杂合度(He),平均杂合度(Ha),Shannon’s信息指数(I)的平均值分别为0. 431 9,0. 486 2,0. 410 3,0. 853 7。党参居群水平上的Na,I,He和Ho分别为1. 9~3. 2,0. 44~0. 90,0. 28~0. 57和0. 27~0. 61;其中甘肃陇西德兴家种居群遗传多样性最丰富。遗传相似度的聚类分析将供试党参、素花党参、川党参和秦岭党参共38个居群划分为3类,秦岭党参居群单独为一类(类群Ⅰ),川党参居群和素花党参居群为第二类(类群Ⅱ),党参居群为第三类(类群Ⅲ)。党参、素花党参、川党参的遗传结构分析分为2个基因池,过渡类型少。结论:党参具有丰富的遗传多样性,这一特性与其迁地引种的历史以及自身生物学特性相关;党参居群间存在较高程度的遗传分化,这可能源于自然地理隔离以及近期人类活动引起的生态环境片段化。本文为党参遗传多样性、遗传结构和资源保护等方面的研究提供了理论依据。