基于CiteSpace的结直肠癌肿瘤微环境近十年研究热点分析

目的阐述结直肠癌(CRC)肿瘤微环境研究的热点和趋势,分析研究发展构架,为该领域的进一步研究与应用提供参考。方法检索Web of Science核心合集数据库中2012-01-01至2022-01-07的文献。英文检索词为“(colorectal cancer)AND(microenvironment)”。应用CiteSpace(5.8.R3)软件对纳入文献的发文量、国家、作者、机构、被引文献、关键词及关键词聚类和关键词突变进行可视化分析,并绘制相应图谱。结果最终纳入目标文献3827篇。发文量较多的教授是美国哈佛医学院SHUJI OGINO教授、法国JEROME GALON教授、美国纽约ANDREW T CHAN教授。发文量前3位的国家是中国、美国和意大利。结合被引文献、关键词聚类和关键词突变分析得出研究侧重点:血管生成、微卫星不稳定、转移、免疫治疗、肿瘤相关成纤维细胞。热点主要是:PD-l阻断剂、共识分子亚型、错配修复缺失、免疫检查点抑制剂。结论建议研究者深化对CRC肿瘤微环境的认识,加强国际间交流合作,持续开拓创新。

miR-139-5p调控KRAS突变结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的功能与机制研究

目的建立结直肠癌KRAS突变细胞DKO-1的miR-139-5p功能获得模型,探讨miR-139-5p对KRAS突变结直肠癌细胞恶性表型的影响及可能的分子机制。方法利用real-time PCR检测miR-139-5p在KRAS突变同源细胞系中表达;通过瞬时转染建立miR-139-5p功能获得细胞模型;通过绘制MTT生长曲线和集落形成实验检测miR-139-5p对DKO-1细胞生长增殖的影响;通过细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-139-5p对DKO-1细胞生长迁移侵袭的影响;通过生物信息学分析miR-139-5p的下游靶基因,利用双荧光酶报告基因实验验证miR-139-5p与靶基因的直接结合情况。结果 miR-139-5p在KRAS突变结直肠癌细胞中表达降低(P<0.01);过表达miR-139-5p能够抑制DKO-1细胞的生长能力(P<0.01)、集落形成能力(P<0.01)、迁移和侵袭能力(P<0.01);miR-139-5p能够直接结合FOS基因的3'-UTR区(P<0.01)。结论 miR-139-5p能够抑制DKO-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制FOS基因表达有关。

TAB1增加胃癌细胞对5-FU的耐药性

目的 探讨TGF-β活化激酶1结合蛋白1(TAB1)在胃癌耐药中的作用及其表达与患者预后的关系。方法 通过实时定量PCR和Western blot检测TAB1在胃癌细胞的表达。通过免疫组化和KM-plotter数据库分析TAB1表达与患者预后的关系。用小干扰RNA沉默TAB1在胃癌耐药细胞中的表达得到下调TAB1的细胞,阴性对照细胞转入NC小干扰RNA。用5-氟尿嘧啶(5-FU)处理胃癌细胞检测细胞的增殖和凋亡率。结果 TAB1在胃癌耐药细胞系中高表达,且TAB1的表达水平与患者预后呈负相关。5-FU处理后,沉默TAB1的细胞凋亡率显著高于阴性对照组,细胞增殖水平显著低于阴性对照组,细胞对5-FU的IC_(50)值显著下降(均P<0.05)。结论 TAB1能够增加胃癌细胞对5-FU的耐药性,可能成为逆转胃癌耐药的潜在干预靶点。

Linc00704对结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨Linc00704(long non-coding RNA 00704)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法RT-qPCR检测配对结直肠癌及癌旁正常组织、结直肠癌细胞和正常永生化人结肠上皮细胞系FHC中Linc00704mRNA的表达。反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)转染结直肠癌细胞构建Linc00704低表达细胞模型,慢病毒感染结直肠癌细胞构建Linc00704过表达细胞模型,RT-qPCR检测转染效率;CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。结果相比癌旁组织,Linc00704在结直肠癌组织中表达降低(t=4.103,P<0.001)。8种结直肠癌细胞系中有6种细胞系(RKO、HCT15、NCI-H716、SW480、SW1463、SW48)Linc00704的表达较FHC细胞低(F=44.750,P<0.001)。沉默Linc00704表达可促进Caco-2、DLD-1细胞迁移和侵袭能力(均P<0.01),但对增殖无明显影响(均P>0.05)。过表达Linc00704可抑制RKO、HCT15细胞迁移和侵袭能力(均P<0.001),但对增殖无明显影响(均P>0.05)。结论Linc00704在结直肠癌组织中呈低表达,过表达Linc00704可抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。

结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶的表达和纯化以及小鼠多抗血清的制备

目的表达和纯化结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶,并制备多克隆抗体,为研究c-di-AMP在MTB生理过程中的作用奠定基础。方法从MTB基因组中PCR扩增c-di-AMP合成酶Rv3586基因,构建原核表达载体,序列鉴定后,IPTG诱导目的基因表达,采用Western-blot鉴定目的蛋白,并用离子亲和层析法纯化重组蛋白;用纯化蛋白经背部皮下免疫小鼠,收集小鼠血清,用免疫学方法测定抗体滴度及其特异性。结果 PCR成功扩增Rv3586基因,限制性酶切分析和序列测定结果表明成功构建原核表达载体;表达的重组c-di-AMP合成酶蛋白分子质量大小约43ku,该蛋白可被抗His标签抗体和感染小鼠血清识别。用纯化蛋白免疫小鼠,初次免疫后抗体滴度可达1︰12 800,且该多克隆抗体可识别结核分枝杆菌和卡介苗c-di-AMP合成酶。结论在E.coli中成功表达c-di-AMP合成酶,并制备了多克隆抗体,可用于结核分枝杆菌c-di-AMP生物学功能的进一步研究。

FOXJ2转录激活胃癌细胞PD-L1表达并抑制T细胞抗肿瘤免疫的研究

[目的]研究免疫检查点PD-L1在胃癌细胞中的转录调控机制;探讨转录因子FOXJ2对PD-L1的转录调控,两者表达的相关性及其与胃癌患者预后的关系;揭示FOXJ2在调控T细胞抗肿瘤免疫中发挥的生物学功能。[方法]利用生物信息学方法筛选能够调控PD-L1的转录因子;免疫组化及免疫荧光检测FOXJ2和PD-L1在胃癌临床标本中的表达以及FOXJ2与CD8;T细胞浸润的关系;qRT-PCR与Western blot检测FOXJ2和PD-L1在胃癌细胞中的表达;ChIP实验验证FOXJ2与PD-L1基因启动子的直接相互作用;胃癌细胞与T细胞共培养实验检测T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力;流式细胞术检测肿瘤细胞中PD-L1表达情况及T细胞中TNF-α和IFN-γ的表达情况。[结果]JASPAR和PROMO数据库筛选出24个可能调控PD-L1的候选转录因子;癌症公共数据库显示FOXJ2与PD-L1的表达呈正相关(P<0.05),高表达FOXJ2的胃癌患者生存期明显缩短(P<0.01)。FOXJ2在胃癌组织中的表达较癌旁组织显著上调,且与PD-L1的表达呈正相关关系(R=0.629,P<0.01)。qRT-PCR与Western blot证实胃癌细胞中敲低FOXJ2表达后PD-L1表达下降。ChIP实验证实FOXJ2与PD-L1基因启动子区域的直接相互作用。下调胃癌细胞中FOXJ2表达后,T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力增强;流式细胞术显示肿瘤细胞中的PD-L1下降,而T细胞中TNF-α和IFN-γ的表达升高。[结论]FOXJ2与PD-L1表达和胃癌患者的生存密切相关,阻断FOXJ2对PD-L1的转录调控有望成为胃癌免疫治疗的新靶点。