血小板膜仿生纳米靶向探针的制备及体外寻靶实验研究

目的制备血小板膜仿生纳米靶向探针(PLT-RAP@NPs),探讨其在体外的免疫逃逸、靶向和黏附能力,以及联合超声靶向微泡释放技术(UTMD)后的载药释放情况。方法采用单乳化-溶剂挥发法合成纳米探针RAP@NPs,梯度离心-反复冻融法提取血小板膜囊泡,超声震荡法制备PLT-RAP@NPs,检测其粒径、表面电位及稳定性,观察其微观形态,计算其包封率和载药率,确定雷帕霉素(RAP)负载的最佳方案。DiI荧光染料分别标记聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA,DiI@PLGA组)和PLT@PLGA(PLT-DiI@PLGA组),用于模拟RAP@NPs、PLT-RAP@NPs进行体外寻靶实验的荧光强度检测;将其分别与巨噬细胞、泡沫细胞和内皮细胞共孵育2 h,观察DiI@PLGA组与PLT-DiI@PLGA组橙红色荧光强度,分析各细胞对DiI@PLGA和PLT-DiI@PLGA的吞噬、摄取和黏附能力。细胞增殖-毒性实验观察不同浓度RAP(3.00μg/ml、6.25μg/ml、12.50μg/ml、25.00μg/ml、50.00μg/ml、100.00μg/ml)的游离RAP、RAP@NPs和PLT-RAP@NPs对细胞增殖活性的影响。体外药物控释实验观察PLT-RAP@NPs联合UTMD后载药释放效果。结果本实验制备的PLT-RAP@NPs呈球形,大小均匀,表面覆盖薄膜,“核-壳”结构清晰,平均粒径(286.83±5.25)nm,平均表面电位-(15.60±5.04)mV。当100 mg PLGA负载3 mg RAP时,包封率为60.35%,载药率为2.18%。体外寻靶实验结果显示,巨噬细胞与纳米靶向探针共孵育2 h后,DiI@PLGA组橙红色荧光强度约为PLT-DiI@PLGA组3倍;泡沫细胞与靶向纳米探针共孵育2 h后,PLT-DiI@PLGA组橙红色荧光强度约为DiI@PLGA组4倍;内皮细胞与纳米靶向探针共孵育2 h后,PLT-DiI@PLGA组橙红色荧光强度较DiI@PLGA组增强。细胞增殖-毒性实验结果显示,随着RAP浓度增高,游离RAP中细胞增殖活性下降,而RAP@NPs和PLT-RAP@NPs中细胞增殖活性变化较小。体外药物控释实验结果显示,RAP@NPs和PLT-RAP@NPs中RAP均缓慢释放,72 h积累药物释放量分别为42.12%和33.74%,联合UTMD后积累药物释放量分别提升至75.57%和67.54%。结论成功制备PLT-RAP@NPs,其可抑制巨噬细胞吞噬、增强泡沫细胞摄取和提高内皮细胞黏附,从而实现免疫逃逸及靶向能力,联合UTMD可进行RAP靶向控释。

低强度脉冲超声增效脂肪间充质干细胞源性外泌体修复糖尿病小鼠皮肤创面的实验研究

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对脂肪间充质干细胞源性外泌体(ADSCs-Exos)修复糖尿病小鼠皮肤创面的增效作用。方法将ADSCs-Exos与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养,评估LIPUS对HUVECs摄取ADSCs-Exos的影响。选取SPF级C57BL/6雄性小鼠36只,构建糖尿病小鼠皮肤创面模型,将其随机分为对照组、Exos治疗组及LIPUS+Exos治疗组,每组各12只,应用活体成像观察ADSCs-Exos的分布及作用时间,冰冻切片观察糖尿病小鼠皮肤组织摄取ADSCs-Exos情况;比较各组小鼠治疗后3 d、7 d、10 d、14 d创面闭合率,以及14 d组织学检测情况。结果LIPUS可显著增加HUVECs对ADSCs-Exos的摄取,辐照后ADSCs-Exos的荧光强度(2.98×105)较未辐照者(0.31×105)显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。活体成像观察显示,LIPUS辐照能有效改善皮下注射后ADSCs-Exos的分布,促进其聚集于创面及周围组织,延长外泌体的作用时间;LIPUS+Exos治疗组治疗后1 h、6 h、36 h创面区域ADSCs-Exos的荧光强度分别为24.14×10^(9)、146.93×10^(9)、26.59×10^(9),均高于Exos治疗组(15.23×10^(9)、52.38×10^(9)、10.72×10^(9)),差异均有统计学意义(均P<0.05)。冰冻切片显示,LIPUS+Exos治疗组ADSCs-Exos阳性细胞率为(41.20±1.10)%,高于Exos治疗组[(23.16±1.16)%],差异有统计学意义(P<0.01)。LIPUS+Exos治疗组小鼠治疗后3 d、7 d、10 d、14 d创面闭合率均高于其余两组,差异均有统计学意义(均P<0.05);以LIPUS+Exos治疗组14 d创面闭合率最高,达(98.52±1.14)%。组织学检测显示,与对照组和Exos治疗组比较,LIPUS+Exos治疗组小鼠皮肤新生血管面积最大[(35.12±1.93)mm2],瘢痕长度最短[(1.20±0.20)mm],胶原容积分数最高[(62.35±1.72)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论LIPUS能有效促进细胞对ADSCs-Exos的摄取,增强血管新生,加速糖尿病小鼠皮肤创面的修复。

靶向声敏纳泡的制备及其声动力效应观察

目的制备以动脉粥样硬化斑块A类清道夫受体(SR-A)为靶点的载二氢卟吩e6(Ce6)超声纳泡(NB),探讨其提高声敏剂的靶向性及声动力效应的能力。方法以薄膜水化法制备载Ce6和SR-A靶向多肽PP1的纳泡(Ce6-PP1NB),检测其理化性质和细胞毒性。将小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)分别与Ce6、Ce6-PP1 NB共同孵育,采用激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内Ce6荧光强度以评估Ce6-PP1 NB的靶向性。将细胞按照不同处理方法分为:空白对照组(加入磷酸盐缓冲液)、低强度脉冲超声(LIPUS)组(加入磷酸盐缓冲液后予以超声辐照)、Ce6+LIPUS组(加入30μg/ml Ce6后予以超声辐照)和Ce6-PP1 NB+LIPUS组(加入30μg/ml Ce6-PP1 NB后予以超声辐照),超声辐照参数为:0.4 W/cm2、2 MHz,辐照时间1 min。采用活性氧荧光探针法检测细胞内活性氧生成情况,流式细胞术检测M1型、M2型巨噬细胞的比例,酶联免疫吸附测定法检测细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-10(IL-10)浓度,评估Ce6-PP1 NB的声敏性和声动力效应。结果制备的Ce6-PP1 NB呈圆形,形态规则,分散均匀,平均粒径为(504.25±149.13)nm,平均Zeta电位为-(8.67±0.78)mV,Ce6包封率为(85.63±4.39)%,PP1连接率为(92.78±4.57)%。0、5、10、20、30μg/ml的Ce6-PP1 NB与RAW264.7细胞共孵育12 h后,细胞存活率均>90%;当Ce6-PP1 NB浓度达40μg/ml时,细胞存活率明显下降(P<0.01)。体外寻靶实验结果显示,与Ce6-PP1 NB共同孵育细胞内Ce6红色荧光强度明显高于与Ce6共同孵育细胞。Ce6-PP1 NB+LIPUS组细胞内出现明显绿色荧光,M1型巨噬细胞的比例减少,M2型巨噬细胞的比例增加,TNF-α、IL-6浓度均减小,IL-10浓度增大,与其余各组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Ce6-PP1 NB可提高声敏剂在动脉粥样硬化斑块的聚集和声动力效应。

miR-155调控NLRP3炎症小体的活性及其在心肌梗死诱导心功能恶化中的作用

目的探讨miR-155与NLRP3炎症小体在心肌梗死(myocardial infarction,MI)小鼠中的关系。方法C57BL/6小鼠体重20~25 g,通过结扎冠状动脉前降支建立小鼠MI模型,并按照随机数表法分为假手术(Sham)组、MI组、MI+con-antigomir组和MI+miR-155 antagomir组。应用qRT-PCR法检测小鼠心肌miR-155表达;Western blot法检测小鼠心肌中NLRP3和SOCS1蛋白的表达;彩色超声心动图检测小鼠心功能。结果与Sham组相比,MI组小鼠miR-155表达水平明显升高(P<0.01);与MI组相比,MI+miR-155 antagomir组miR-155表达水平降低(P<0.05)。Western blot结果提示:MI组小鼠NLRP3表达水平显著高于Sham组(P<0.01),抑制miR-155可明显逆转MI诱导的NLRP3炎症小体激活(P<0.05)。MI组小鼠左心室收缩末期内径和左心室舒张末期内径均显著高于Sham组(P<0.01),而左心室短轴缩短分数和左心室射血分数均显著低于Sham组(P<0.01);抑制miR-155可明显逆转上述效应(P<0.05)。结论miR-155通过激活NLRP3炎症小体,恶化患者MI后的心功能。

经胸超声心动图对心脏瓣膜术后患者合并急性肾损伤的影响因素分析

目的:探讨术前经胸超声心动图(TTE)在心脏瓣膜术后患者合并急性肾损伤中的影响因素。方法:回顾性分析2020年1月-2021年12月在武汉大学人民医院行心脏瓣膜术(CVS)的213例患者临床资料,所有患者均于术前7天内进行超声心动图检查并记录其参数。将所有患者分为非急性肾损伤(非AKI)组和AKI组,采用多因素Logistic回归分析影响CVS患者合并AKI的独立危险因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC),评估各危险因素对CVS患者合并AKI的预测价值。结果:213例CVS患者中66例(30.99%)术后发生AKI,多因素Logistic回归分析结果显示年龄增大、体外循环时间延长、糖尿病、左室后壁厚度(LVPW)升高、肺动脉收缩压(PASP)升高是CVS患者合并AKI的独立危险因素,肾小球滤过率(eGFR)升高及左室射血分数(LVEF)升高是CVS患者合并AKI的独立保护因素。ROC曲线显示,LVPW、PASP和LVEF对CVS患者术后AKI发病具有一定的预测价值,其AUC分别为:0.689(95%CI:0.579,0.789),0.692(95%CI:0.595,0.800)和0.712(95%CI:0.615,0.822),三者联合预测AKI的AUC为0.758(95%CI:0.689,0.828)。结论:年龄增大、体外循环时间延长、糖尿病、LVPW和PASP升高是CVS患者合并AKI的独立危险因素,而eGFR和LVEF升高则是独立保护因素。TTE作为一种简便易行的检测手段,可用于CVS患者术后合并AKI的诊断和评估。

人工智能在二尖瓣反流超声精准诊疗中的应用进展

二尖瓣反流(MR)是临床常见的瓣膜疾病之一,其发病率不断上升。超声心动图是评估MR的首选影像学检查方法,具有无创、无辐射、操作便捷、价格低廉等优势。近年来,人工智能(AI)广泛应用于药物研发、临床诊断、临床决策、临床治疗及健康管理等方面。AI辅助MR精准诊疗可为患者提供个性化诊疗服务。本文就AI在MR诊断、治疗及预后随访中的应用进展进行综述。

慢性心力衰竭患者左心房功能和不同步性的初步研究

目的运用实时三维超声心动图（RT-3DE）技术定量评价慢性心力衰竭患者左心房容积和功能,并对其不同步性作初步研究。方法选择30例健康受试者和32例慢性心力衰竭患者,分为对照组和心力衰竭组。心力衰竭组：男性18例,女性14例;年龄42~65岁,平均年龄58岁。对照组：男性17例,女性13例;年龄45~60岁,平均年龄54岁。用RT-3DE进行左心房时间-容积曲线分析,获取容积指标：最大容积（LAVmax）、最小容积（LAVmin）、主动收缩前容积（LAVp）,计算左心房总射血分数（LATEF）、被动射血分数（LAPEF）及主动射血分数（LAAEF）。同时获得左心房不同步性参数：达最小容积时间标准差Tmsv-16-SD、Tmsv-12-SD、Tmsv-6-SD和最大时间差Tmsv-16-Dif、Tmsv-12-Dif、Tmsv-6-Dif。容积指标用体表面积进行标化,时间参数用R-R间期校正。并分析校正后的不同步性指标Tmsv-16-SD%、Tmsv-16-Dif%与容积指数LAVmaxI等的相关性。结果①各容积指标校正前后,心力衰竭患者左心房容积均增大,左心房射血分数LATEF、LAPEF和LAAEF均减小,差异有显著统计学意义（P〈0.01）。②不同步性指标Tmsv-16-SD%、Tmsv-16-Dif%等在心力衰竭组增大,差异均有显著统计学意义（P〈0.01）。③Tmsv-16-SD%、Tmsv-16-Dif%与各容积指数呈正相关关系,与各射血分数呈负相关关系,其中与LAVmaxI相关性最强,r分别为0.73、0.75（均为P〈0.01）。结论慢性心力衰竭患者左心房功能减低,存在着不同步性。RT-3DE可以较好地评价左心房功能和不同步性。

二维斑点追踪成像评价正常成人左房肌主动收缩运动特性

目的通过二维斑点追踪成像(STI)技术评价正常成人左房肌主动收缩运动特性。方法选择28例健康受检者,STI测量左房主动收缩时前壁、下壁、侧壁、房间隔各节段(下段、中段、上段)的峰值速度(Vmax)、纵向应变峰值(LS)、纵向应变达峰时间(TLS)、径向应变峰值(RS)、径向应变达峰时间(TRS)。结果①左房收缩时,各房壁间相同节段的Vmax、LS、RS和TLS差异均无统计学意义(P>0.05),各房壁间相同节段TRS比较,下段和上段差异无统计学意义(P>0.05),中段比较差异有统计学意义(P<0.05)。②各房壁自身各节段间Vmax、LS和RS从下段到上段递减,除前壁和房间隔的RS外,差异有统计学意义(P<0.05)。③各房壁自身各节段间比较,除侧壁TRS外,运动达峰时间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 STI技术可以较准确地评价正常成人左房肌主动收缩运动特性,左房肌的收缩峰值速度、应变和达峰时间具有一定的规律性。

超声靶向微泡破坏介导心肌梗死后左心室结构重构和神经重构的实验研究

目的探讨超声靶向微泡破坏(UTMD)介导血管生成素1(Ang1)基因转染促进血管生成,逆转心肌梗死(MI)犬左心室结构及交感神经重构的效果。方法 30只清洁级雄性成年杂种犬,体质量15.0~21.0 kg,平均体质量17.1 kg。随机分为3组,每组各10只,即对照组(健康犬)、MI组(MI造模后未进行UTMD治疗的犬)和UTMD组(MI造模后进行UTMD治疗的犬)。1个月后用超声心动图测定左心室结构及收缩功能,二维超声斑点追踪成像(2D-STI)评价左心室局部和整体收缩同步性。免疫组织化学技术检测新生毛细血管密度、心室肌酪氨酸羟化酶(TH)和生长相关蛋白43(GAP43)阳性神经分布和密度。Western blot检测Ang1、TH和GAP43蛋白表达水平。结果与MI组相比,UTMD组左心室收缩末期内径减小,左心室射血分数、短轴缩短率增加,左心室局部应变增强,整体同步化程度增加。UTMD组新生毛细血管密度高于MI组,而TH和GAP43在MI组中升高,在UTMD组中降低。Western blot显示,与对照组和MI组相比,UTMD组Ang1蛋白升高[(50.5±13.8)%vs(12.6±4.7)%,t=8.2,P <0.05;(50.5±13.8)%vs (15.5±4.6)%,t=6.4,P <0.05],但TH和GAP43较MI组低[(22.5±6.7)%vs(41.3±9.5)%,t=4.5,P <0.05;(18.5±3.2)%vs(32.6±8.8)%,t=4.2,P <0.05]。结论 UTMD介导Ang1转染不仅可以促进MI后血管生成,而且可以逆转左心室结构重构和交感神经重构,有效改善左心室同步性。

对比三维斑点追踪技术和二维斑点追踪技术评价正常人左心室心肌应变

目的应用二维斑点追踪成像(2D-STE)与三维斑点追踪成像(3D-STE)技术评估正常人左心室心肌应变。方法对34名正常人进行左心室心肌二维、三维图像采集,通过二维图像获取左心室心肌收缩末期17节段纵向应变(LS)、18节段环向应变(CS)及径向应变均(RS),通过三维图像获得面积应变(AS)、LS、RS及CS。结果 3D-STE与2DSTE的LS和CS均自基底段至心尖段逐渐增大,RS均逐渐减。与2D-STE相比,3D-STE测得的LS较小,CS较大(P均<0.05)。3D-STE所测的AS与LVEF相关性最强(r=-0.720,P<0.05)。3D-STE获取图像及脱机分析时间明显少于2D-STE(P均<0.05)。结论 3D-STE是更全面、省时、高效的应变测量方法。作为3D-STE的新型应变参数,AS能更全面地反映左心室收缩功能。

心肌分层应变评价冠心病患者不同程度狭窄冠状动脉供血节段心肌收缩功能

目的采用二维斑点追踪成像(2D-STI)分层应变技术评价冠心病患者左心室局部收缩功能。方法临床疑诊冠心病患者50例,根据SCA结果,将患者分为冠心病组(重度狭窄亚组和轻度狭窄亚组)和对照组。获取各组节段心内膜下、中层、心外膜下心肌纵向应变(LSendo、LSmid、LSepi)及心肌圆周应变(CSendo、CSmid、CSepi),计算各节段心肌纵向应变跨壁梯度△LS和各节段心肌圆周应变跨壁梯度△CS,并进行统计学分析。结果无论有无冠状动脉狭窄,其相应供血左心室心肌节段LSendo、LSmid、LSepi和CSendo、CSmid、CSepi均呈梯度递减,3组间△LS差异无统计学意义,重度狭窄亚组及轻度狭窄亚组△CS较对照组显著减小(P<0.05);与对照组比较,重度狭窄亚组LSendo、LSmid、LSepi及轻度狭窄亚组LSmid、LSepi均显著减低(P<0.05),但轻度狭窄亚组与重度狭窄亚组间各纵向分层应变参数差异无统计学意义(P均>0.05);与对照组比较,重度狭窄亚组CSendo、CSmid、CSepi均显著降低(P均<0.05),轻度狭窄组CSendo显著降低(P<0.05);重度狭窄亚组与轻度狭窄亚组间各圆周分层应变差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 2D-STI心肌分层应变技术可准确评价冠心病患者左心室各层心肌纵向及圆周应变,冠心病患者重度狭窄冠状动脉供血节段心肌全层收缩功能均不同程度受损,其中以心内膜下心肌受损最为严重。

超声心动图多参数联合临床诊断冠状动脉粥样硬化性心脏病

目的探讨临床资料与超声心动图多参数联合诊断冠状动脉粥样硬化性心脏病的价值。方法收集105例以胸痛为首发症状的患者,最终纳入75例,根据CAG结果分为狭窄组(n=33)与对照组(n=42)。评估两组患者的临床资料,应用超声心动图测量二尖瓣口血流频谱E、A值、E峰减速时间(E-DT)、等容舒张时间(IVRT),DTI测量二尖瓣环舒张期运动速度e、a峰值;应用4D-Auto LVQ功能测量左心室射血分数(LVEF)及舒张末期球形指数(SpI);以二维斑点自动功能成像(AFI)测量左心室整体纵向应变平均值(GLPSS)。结果狭窄组与对照组间E/e、E-DT、GLPSS及二型糖尿病(2DM)患病率差异有统计学意义(P均<0.05),其预测冠状动脉狭窄的ROC曲线下面积依次为E/e(0.715)>E-DT(0.667)>GLPSS(0.649)>2DM(0.609),二元Logistic回归方程P=1/[1+e-(-5.505+0.431×E/e+0.021×E-DT+0.127×GLPSS+2.141×2DM)]。P值的ROC曲线下面积为0.824。以P≥0.4509为截值预测冠状动脉狭窄>50%的敏感度和特异度最高,分别为78.8%和69.0%。结论联合应用临床及超声心动图多个参数能够显著提高诊断冠心病的效能。

NFκB核定位基序增强超声微泡介导的外源基因转染效率

目的评价NFκB核定位基序增强超声靶向微泡破坏(UTMD)介导的外源基因转染效率的价值。方法构建人基质细胞衍生因子1α(phSDF-1α)质粒(phSDF-1α组),并插入NFκB核定位基序,构建具有核输入功能的目的基因质粒phSDF-1α-NFκB(phSDF-1α-NFκB)。用Cy3核酸染料标记两种质粒后在优化的UTMD条件下分别转染人脐静脉血管内皮细胞。CCK-8检测细胞存活率,流式细胞仪和荧光显微镜分别检测质粒的入胞效率和入核效率,RT-PCR和ELISA检测SDF-1α基因和蛋白表达水平。比较两种质粒的入核效率和目的基因表达率。结果在优化的UTMD条件下phSDF-1α组和phSDF-1α-NFκB组细胞存活率和质粒入胞效率差异均无统计学意义(P均>0.05),两组质粒入核率分别为(12.96±4.46)%和(83.25±12.15)%,SDF-1α基因相对表达量分别为(39.25±10.14)%和(118.25±27.57)%,SDF-1α蛋白表达量分别为(14.11±5.74)ng/mg和(65.35±11.12)ng/mg蛋白,后者均显著高于前者。结论 NFκB核定位基序能显著增强质粒入核,提高UTMD介导的外源基因转染效率。

超声评价慢性充血性心力衰竭患者心脏再同步化治疗术后舒张功能及其与同步性的关系

目的应用常规超声及组织多普勒成像(TDI)技术评价慢性充血性心力衰竭(CHF)患者经心脏再同步化治疗(CRT)后左室同步性及舒张功能变化,以及二者间的关系。方法 CHF组患者44例,均于CRT术前1～3d、术后6个月接受超声检查。常规超声测量参数:左室舒张末内径(LVEDd)、LVESV、左室舒张末容积(LVEDV)、左室射血分数(LVEF)、二尖瓣口舒张早、晚期血流速度比值(E/A);TDI测量参数:二尖瓣口舒张早期血流速度与二尖瓣环舒张早期运动速度比值(E/e)、左室12节段收缩期达峰时间标准差(Ts-SD)、左室12节段收缩期达峰时间最大差值(Ts-dif);计算CRT术前后二尖瓣环平均E/e变化率(ΔE/e%)和Ts-SD变化率(ΔTs-SD%)。结果最终纳入研究41例,根据CRT术后6个月左室收缩末容积(LVESV)降低≥10%的标准将其分为CRT有反应组24例和CRT无反应组17例。与CRT术后比较,CRT有反应组患者CRT术后6个月LVEDd、LVEDV、LVESV显著减小,LVEF、E/A显著增加,E/e显著降低,Ts-SD、Ts-dif显著缩短;而CRT无反应组患者上述参数差异均无统计学意义。CRT有反应组患者CRT术前后ΔE/e%与ΔTs-SD%呈正相关(r=0.68,P<0.05)。结论 CRT术后有反应患者的左室同步性及舒张功能均得到改善,其左室舒张功能改善的机制可能与同步性改善后降低的左室充盈压有关。

二维斑点追踪成像联合实时三维超声心动图评价尿毒症患者左房功能的研究

目的应用二维斑点追踪成像(2D-STI)和实时三维超声心动图(RT-3DE)两种技术分别从心肌应变和容积变化的角度定量评估尿毒症患者左房功能。方法选取69例尿毒症患者,根据左房最大容积指数(LAVI)分为LAVI增高者(ELA组34例,LAVI>34 ml/m2)和LAVI正常者(NLA组35例,LAVI≤34 ml/m2),另选22例正常成人为对照组,应用RT-3DE时间-容积曲线获取各组左房容积指标:最大容积(LAVmax)、最小容积(LAVmin)、收缩前容积(LAVp),计算左房总射血分数(LAEF)、被动射血分数(LAPEF)、主动射血分数(LAAEF);应用2D-STI对各组行心肌应变和应变率曲线分析,获取左房壁舒张早期应变(Se)、舒张晚期应变(Sa)、总应变(Sg)和舒张早期应变率(SRe)、舒张晚期应变率(SRa)、收缩期应变率(SRs),比较3组上述各指标变化情况。采用Pearson线性相关分析左房应变和应变率绝对值与LAPEF、LAEF间的相关性;应用Bland-Altman法分析观察者内和观察者间测量结果的一致性。结果 (1)左房壁平均Sg、SRs、SRa在NLA组与对照组间差异无统计学意义,上述两组均高于ELA组(均P<0.05);NLA组和ELA组左房壁平均Se和SRe均较对照组显著减低;NLA组Sa高于对照组,ELA组Sa低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);(2)NLA组LAEF和LAAEF均高于对照组,ELA组低于对照组(均P<0.05);LAPEF在对照组、NLA组和ELA组间依次减低(均P<0.05);(3)LAPEF与SRe呈正相关(r=0.529,P=0.000);LAEF与Sa和SRa均呈正相关(r=0.501、0.498,均P=0.000);(4)Bland-Altman重复性检验显示,左房应变参数在观察者内和观察者间的测量均有良好的一致性,变异系数分别为(6.19±5.04)%和(5.32±4.87)%。结论 2D-STI联合RT-3DE技术可简便、快捷、准确地评价尿毒症患者左房功能,可为临床早期诊疗提供可靠依据。

血管内皮靶向微泡对兔心肌缺血再灌注损伤的超声分子显像

目的:构建针对血管内皮细胞损伤的靶向微泡,实现对兔心肌缺血再灌注损伤的靶向显像。方法:构建血管内皮细胞间黏附分子-1(ICAM-1)靶向阳离子微泡(TCMB)和非靶向普通阳离子微泡(CMB),肿瘤坏死因子α(TNF-α)活化培养至70%融合的原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)/脐静脉,CMB和TCMB分别以2.0dynes/cm^2的剪切应力通过平行板流动腔连接的细胞培养皿/脐静脉,比较CMB和TCMB对HUVEC/脐静脉的靶向粘附能力。20只新西兰大耳兔随机分为CMB组和TCMB组,每组各10只,参照相关文献方法制备心肌缺血再灌注损伤模型,耳缘静脉注射1ml浓度均为2×10~8个/ml的CMB(CMB组)和FITC二抗标记的TCMB(TCMB组),比较CMB和TCMB对兔心肌缺血再灌注损伤的靶向显像能力。结果:CMB与TCMB的粒径差异无统计学意义(2.90±1.90μm vs 3.10±2.10μm,P>0.05),CMB表面电位高于TCMB(+31.30±3.90mV vs+22.00±2.40mV,P<0.01)。与活化血管内皮细胞粘附的TCMB数量是CMB的19.4倍,与脐静脉粘附的TCMB声强度是CMB的3倍,差异均有统计学意义(P<0.01)。TCMB可在兔心肌缺血再灌注损伤区域的冠脉内定向聚集,实现靶向超声分子显像,而CMB无明显靶向显像功能;TCMB组兔损伤区域心肌声强比是CMB组的1.86倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:ICAM-1靶向微泡能与损伤的血管内皮细胞特异性粘附,实现对心肌缺血再灌注损伤的靶向超声分子显像。

核定位信号肽在超声靶向破坏微泡介导基因转染治疗犬心肌梗死中的促进作用

目的探讨超声靶向破坏微泡(UTMD)技术联合核定位信号(NLS)肽增强犬心肌h Ang-1基因体内转染效率的可行性及应用价值。方法构建犬急性心肌梗死模型并分组进行基因转染治疗,每组8只。A组:建模成功后未行治疗,即空白对照组;B组:建模成功后超声介导质粒DNA转染;C组:建模成功后超声介导质粒DNA加经典NLS肽转染;D组:建模成功后超声介导质粒DNA加突变NLS肽转染;E组:建模成功后超声介导质粒DNA加经典NLS肽和入核阻滞剂转染。建模后转染前,HE染色观察心肌梗死后病理变化情况。转染后3 d,心肌冰冻切片检测EGFP标记的h Ang-1基因表达情况,RT-PCR和Western Blot分别从基因和蛋白水平方面检测心肌组织h Ang-1基因表达效率。转染后28 d,α-SMA免疫组化定位新生毛细血管,并在显微镜下计数新生微血管密度;Masson染色及心脏大体标本评价心肌梗死区纤维化程度及面积。建模前、建模后1周基因转染前及基因转染后28 d分别应用二维超声心动图检测各组犬射血分数及室壁运动情况,比较各组基因治疗效果。结果 (1)A、B、C组心肌组织中绿色荧光蛋白表达量逐渐增高,C、D、E组逐渐减少,Western Blot和RT-PCR检测结果显示h Ang-1蛋白及基因表达趋势与绿色荧光蛋白一致,C组与其余各组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)免疫组化结果显示C组毛细血管密度最高,与其余各组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);Masson染色显示A、B、C组心肌纤维化程度依次减低,C、D、E组依次增高。(3)建模后1周,5组犬均可见节段性室壁运动减低且射血分数明显减低,组间比较差异无统计学意义。基因转染后28 d,A、E组心功能明显减低,B、D组轻度减低,C组轻度增高,C组与其余各组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 UTMD联合NLS可高效、靶向地介导质粒DNA在缺血心肌内的表达,并促进血管新生,改善心肌纤维化,这种非侵入性的技术在心脏基因治疗方面将有较好的应用前景。

二维斑点追踪技术评价不同冠脉病变支数对冠心病患者左室解旋运动的影响

目的探讨二维斑点追踪(2DSTI)技术评价不同冠脉病变支数对冠心病患者左室解旋运动的影响,为准确评估冠心病患者左室舒张功能提供依据。方法 75例疑为冠心病的患者根据冠脉造影结果分为冠心病组45例(其中单支病变组27例和多支病变组18例)和对照组30例。应用2DSTI技术测量左室峰值扭转角度(Ptw)、峰值扭转角速度(PTV)、收缩末期扭转角度(AVCtw)、等容舒张末期扭转角度(MVOtw)、等容舒张期左室解旋率(Untw-R)、解旋速度峰值(PUV)、解旋角速度达峰时间(T-PUV)及解旋减半时间(UHT)。结果与对照组比较,冠心病组患者Ptw、PTV及PUV差异无统计学意义;冠心病组Untw-R低于对照组(P﹤0.001),T-PUV和UHT高于对照组(P﹤0.001)。多支病变组患者Untw-R和PUV明显低于单支病变组,T-PUV和UHT较对照组明显延长,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论冠心病患者左室解旋运动出现明显减低与延迟,多支冠脉狭窄患者左室解旋运动减低与延迟较单支冠脉狭窄患者更为明显。

超声微泡联合核定位信号促进SDF-1α基因转染治疗兔心肌梗死

目的探讨超声辐照下携基质衍生因子1(SDF-1α)基因的胞膜核膜双靶向阳离子微泡载体系统促进内源性干细胞归巢的机制。方法构建双靶向阳离子微泡载体系统及携SDF-1α阳离子微泡载体系统,分别于体外转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)并检测SDF-1α质粒入胞率、入核率及SDF-1α基因表达;进而构建心梗兔模型,造模成功后随机分为三组进行SDF-1α基因转染:A组:携SDF-1α双靶向阳离子微泡载体组;B组:携SDF-1α阳离子微泡载体组;C组:对照组。分别于基因转染后3天和4周后检测SDF-1α基因表达、干细胞标志物和血管新生效应。结果体外实验中,超声辐照下,与携SDF-1α阳离子微泡载体系统比较,携SDF-1α双靶向阳离子微泡载体系统SDF-1α质粒入胞率与其无显著差异(P>0.05),但入核率和SDF-1α蛋白表达显著增高(P<0.01);体内实验显示,与阳离子微泡载体组及对照组比较,双靶向阳离子微泡载体组家兔心肌组织中SDF-1α蛋白显著增高、干细胞标志物阳性染色显著增强、毛细血管密度显著增加(P<0.01)。结论超声辐照下携SDF-1α的胞膜核膜双靶向阳离子微泡载体系统能有效提高SDF-1α基因载体转染效率,表达足量的SDF-1α蛋白并发挥其干细胞诱导剂作用,从而促进内源性干细胞归巢并促进局部血管新生。

二维斑点追踪成像评价无排异心脏移植患者左室收缩功能

目的应用二维斑点追踪成像(2D-STI)评价无排异心脏移植患者的左室收缩功能。方法选取在我院行心脏移植手术后长期临床随访未发现明显排异反应的患者50例(心脏移植组)和同期健康志愿者30例(对照组),应用2D-STI检查获取两组左室心肌内膜、心肌外膜、整体纵向应变(endoGLS、epiGLS、GLS)、环向应变(endoGCS、epiGCS、GCS)及左室整体径向应变(G RS),并对两组进行比较分析。结果心脏移植组纵向应变参数GLS、endoGLS、epiGLS分别为(-16.02±2.95%)、(-18.75±3.44)%、(-15.41±2.46)%,环向应变参数endoGCS、GCS、epiGCS分别为(-25.74±4.59)%、(-15.22±3.79)%、(-10.66±3.73)%,径向应变参数GRS为(26.62±6.11)%,均较对照组减低,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论心脏移植患者即使未发生排异反应,其左室收缩功能仍较正常成人低。2D-STI是评价心脏移植患者左室收缩功能的有效手段。