毛冠鹿与3种麂属动物的线粒体细胞色素b的系统进化分析

采用PCR直接测序法 ,获得毛冠鹿、小麂、赤麂和黑麂等 4种麂亚科动物线粒体细胞色素b核酸序列36 6bp ,麂属动物之间的序列差异为 3 5 %～ 4 6 % ,毛冠鹿属与麂属之间的序列差异为 9 2 9%～ 10 11% ,麂属3种动物分歧时间约为 142～ 184万年 ,毛冠鹿与麂属动物的分歧时间约为 370万年。结合鹿科其余 3亚科动物的同源序列 ,用MEGA软件的Neighbor JoiningMethod (NJ法 )和最大简约法构建系统进化树。结果表明 ,小麂、赤麂与黑麂组成一个单系群 。

毛冠鹿p16^(INK4)基因第二外显子序列分析

采用PCR扩增技术首次克隆毛冠鹿p16 INK4 基因第二外显子 ,DNA杂交和序列分析发现 ,在 30 7个碱基的第二外显子中仅有 5个碱基的差异 ,同源性达 98.4% .p16 INK4 基因的第二外显子是高度保守的区域 。

毛冠鹿胚胎有限细胞系的建立及生物学特性研究

建立了毛冠鹿胚胎肺、肾有限细胞系 ,并对细胞形态、生长速度及核型等生物学特性进行了观察 ,发现了毛冠鹿新核型 ,根据C -带分析结果 ,提出了毛冠鹿中存在B染色体 。

uPA作用系统的调控与肿瘤

纤溶酶在体内形成是一个重要而复杂的过程,此过程包括纤溶酶原、激活剂、纤溶酶原激活剂抑制剂以及特异性的受体等。尿激酶型纤溶酶原激活剂(μPA)可激活纤溶酶原形成有活性的纤溶酶。在许多模型系统中证明了细胞表面μPA激活纤溶酶原在细胞外间质降解、基底膜的破坏等过程中都具有重要的作用。并参与肿瘤细胞浸润和转移的过程。

Rb基因产物功能的研究进展

本文介绍Rb基因产物的磷酸化和非磷酸化的变化与细胞生长和分化的关系。低磷酸化或非磷酸化形式具有抑制细胞增殖的作用。Rb蛋白除可与病毒癌基因产物相互作用外,还可以与细胞蛋白相互作用,这为解释Rb基因产物生长负调节作用机制提供了新的线索。

Rb基因表达与非小细胞肺癌关系的研究

采用mRNA原位杂交和免疫组织化学方法对 31例非小细胞肺癌及相应的正常组织进行Rb基因表达的研究 .结果显示Rb基因转录的阴性率为 16 1% (5 /31) ,蛋白表达异常率为 19 4% (6 /31) .表明 ,非小细胞肺癌的发生与Rb基因的表达有关 .

基于创新型人才培养的细胞生物学实验教学探索

细胞生物学是以实验为支撑的学科,实验对学生综合素质的培养具有举足轻重的作用。传统的实验教学方法可能难以适应培养创新型人才的新形势。本文从优化实验内容、完善实验教学体系、创新实验教学方法,完善成绩综合评定体系等方面进行了简单的细胞生物学实验教学改革的探索。

p16^(INK4)、Rb基因表达在肺癌发生中协调性研究

采用ｍＲＮＡ原位双杂交和免疫组织化学方法对３１例非小细胞肺癌组织进行ｐ１６ＩＮＫ４、Ｒｂ基因表达水平及其相关性的研究。结果显示，以Ｄｉｇ－碱性磷酸酶－ＮＢＴ／ＢＣＩＰ系统检测ｐ１６ＩＮＫ４基因转录，阳性结果呈蓝色，阴性杂交率为２２．６％（７／３１）；以Ｂｉｏ－辣根过氧化物酶－ＡＥＣ系统检测Ａｂ基因转录，阳性结果为红色，阴性率为１６．１％（５／３１）．免疫组织化学检测显示ｐ１６ＩＮＫ４蛋白质阴性率为４２％（１３／３１）；Ｒｂ蛋白表达阴性率为１９．４％（６／３１）。Ｒｂ、ｐ１６ＩＮＫ４基因在非小细胞肺癌发生中起协同调控作用，以ｐ１６ＩＮＫ４基因表达异常为主。

细胞生物学PBL教学法研究

PBL(problem-based learning)是以问题为基础的学习方法。细胞是生命活动基本单元,细胞生物学内容是人类不断应用当代科技解决细胞科学问题而积累形成的,它涉及所有生命活动。细胞的发现和细胞生物学的形成与发展依赖于前人敏锐的观察力、思考力以及现代物理学、化学、生物信息和系统论研究技术的应用。再现和模拟以问题为轴心的知识发现过程是开展PBL法教学的重要组成,有助于学生探究和学习能力的提高,体现新的教学理念。

人p16^(INK4) cDNA探针在非小细胞肺癌研究中的应用

制备总RNA ,RT PCR克隆p16 INK4 cDNA ,测序验证 ,制备探针 .进行PCR产物Southern杂交检测非小细胞肺癌组织标本中p16 INK4 基因第二外显子阴性杂交率为 12 .9% (4 / 31) .原位杂交显示p16 INK4 基因转录阴性率为2 2 .6 % (7/ 31) .结果说明克隆的p16 INK4 cDNA是正确的 ,可用于临床基因诊断 ,p16 INK4 基因变异及表达在非小细胞肺癌的发生。

重组纤溶酶原激活剂抑制剂-2对裸鼠皮下纤维肉瘤细胞移植瘤超微结构的影响

目的：研究重组纤溶酶原激活剂抑制剂一２基因表达对纤维肉瘤细胞超微结构的影响。方法：透射电镜对裸鼠皮下纤维肉瘤细胞移植瘤细胞超微结构进行研究。结果：ＨＴ１０８０Ｃ＋细胞形态多为不规则形状，细胞膜呈波状和突起。核膜呈波状或是凹陷很深。而转染纤溶酶原激活剂抑制剂一２基因的克隆细胞则显示细胞膜基本无突起，核多呈校形或椭圆形，核膜较平滑等良性化的结构。结论：重组纤溶酶原激活剂抑制剂一２可使纤维肉瘤细胞恶性特征减弱，降低肿瘤细胞的侵袭性。

离心洗脱法在Rb蛋白与细胞分化关系研究中的应用

离心洗脱技术可分离到ＨＬ６０细胞周期中同步的ＧＯ／Ｇ１期细胞．被视黄酸（ＲＡ）诱导的Ｇ０／Ｇ１细胞可以进行一个正常的细胞周期，Ｒｂ蛋白磷酸化水平随细胞周期而变化．但不能进入第二个细胞周期，细胞开始分化，Ｒｂ蛋白处于低磷酸化水平．Ｒｂ蛋白磷酸化水平的降低，是由于ＲＡ首先诱导细胞分化，使细胞生长停止。

原位双杂交法研究Rb、p16^(ink4)基因在非小细胞肺癌中的转录

目的 :探讨非小细胞肺癌组织中Rb、p1 6INK4 基因的转录。方法 :分别以Bio标记RbcDNA探针、Dig标记p1 6INK4 cDNA探针 ,进行mRNA原位双杂交。结果 :以Bio 辣根过氧化物酶 AEC系统检测Rb基因转录 ,阳性结果为红色 ,阳性率为 83 9% (2 6/3 1 ) ;以Dig 碱性磷酸酸酶 NBT/BCIP系统检测 p1 6INK4 基因转录 ,阳性结果呈蓝色 ,阳性杂交率为 77 4% (2 4/3 1 )。结论 :mRNA原位双杂交法具直观、适合少量细胞、能排除癌组织中混有间质细胞的影响、过程简便等优点 ,Rb、p1 6INK4

视网膜母细胞瘤基因产物磷酸化水平与细胞生长状态的关系

随着无血清培养细胞时间的延长，红胞合成Ｒｂ蛋白量和磷酸化水平逐渐降低，当细胞生长停止时，Ｒｂ蛋白处于低磷外化状态．正丁酸钠可诱导ＨＬ６０终端分化为单核－巨噬细胞；视黄酸、二甲基亚砜使ＨＬ６０分化为粒细胞．尽管分化途径不同．但是终端分化的细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．结果表明当细胞处于生长停滞状态，细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．

视网膜母细胞瘤基因产物部分性质的研究

研究Ｒｂ基因产物的代谢动力学和功能调节，发现整个细胞周期中都有Ｒｂ蛋白合成，其含量随细胞周期进行而变化，蛋白代谢的半衰期约为１１—１２小时，有非磷酸化和多种程度磷酸化形式。Ｒｂ蛋白的磷酸化水平是随细胞周期过程和细胞生长状态而变化的，在Ｇ０、Ｇ１期蛋白处于低磷酸化状态，到达Ｇ１／Ｓ界限，细胞获得磷酸化Ｒｂ蛋白的能力．

重组PAI—2基因在NIH3T3细胞中的活性表达

构建了人ＰＡＩ—２ｃＤＮＡ睥达质粒，以ＮＩＨ３Ｔ３为转染宿主细胞，ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和ＰＡＩ活性扩散试验结果表明人ＰＡＩ—２ｃＤＮＡ可以在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中正确表达出ＰＡＩ—２蛋白，且具有抑制ＰＡ的活性，同时未能检测到ＮＩＨ３Ｔ３细胞表达ＰＡＩ—２蛋白质．为探讨ＰＡ—ＰＡＩ—２系统的调控机制打下基础．

重组猪α干扰素基因定点突变及在大肠杆菌中的表达

用巨引物PCR法介导的定点突变把猪α干扰素 (PoIFN α)第 86位Cys(TGC)突变为Tyr(TAC) ,同时将其成熟蛋白N端第一个密码子TGT同义突变大肠杆菌偏爱的密码子TGC ,构建了大肠杆菌融合基因表达载体pGEX IFN ,表达产物占菌体总蛋白的 2 0 %。将以包涵体形式表达的目的蛋白经变、复性处理 ,并以FPLC进一步纯化 ,得到了具有较高生物活性的产物 (5 2 0 0IU mg)。

猪IFNα基因在毕赤酵母中的高效分泌表达

巴斯德毕赤酵母载体质粒 pPICZαA含有强启动子 PAOXⅠ和α MF信号肽序列,构建猪 IFNα基因的重组质粒pPICZαA IFNα,并转入E .coli JM109中,得到转猪IFNα基因工程菌,经酶切鉴定克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为猪 IFNα基因。通过电击将经 SacⅠ酶切后线性化的 pPICZαA IFNα质粒转化到巴斯德毕赤酵母 KM71中。SDS PAGE和Western blot鉴定表达产物的结果表明,分泌于胞外的猪 IFNα蛋白分子量比猪IFNα理论值分子量稍大,估计是糖基化的原因。表达的蛋白可发生正确的抗原 抗体反应,表达量为 0.45 mg/mL。将蛋白表达上清经细胞毒性实验检测表达产物的抗病毒活性为2.1×104 IU/mL。

毛冠鹿B染色体多态及遗传机制探讨

采用原代培养和传代培养法， 对１ 头毛冠鹿的胚肺组织细胞进行观察，发现一种新的核型，其二倍体染色体数目为２ｎ＝ ４８，核型公式为２Ｍ ＋ ２ＳＴ＋ ４２Ｔ＋ ＸＸ，出现１ 对大的末端着丝粒染色体，Ｃ－ 带显示该染色体与已报道的相关染色体同源，首次提出毛冠鹿Ｂ染色体多态，对其传递机制进行了探讨。

O型口蹄疫病毒VP1 T细胞与B细胞表位基因双拷贝串联表达产物的免疫应答

以一株O型口蹄疫病毒(FMDV)外壳蛋白VP1基因为模板,合成与细胞免疫及体液免疫相关抗原表位肽基因:21-40肽(20AA)和141-160肽(20AA)基因序列,运用基因工程技术构建了含有串联结构21-40(20AA)～141-160(20AA)～21-40(20AA)～141-160(20AA)的2020-2020VP1融合基因表达载体r2020-2020,转化宿主菌BL21(DE3)RIL后诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western Blot分析显示重组融合蛋白的分子量约为18Ku.动物实验表明,较小剂量的融合蛋白就能诱导豚鼠产生特异性T淋巴细胞增殖反应及抗FMDV中和抗体,证明该融合蛋白可同时激活细胞免疫及体液免疫反应,具有开发成为抗FMDV疫苗的应用价值.