马钱子治疗骨关节炎的潜在药物靶标

目的探讨马钱子能否作为治疗骨关节炎(OA)的潜在药物靶标。方法在中药系统药理学技术平台(TCMSP)中根据口服生物利用度(OB)和类药性(DL)筛选出马钱子的化学成分及其相对应的靶基因;检索GeneCards、OMIM等数据库筛选OA疾病的相关靶点,应用Cytoscape3.7.2软件构建药物-活性成分-基因-疾病的网络,最后通过string平台构建蛋白相互作用网络,并筛选关键蛋白;同时对靶点基因作GO功能和KEGG通路富集分析。结果根据OB和DL筛选出13个马钱子主要活性成分,与马钱子治疗OA相关的靶基因17个;并筛选出10个关键蛋白和5条信号通路,而这些靶点和通路主要与镇痛、抗炎、核受体以及雌激素信号通路相关。结论马钱子治疗OA具有多途径、多成分、多靶点特点,核受体家族可能是马钱子治疗骨关节炎潜在药物靶标。

参芪复方对GK大鼠骨骼肌线粒体膜电位及相关促凋亡蛋白的影响研究

目的探讨参芪复方对自发性糖尿病(Goto-Kakizaki,GK)大鼠骨骼肌线粒体膜电位及相关凋亡蛋白的影响。方法采用高脂饲料喂养GK大鼠,建立糖尿病大鼠动物模型,造模成功后将GK大鼠随机分为模型组、罗格列酮组、参芪复方组,每组10只;10只Wistar大鼠作为空白对照组,普通饲料喂养。罗格列酮组灌胃给予0.67 mg/(kg·d)罗格列酮混悬液,参芪复方组灌胃给予14.33 g生药/(kg·d)参芪复方混悬液,空白对照组、模型组均每日灌胃给予同等体积生理盐水,连续给药8周。采用流式细胞检测线粒体膜电位;RT-qPCR和Western blot检测大鼠腓肠肌凋亡诱导因子(Aapoptosis inducing factor,AIF)、细胞色素C(Cytochrome c,Cyt c)、第二个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活因子(Second mitochondrial activator of caspase/direct IAP binding protein with low PI,Smac/DIABLO)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Cysteinyl aspartate specific proteinase-9,Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)的蛋白和mRNA表达情况。结果与空白对照组比较,模型组GK大鼠腓肠肌线粒体膜电位降低(P <0.05),AIF、Cyt c、Smac/DIABLO、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达增加(P <0.05);与模型组比较,罗格列酮组和参芪复方组线粒体膜电位均升高(P <0.05),罗格列酮组AIF、Cyt c、Smac/DIABLO、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达均降低(P <0.05),参芪复方组AIF、Cyt c、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达、mRNA表达降低(P <0.05),Smac/DIABLO蛋白表达降低(P <0.05),Smac/DIABLO mRNA表达具有下降趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05)。结论参芪复方可通过上调线粒体膜电位,抑制促凋亡蛋白AIF、Cyt c、Smac/DIABLO从线粒体内释放出来,进而抑制Caspase-9、Caspase-3表达,减少骨骼肌细胞凋亡,发挥骨骼肌保护作用。

基于Zinc-ZIP8-MTF1轴研究独活寄生汤治疗膝骨关节炎的作用机制

目的观察独活寄生汤调控Zinc-ZIP8-MTF1轴,探讨独活寄生汤治疗膝骨关节炎的作用机制。方法选用54只小鼠,分为独活寄生汤组(DHJST组)、对照组(Model组)、空白组(Control组),每组18只,Model组、DHJST组构建小鼠膝骨关节炎模型,DHJST组予独活寄生汤,另两组予生理盐水,观察小鼠膝关节软骨病理改变,检测软骨细胞内Zn^(2+)浓度及锌转运蛋白(ZIP8、ZNT9)、金属调节转录因子(MTF1)、基质金属蛋白酶-3(MMP3)、基质金属蛋白酶-13(MMP13)表达。结果与Model组比较,DHJST组小鼠软骨组织病理学评分明显下降,软骨细胞内Zn^(2+)含量大幅减少,软骨组织中ZIP8、ZNT9、MTF1、MMP3、MMP13 mRNA表达降低(P<0.05)。结论Zinc-ZIP8-MTF1轴在独活寄生汤治疗KOA的机制中发挥了一定作用,但独活寄生汤对Zn2+进出软骨细胞的关键环节没有明显影响。

朱明双教授基于“肥人多痰湿”理论治疗腰椎间盘突出症经验

目的基于"肥人多痰湿"理论基础,运用中医辨病辨证思维治疗腰椎间盘突出症。方法在中医基础理论指导下,朱明双教授根据自己丰富的临床经验,运用古人提出的"肥人多痰湿"理论,结合四川盆地多湿的气候特点,运用经方治疗肥胖患者的腰椎间盘突出症,同时嘱患者加强腰背肌功能锻炼,通过随访了解患者恢复情况。结果中医药保守治疗结合功能锻炼,对于腰椎间盘突出症的肥胖患者达到了很高的治愈率,患者满意度较高。结论中医药治疗腰椎间盘突出症有其丰富的经验和可喜的效果,我们应充分发挥祖国医学的独特理论,推动我国医药卫生事业的发展。

基于Zinc/ZIP8信号通路的独活寄生汤对膝骨关节炎作用影响的研究

目的探寻独活寄生汤含药血清对小鼠软骨细胞内锌离子及其转运蛋白ZIP8(Znic/ZIP8)的影响。方法将软骨细胞随机分为:空白对照组(Control)、模型对照组(Model/ZnCl2)、Ad-Zip8组(Ad-Zip8)、Zip8-siRNA组(Zip8-siRNA)。分组后,培养体系内加入1ng/mL IL-1β,培养24 h后,除空白对照组,其余各组加入100μmol/LZnCl2,同时给予不同剂量(体积分数10%、5%、2.5%)独活寄生汤含药血清;继续培养48 h后采用荧光染色技术检测软骨细胞内Zn2+浓度,提取细胞总RNA,去除gDNA,合成cDNA,采用qRT-PCR检测软骨细胞ZIP8基因的表达,采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)结合图像分析ZIP8蛋白表达。结果独活寄生汤含药血清可以降低由IL-1β诱导的炎症状态下软骨细胞内Zn2+的浓度,并呈量-效关系;独活寄生汤含药血清对可降低Zip8mRNA/ZIP8蛋白的表达水平,但其作用强度不及Zip8-siRNA,但其无法抑制由Ad-Zip8引发的Zip8m RNA/ZIP8蛋白表达水平升高。结论独活寄生汤含药血清可通过降低炎性状态的软骨细胞内Zn^2+浓度,下调ZIP8的转录和蛋白水平,以维持关节软骨细胞Zn^2+的稳态。