骨髓间质干细胞与肿瘤细胞中FN1、NME2、TIMP3基因表达检测

目的探讨纤维连接蛋白1(FN1)、肿瘤转移抑制基因2(NME2)、组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)基因在胎儿骨髓间质干细胞(FMSCs)、成人骨髓间质干细胞(AMSCs)、F6、SGC及白血病细胞中的差异表达,寻找肿瘤和白血病的分子生物学特征。方法分别提取FMSCs、AMSCs、F6、SGC及白血病细胞的总RNA,逆转录cDNA,以cDNA为模板用PCR和实时PCR技术分别测定FN1、NME2、TIMP3基因表达水平。结果AMSCs组FN1、NME2、TIMP3基因表达水平均高于FMSCs、F6、SGC组(P<0.001);F6细胞以及白血病细胞中未能检出TIMP3基因的表达。结论FN1、NME2、TIMP3基因的下调以及TIMP3基因的缺如,可能是FMSCs突变为F6肿瘤细胞的分子特征之一;TIMP3基因的下调可能是肿瘤细胞的一种分子标志。

血浆miRNA表达谱与胰腺癌相关性的研究

目的:探讨血浆miRNA的表达水平与胰腺癌发病的关联。方法:通过TLDA(TaqMan low density array)芯片系统筛选24例胰腺癌患者和24例健康对照间差异表达的miRNA,对差异表达miRNA采用实时荧光定量PCR法进行单个样本验证。结果:miR-451和miR-409-3p的表达水平在胰腺癌组和对照组中有显著的差别,P值分别为0.004 1和0.005 7。这2个miRNAs的组合以93.8%的受试工作者曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)将健康对照组和胰腺癌患者组分开(灵敏度为95.8%,特异度为91.7%)。结论:血浆miR-451和miR-409-3p的表达水平可有效区分胰腺癌患者和健康个体。

肝功能异常患者血清自身抗体检测对诊断自身免疫性肝病的意义

目的:探讨89例肝功能异常患者血清中抗核抗体(ANA)、平滑肌抗体(SMA)、抗肝肾微粒体1型抗体(LKM-1)、抗肝溶质抗原1型抗体(LC-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(SLA/LP)、抗线粒体亚型-丙酮酸脱氢酶复合物(AMA-M2)对自身免疫性肝病诊断的意义。方法:收集不明原因肝功能异常患者41例、各种病毒性肝炎患者48例及健康体检者30例(对照组)的血清标本,对所有对象均采用间接免疫荧光法检测ANA、SMA和免疫印迹法检测LKM-1、LC-1、SLA/LP、AMA-M2等6项指标。结果:各组肝病标本的自身抗体检出总阳性率分别为AIH86.7%、PBC90.9%、HAV25.0%、HBV20.0%、HCV25.0%、HEV12.5%,对照组为3.3%;自身免疫性肝炎组与各组间差异有显著性统计学意义(P<0.05);自身免疫性肝炎患者伴有不同程度肝脏损伤,ALT、AST升高明显。结论:肝功能持续异常的肝病患者适合进行肝病相关自身抗体的检测,对不明原因肝炎的病因探寻,自身免疫性肝病的早期诊断,分型及治疗都具有非常重要的意义。

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的时间节律性及其机制研究

本研究旨在观察高三尖杉酯碱(HHT)作用于K562细胞后不同时间点凋亡率的变化及其机制。HHT 10ng/ml作用K562细胞后,用MTT法检测不同时间点的细胞增殖活力,Western blot法检测caspase-3凋亡蛋白表达;流式细胞术检测BCL-2蛋白表达;应用透射电子显微镜观测细胞自噬。结果表明,HHT 10 ng/ml处理后的前5 d,K562细胞增殖活性逐渐下降,但在第6天以后增殖活性又逐渐上升;同时激活型caspase-3蛋白从第1天至第7天逐渐增高,而在第8天明显降低(P<0.05);BCL-2蛋白表达水平则呈现先降低后升高(P<0.05)的特点。细胞自噬体在HHT作用第8天明显增多。结论:HHT作用后,K562细胞凋亡水平变化呈现先升高后下降的特点,其机制与HHT作用后期K562细胞自噬水平升高有关。

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱(HHT)对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48 h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,IC50为43.89 ng/ml。HHT 10 ng/ml作用48 h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0/G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。

IL23R基因多态与食管癌遗传易感性的关联研究

目的:探讨白细胞介素23受体(IL23R)基因多态与中国人群食管癌易感性的关系。方法:采用病例-对照研究设计,收集经病理组织学确诊的食管癌新发病例共1 045例,性别、年龄等人口学特征与病例频数匹配的健康对照1047例。选取IL23R基因启动子区域SNP rs6682925 T>C以及第二外显子区域SNP rs1884444 T>G为研究位点。应用TaqMan基因分型技术进行基因型检测并进行相关统计分析,比较不同基因型与食管癌发病风险的关系。结果:在调整年龄、性别、吸烟、饮酒因素后,携带IL23R rs1884444 TG/GG基因型的个体发生食管癌的风险较携带IL23R rs1884444TT基因型者增加了20%(校正OR=1.20,95%CI=1.01～1.43),携带rs6682925 TC/CC基因型者发生食管癌的风险较携带TT基因型者增加17%(校正OR=1.17,95%CI=0.98～1.40)。分层分析结果显示rs1884444风险等位基因G和rs6682925风险等位基因C的危险作用在年轻者(≤60岁)和不饮酒者中尤为明显。结论:IL23R rs1884444和rs6682925多态与中国汉族人群食管癌遗传易感性有关。

直肠癌患者血清中白介素-8、TNF-α和T细胞亚群的临床研究

目的探讨直肠癌患者免疫状态及其与肿瘤临床病理特征的关系。方法分别采用流式细胞仪和ELISA双抗夹心法检测43例直肠癌患者血清中单个核细胞CD4、CD8以及白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,并与正常人进行对照。结果直肠癌患者外周血T细胞亚群CD4、CD4/CD8明显低于对照组(P<0.01),并且随着Dukes分期的增加而逐渐降低;CD8、IL-8和TNF-α明显高于对照组(P<0.01),并且随着Dukes分期的增加而逐渐升高。结论直肠癌患者存在免疫功能低下,血清中T细胞亚群以及IL-8、TNF-α含量与直肠癌Dukes分期具有相关性。

实时定量PCR检测骨髓间质干细胞及肿瘤细胞BMI-1基因

目的 建立BMI- 1基因(theBcell specificsmoloneymurineLeukemiaVirusintegrationsite 1)表达的实时荧光定量PCR,利用该方法在基因转录水平上研究BMI- 1在间质干细胞 (MSCs)及肿瘤细胞中的表达水平。方法 通过RT- PCR,T- A克隆,real timePCR等方法精确测定并比较BMI 1基因在胚胎MSCs、成人MSCs、A549(人肺腺癌细胞株)、SW 480(人结肠腺癌细胞株)、U937(人髓系白血病细胞株)、健康人外周血淋巴细胞以及白血病细胞中表达水平。结果 测定绘制BMI 1基因的标准曲线(相关系数r=0. 998),胚胎MSCs中BMI- 1的表达水平高于成人MSCs,慢性粒细胞白血病(CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)中BMI- 1的表达量分别高于急性粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病,U937和A549中的表达量高于SW 480,健康人外周血淋巴细胞中BMI 1的表达明显低于慢性髓系白血病(P<0. 01)。结论 定量测定BMI -1的real- timePCR方法较稳定、准确。BMI- 1基因可以作为某些肿瘤特别是白血病治疗的靶点,其表达水平可作为判断肿瘤恶性程度的参考指标。

人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11的构建及其生物学特性探讨

目的:建立耐伊立替康(CPT-11)的人结直肠癌细胞株(HT-29/CPT-11),并研究其生物学特性。方法:采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/CPT-11;CCK-8法检测CPT-11对亲本细胞HT-29和耐药细胞株HT-29/CPT-11细胞的半数抑制率(IC50);绘制细胞生长曲线,并计算细胞倍增时间;流式细胞术分析细胞周期分布;RT-PCR检测HT-29/CPT-11和HT-29细胞MDR-1 mRNA的表达。结果:(1)成功建立人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,耐药指数为6.51。(2)HT-29/CPT-11耐药细胞株倍增时间较原代细胞HT-29延长[分别为(41.29±1.69)h和(27.12±2.73)h,P<0.05]。(3)流式细胞术检测细胞周期结果显示,耐药细胞株HT-29/CPT-11 G1期细胞数目增加,S期细胞数目减少(P<0.05)。(4)耐药细胞HT-29/CPT-11的MDR-1 mRNA表达水平明显高于亲本细胞株HT-29,分别为1.086±0.054和0.416±0.02(P<0.05)。结论:成功构建了人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11,为下一步研究耐药机制奠定实验基础。

肝功能异常的乙肝患者血清中自身抗体检测分析

目的探讨自身抗体在乙型肝炎发生和发展中的作用。方法收集肝功能明显异常的115例乙肝患者、60例健康体检者(正常对照)的血清标本,采用间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA);免疫印迹法检测抗线粒体抗体(AMA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM);实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA水平。结果对照组、乙肝组、肝硬化组及肝癌组自身抗体总阳性率依次升高,P均<0.05。乙肝组急性乙肝、慢性乙肝、重症乙肝自身抗体总阳性率依次升高,P均<0.05。肝硬化组自身抗体总阳性率低于肝癌组,但两者比较差异无显著性。HBV-DNA阳性者自身抗体总阳性率高于阴性者,但差异无统计学意义。结论 HBV感染可诱发自身免疫反应,其产生的多种自身抗体可促进乙型肝炎的发生和发展。

干扰素-α联合高三尖杉酯碱对K562细胞增殖及β-catenin基因表达的影响

本研究探讨干扰素-α(IFN-α)联合高三尖杉酯碱(HHT)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及β-环联蛋白(β-catenin)基因表达的影响。用IFN-α、HHT单药或两药联合处理后,K562细胞的增殖、凋亡、细胞周期及β-catenin mRNA表达水平分别用MTT法,流式细胞术及RT-PCR方法检测。结果显示,单用HHT能明显抑制K562细胞增殖,诱导凋亡,使细胞阻滞在G0/G1期,β-catenin表达下调,呈时间和剂量依赖性,而IFN-α无此作用。HHT组的β-catenin表达水平为0.5576±0.0373,低于空白对照组(0.9369±0.0142)。IFN-α联用HHT组β-catenin表达较单用HHT组下调更显著(0.3737±0.0529 vs 0.5576±0.0373,P<0.05)。HHT联合IFN-α对正常人骨髓单个核细胞未见明显毒性作用。结论:IFN-α联用HHT可明显增强后者的抗K562细胞作用,而β-catenin表达下调可能为其作用机制之一。

四例急性巨核细胞白血病实验室诊断分析

目的探讨急性巨核细胞白血病(AMKL)的实验室诊断方法。方法采用流式细胞术单克隆抗体直接免疫标记检测白血病细胞表面相关抗原表达;48 h培养法R显带检测染色体核型;RT-PCR法检测BCR/ABL融合基因P210型与BCR/ABL融合基因P190型;骨髓活检与骨髓形态学分析骨髓异常情况。结果 4例AMKL均表现CD41与CD42的高表达,其中两例伴CD13和CD33的高表达;1例核型异常47,XY,+1[6]/46,XY[14];BCR/ABL融合基因P210型与P190型均阴性;骨髓活检与骨髓形态学分析4例均见骨髓原始、幼稚巨核细胞增生。结论依靠细胞形态学、流式细胞术白血病免疫分型检测及细胞遗传学可以确定AMKL的诊断。

溃疡性结肠炎患者P-选择素检测和血小板计数的临床意义

目的:探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和血小板计数及血小板活化状态的关系。方法:对54例活动期溃疡性结肠炎、26例缓解期溃疡性结肠炎和正常对照组30例采用血细胞记数仪测定血小板数量,流式细胞术检测P-选择素(CD62p)。结果:①血小板计数:活动期UC患者血小板计数[(212.2±97.6)×l09/L]明显高于缓解期[(168.7±67.8)×l09/L]和对照组[(166.8±81.4)×l09/L](P<0.01);缓解期患者与对照组相比无明显差异(P>0.05)。②P-选择素水平:与对照组(3.9±1.2%)和缓解期(8.6±2.1%)患者组比较,活动期溃疡性结肠炎患者P-选择素(13.3±3.4)%显著升高(P<0.01),缓解期患者P-选择素仍高于正常对照组(P<0.05)。③在活动期UC患者中,对于不同的病情程度,血小板计数与P-选择素水平有显著性差异。结论:活动期溃疡性结肠炎体内存在血小板活化;P-选择素和血小板计数的变化对评价病情活动性与严重程度均有良好的价值。

塞来昔布联合干扰素α对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期和CD117表达的影响

本研究探讨塞来昔布(Celecoxib)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期和CD117表达的影响及其与干扰素α(IFN-α)联用的协同作用。通过以不同浓度组合的Celecoxib和IFN-α作用于培养的K562细胞,用MTT比色法观察各组的细胞生长抑制情况,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和CD117膜抗原表达情况。结果显示:Cele-coxib可明显抑制K562细胞增殖,抑制效应呈浓度依赖性(r=-0.91)。K562细胞培养72小时后,空白对照组、IFN-α组、Celecoxib组和Celecoxib联合IFN-α组的细胞增殖率分别为(96.1±0.5)%、(90.2±0.4)%、(57.2±0.9)%和(21.9±0.3)%;细胞凋亡率分别为(5.5±0.8)%、(6.3±0.6)%、(26.4%±3.9)%和(57.3±4.5)%;K562细胞膜CD117表达率分别为54.7%、10.5%、36.3%和7.3%。两药联用还可使K562细胞阻滞于G0/G1期。结论:Celecoxib和IFN-α不同程度地抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡、产生G0/G1期阻滞和降低CD117表达,两药联用对上述效应具有协同作用。

原发性胆汁性肝硬化患者自身抗体检测分析

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种病因尚不明确、慢性进行性胆汁淤积性自身免疫性肝脏疾病。可能在一定遗传背景下,由于持续性感染（细菌、病毒、真菌等）、环境因素或毒物作用等,导致免疫调节紊乱和自身免疫反应。病理学特点为汇管区炎症及免疫介导的肝内胆管的破坏,

拉西地平的合成

报道以氯乙酸氯为起始原料，依次合成氯乙酸叔丁酯（Ⅱ）、三苯基膦烯乙酸叔丁酯（Ⅱ）、3－（2－甲酰基苯基－2（E）－丙烯酸叔丁酯（Ⅳ），（Ⅳ）与3－氨基丁烯酸乙酯环合得到拉西地平（Ⅰ）的工艺过程。

毛细胞白血病4例及其相关实验室诊断分析

目的:探讨毛细胞白血病(HCL)特征性诊断及鉴别诊断方法。方法:对4例HCL患者的临床特征及骨髓病理、组织细胞化学、白血病免疫分型、电镜等实验室检查结果进行分析。结果与结论:骨髓病理、组织细胞化学、白血病免疫分型、电镜在HCL的诊断中具有重要意义,HCL的鉴别诊断须结合患者临床特征及实验室检查。

靶向SMC1A基因慢病毒介导的RNA干扰对奥沙利铂治疗敏感性的影响

目的探讨沉默结直肠癌细胞株染色体结构维持-1A(SMC1A)基因对奥沙利铂(L-OHP)敏感性的影响。方法构建SMC1A基因的小分子RNA干扰表达质粒。与慢病毒包装质粒一起转染239T细胞制备pGCSIL-GFP/SMC1A-siRNA慢病毒载体,并将重组质粒转染结直肠癌SW480、HT-29细胞株。RT-PCR、Western blotting法检测SMC1A mRNA和蛋白的表达情况。CCK-8法检测不同浓度L-OHP对细胞的抑制作用。结果 pGCSIL-GFP/SMC1A-siRNA慢病毒载体构建成功,RT-PCR产物为343bp。RT-PCR显示重组质粒转染的SW480、HT-29细胞SMC1A mRNA表达量明显低于其对应的未转染细胞(0.13±0.02 vs.1.02±0.06,0.182±0.019 vs.1.114±0.032;P<0.05);Western blotting显示干扰后的细胞SMC1A蛋白表达受到明显抑制;不同浓度的L-OHP处理细胞48h后,CCK-8显示转染SMC1A-siRNA细胞生长抑制率较未转染细胞高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论沉默结直肠癌细胞株SMC1A基因对奥沙利铂的敏感性显著增加,为临床进一步提高结直肠癌的疗效提供了研究基础。