淀粉-明胶电化学合成水凝胶研究

在电流密度15 m A·cm^-2,SS质量分数10%,Na Cl质量分数为2%的条件下,使用LK98BⅡ型微机电化学分析系统制备OS.分别将OS、SS与明胶在电场下共混,制得OS-G、SS-G、SS+G 3种复合膜,分析得:SS-G透光率在80%以上;通过FT-IR分析发现SS-G在电场作用下产生新的物质;由复合物的XRD图谱分析,SS-G内分子结构发生变化,有新的结晶区产生;由复合物的DSC分析,SS-G的相容性较好;通过测试复合物的吸水溶胀性能,SS-G的吸水溶胀率能达到650%.SS-G的效果最好,可见其是一种特殊的水凝胶.

基于单电流阶跃法的淀粉间接电化学氧化研究

以钛板作为阴极,石墨烯为阳极,NaCl为支持电解质兼氧化源,进行淀粉的间接电氧化。以电流密度、可溶性淀粉(SS)质量分数、NaCl质量分数、电解时间4个因素进行L9(34)正交实验。正交实验结果表明,最佳的SS和NaCl质量分数分别为10%、2%。采用单电流阶跃法对电流密度、电解时间进行了单因素考察,结果表明,最佳的电流密度是20mA/cm2。根据图像中电势的跃迁特征取样进行淀粉氧化过程醛基分析,获得间接氧化实验体系最佳时间为电势的转折点。分析发现,转折点上的氧化淀粉含醛基质量分数已接近最大平衡。FTIR及XRD的辅助分析证明,在转折点的氧化淀粉结构与原淀粉之间已发生了明显氧化变化,确定最佳电解时间是1200 s。在此条件下,得到氧化淀粉含醛基质量分数为0.432%。

细粒棘球蚴感染小鼠单核髓源抑制性细胞精氨酸酶的表达和活性研究

目的分析细粒棘球蚴感染小鼠单核髓源抑制性细胞(M-MDSC)精氨酸酶的表达和活性变化。方法 12只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组和感染组。感染组小鼠腹腔注射活原头节2 000个/只,对照组小鼠注射等体积生理盐水。于感染后120 d采集小鼠眼眶静脉丛外周血,解剖并观察小鼠腹腔和各脏器的病变。无菌取小鼠脾组织,制备单细胞悬液后,利用免疫磁珠分离M-MDSC。提取并纯化M-MDSC RNA,合成c DNA,芯片检测筛选感染组和对照组的M-MDSC差异基因,荧光定量PCR验证差异基因的表达。精氨酸酶检测试剂盒检测小鼠外周血中的精氨酸酶活性。结果BALB/c小鼠感染细粒棘球蚴原头节后120 d,腹腔和内脏器官中形成单性包囊。免疫磁珠分离获得M-MDSC。芯片杂交和荧光定量PCR检测结果显示,感染组小鼠M-MDSC源精氨酸酶相对表达量分别为7.92±0.85和11.97±5.39,均高于对照组小鼠(1.65±0.19和1.00±0.57)(P<0.05)。检测结果表明,感染组小鼠外周血中的精氨酸酶活性为(3.83±0.44)U/L,高于对照组小鼠[(1.57±0.57)U/L](P<0.05)。结论细粒棘球蚴感染小鼠M-MDSC精氨酸酶的表达量和活性显著升高。

广西宾阳县和灵山县水源隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫污染调查

目的了解广西壮族自治区宾阳县和灵山县水源中隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)的污染情况。方法利用质控标样检验碳酸钙絮凝和膜过滤富集隐孢子虫卵囊、贾第虫包囊的回收率,并与我国的国标方法比较。2016、 2017年6-9月,采集广西壮族自治区宾阳县(自来水厂A、 B、 C、 D和E)和灵山县(自来水厂F、 G、 H、 I和J) 10个自来水厂的进水和出厂水水样,应用碳酸钙絮凝法富集进水中隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊,膜过滤法富集出厂水中隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊;富集后用磁珠分选和荧光染色检测隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊,计算水样中隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊的密度。结果碳酸钙絮凝法富集质控标样隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊的回收率分别为48.5%和52.0%,膜过滤法为35.0%和36.5%,国标方法为15.0%和16.0%,碳酸钙絮凝法、膜过滤法的回收率均高于我国国标方法,差异具有统计学意义(碳酸钙絮凝法:χ~2=26.007、28.877,均P <0.01;膜过滤法:χ~2=8.167、 11.019,均P <0.01)。10个自来水厂中,每个自来水厂采集进水和出厂水水样各2份。检测结果显示:自来水厂A的进水、 B的进水和出厂水、 C和F的出厂水中检出隐孢子虫卵囊,密度分别为4.0、 10.0、 0.6、 2.9、 5.1个/10 L;自来水厂F的出厂水中检出贾第虫包囊,密度为9.3个/10 L。其余自来水厂的进水和出厂水均未检出隐孢子虫和贾第虫。结论广西壮族自治区宾阳县和灵山县部分自来水厂的进水或出厂水中存在隐孢子虫或贾第虫污染,需加强农村地区饮用水隐孢子虫和贾第虫的监测。

上海某动物园灵长类动物隐孢子虫感染情况

目的了解上海地区某动物园灵长类动物隐孢子虫感染情况。方法 2013年3月至2014年10月,采集上海市某动物园灵长类动物的新鲜粪样,经金胺酚-改良抗酸染色后,镜下观察隐孢子虫卵囊。采用巢式PCR扩增18S r RNA基因,测序分析后鉴定虫种,采用Mega7软件用邻接法构建系统进化树。结果共采集8科37种灵长类动物新鲜粪样83份,镜检未见隐孢子虫卵囊。巢式PCR检测其中3份粪样(6号红猩猩、42号和4 4号山魈的粪样)隐孢子虫阳性,DNA阳性率为3.61%(3/83)。测序结果显示,与安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)(GenBank登录号KT175424、KF271479、KF271467)的同源性均为99%。系统进化树显示,3份阳性样品的基因序列与其他来源的安氏隐孢子虫(GenBank登录号KT175424、KF271479、KF271467、KF826314、KJ917578)亲缘关系相近,处于同一分支,表明本次分离的虫株为安氏隐孢子虫。结论上海地区某动物园灵长类动物存在安氏隐孢子虫感染,具有潜在人兽共患的风险。

应用非等间距灰色模型GM(1,1)预测广西宾阳县农村居民隐孢子虫感染趋势

目的建立隐孢子虫感染率预测模型,预测广西壮族自治区(广西)宾阳县农村居民隐孢子虫感染率,为制定防控措施提供参考依据。方法 2014、 2016、 2017和2018年分别采用分层整群随机抽样的方法抽取宾阳县农村居民,收集符合条件居民的粪样进行隐孢子虫免疫试纸条检测,获得该县各年农村居民隐孢子虫感染率。根据宾阳县2014、 2016、 2017和2018年隐孢子虫感染率,建立非等间距灰色模型GM (1,1)以预测2019年和2020年该县农村居民隐孢子虫感染率。模型检验采用残差检验、关联度检验和后验差检验。结果广西宾阳县2014、 2016、 2017和2018年农村居民隐孢子虫感染率分别为2.9%(57/2 000)、 1.5%(15/1 030)、 1.1%(11/1 027)和0.6%(6/1 004)。隐孢子虫感染率预测模型为:■。应用该模型获得2014、 2016、 2017和2018年宾阳县农村居民隐孢子虫感染率的拟合值分别为2.9%、 1.5%、 1.0%和0.7%,预测模型的绝对误差分别为0.000 0、-0.001 6、 0.136 8和-0.121 4,相对误差分别为0.000 0、 0.001 1、0.124 4和0.202 3。关联度r=0.667 7,后验方差比C=0.106 8,后验概率P=1.00。2019和2020年宾阳县农村居民隐孢子虫感染率的预测值分别为0.5%和0.4%。结论建立了隐孢子虫感染率的非等间距灰色模型GM (1,1),该模型预测精度较高,拟合效果较好。预测宾阳县农村居民隐孢子虫感染率呈下降趋势。

细粒棘球蚴感染小鼠肝精氨酸酶的表达和功能研究

目的分析精氨酸酶(ARG)在细粒棘球蚴感染小鼠肝白细胞中的表达和功能。方法将18只雌性BALB/c小鼠随机分为感染组和对照组,每组9只。感染组小鼠腹腔注射细粒棘球蚴原头节2000个/鼠,对照组注射等量生理盐水。感染后270 d,分离小鼠肝组织中白细胞。蛋白质印迹(Western blotting)分析肝白细胞中ARG和一氧化氮合酶(NOS)的表达情况,采用Image J软件分析蛋白质表达丰度。ARG活性检测试剂盒、尿素检测试剂盒和一氧化氮(NO)检测试剂盒检测肝中白细胞的ARG活性、肝组织的尿素和NO含量。流式细胞术分析肝多种髓系细胞中ARG-1和T细胞中CD3ζ的表达情况。采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析。结果Western blotting检测结果显示,感染组小鼠肝白细胞中ARG-1表达的灰度值为1.03±0.01,高于对照组的0.12±0.01(P<0.01);感染组小鼠肝白细胞中ARG-2和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达的灰度值分别为0.54±0.01和0.64±0.02,对照组分别为0.55±0.02和0.59±0.02,差异均无统计学意义(P>0.05)。感染组小鼠肝白细胞中的ARG活性、肝组织中的尿素和NO含量分别为(0.03±0.00)U/ml、(0.66±0.02)mmol/L和(14.63±1.55)μmol/L,对照组分别为(0.02±0.00)U/ml、(0.04±0.01)mmol/L和(29.22±0.36)μmol/L,两组差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术分析发现,ARG-1在感染组小鼠肝白细胞中CD11b^+CD11c^+、CD11b^+F4/80^+、CD11b^+Gr-1^+、CD11b^+Gr-1^+Ly-6C-Ly-6G^+、CD11b^+Gr-1^+Ly-6C^+-Ly-6G^-和CD11b^+Ly-6G^+中表达的相对平均荧光密度分别为1.41±0.12、1.21±0.06、1.52±0.16、1.30±0.03、1.58±0.12和1.21±0.04,均高于对照组的1.00±0.14、1.00±0.05、1.00±0.01、1.00±0.07、1.00±0.03和1.00±0.02(P<0.05)。CD3ζ在感染组小鼠肝CD4^+和CD8^+T细胞中表达的相对平均荧光密度分别为0.82±0.04和0.78±0.05,均低于对照组的1.00±0.05和1.00±0.07(P<0.05)。结论细粒棘球蚴感染小鼠肝白细胞中ARG-1表达增多,一定程度上拮抗NOS;肝CD4^+和CD8^+T细胞中CD3ζ表达下调。

122例脑炎脑膜炎症候群患者猪囊尾蚴、刚地弓形虫抗体血清学检测结果分析

目的 了解122例脑炎脑膜炎症候群患者血清中猪囊尾蚴（Cysticercus cellulosae）、刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）IgG、IgM抗体阳性情况，为临床诊断脑炎脑膜炎症候群患者的病原提供参考依据。 方法 2014年8月至2015年12月，采集上海交通大学附属第六人民医院、江苏省丹阳市人民医院和江苏大学附属医院收治的脑炎脑膜炎症候群患者血清，用猪囊尾蚴和刚地弓形虫IgG、IgM抗体检测试剂盒检测血清中抗猪囊尾蚴、刚地弓形虫的抗体，计算抗体阳性率，分析其性别分布、急性感染季节分布、年龄分布和职业分布情况。 结果 122例脑炎脑膜炎症候群患者血清中，猪囊尾蚴IgG和IgM抗体阳性分别为17例、22例，阳性率为13.9%（17/122）和18.0%（22/122）；刚地弓形虫IgG和IgM抗体阳性分别为29例和8例，阳性率为23.8%（29/122）和6.6%（8/122）。男性猪囊尾蚴和刚地弓形虫阳性率为30.6%（22/72）和31.9%（23/72），女性为26.0%（13/50）和24.0%（12/50）。猪囊尾蚴IgM抗体阳性率季节分布分别为12.0%（3/25）、27.0%（17/63）、6.9%（2/29）和0/5；阳性率最高的年龄段出现在13～25岁组，为45.0%（9/20）；工人组阳性率最高，为7/14。刚地弓形虫IgM抗体阳性率季节分布为4.0%（1/25）、11.1%（7/63）、0（0/29）和0/5；阳性率最高出现在〉65岁组，为44.0%（11/25）；不同职业中其他组的阳性率最高，为4/10。猪囊尾蚴、刚地弓形虫抗体阳性率在性别、季节、年龄和职业分布上差异均无统计学意义（P〉0.05）。 结论 122例脑炎脑膜炎症候群患者血清猪囊尾蚴、刚地弓形虫抗体阳性率较高，临床诊断该症候群病原时应结合其寄生虫血清学检测结果，考虑感染寄生虫的可能性。

细粒棘球绦虫感染小鼠肝脏髓源抑制性细胞与调节性T细胞比例动态变化

目的分析细粒棘球蚴感染小鼠肝脏髓源抑制性细胞(MDSCs)和调节性T(Treg)细胞比例动态变化,探讨其可能的生物学意义。方法将30只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为感染组和对照组,每组15只。感染组每只小鼠腹腔注射细粒棘球绦虫原头节约2000个,对照组注射等体积生理盐水。感染后3、6、12个月(感染早、中、晚期)收集小鼠肝脏白细胞,采用流式细胞术检测其中MDSCs及其亚型M-MDSCs、PMN-MDSCs与Treg细胞比例。结果感染组小鼠感染后3、6、12个月肝脏白细胞中MDSCs比例分别为(1.61±0.36)%、(5.68±0.69)%和(16.18±0.69)%,对照组分别为(2.19±0.42)%、(0.99±0.07)%和(4.18±0.84)%,感染后6个月和12个月两组差异均有统计学意义(P均<0.01);感染组小鼠感染3、6、12个月后肝脏白细胞中M-MDSCs比例分别为(0.69±0.27)%、(5.30±0.72)%和(10.75±0.29)%,对照组分别为(0.42±0.24)%、(0.69±0.02)%和(2.12±0.13)%,感染后6个月和12个月两组差异均有统计学意义(P均<0.01);感染组小鼠感染后3、6、12个月肝脏白细胞中PMN-MDSCs比例分别为(0.93±0.23)%、(0.32±0.02)%和(5.14±1.03)%,对照组分别为(1.77±0.26)%、(0.28±0.05)%和(1.99±0.90)%,感染后3个月和12个月两组差异均有统计学意义(P均<0.05)。感染组小鼠感染后3、6、12个月肝脏白细胞中Treg细胞比例分别为(3.35±0.14)%、(6.24±0.38)%和(3.41±0.07)%,对照组分别为(3.48±0.46)%、(3.65±0.45)%和(3.12±0.12)%,感染后6个月和12个月两组差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论小鼠感染细粒棘球蚴6个月和12个月后,其肝脏白细胞中MDSCs与Treg细胞比例增加,前者比例变化更加明显,以M-MDSCs为主;以上提示M-MDSCs可能在小鼠感染细粒棘球蚴中后期发挥主要免疫抑制作用。

广西藤县人群华支睾吸虫感染调查及其分子鉴定

目的了解广西藤县人群华支睾吸虫的感染状况及其分子鉴定,为当地华支睾吸虫病的防控提供理论依据。方法2016年11月,在广西藤县采用分层整群随机抽样抽取天平镇和金鸡镇各1个自然村作为调查点。收集3岁以上常驻居民的粪便,用改良加藤厚涂片法(一粪三检)检测华支睾吸虫虫卵并计数。通过问卷调查收集被调查者社会人口学等相关信息。从镜检阳性样本中随机选取部分新鲜粪样提取DNA, PCR扩增华支睾吸虫内转录间隔区2 (ITS2),测序后在NCBI核酸数据库作比对分析。结果共调查400人,检出华支睾吸虫虫卵阳性208人,感染检出率为52.0%(208/400),感染者以轻度感染为主(69.2%, 144/208)。天平镇华支睾吸虫感染检出率为66.5%(133/200),高于金鸡镇的37.5%(75/200)(χ2=33.69, P <0.01)。男性感染检出率为58.7%(131/223),高于女性的43.5%(77/177)(χ2=9.18, P <0.01); 30～39岁组感染检出率最高,为63.8%(60/94);高中及以上学历人群感染检出率最高,为68.0%(17/25)。不同年龄组、教育程度人群感染检出率差异有统计学意义(χ2=37.1, 23.02; P <0.01)。PCR扩增出156 bp的华支睾吸虫特异性条带,其序列与越南岘港分离株ITS2 (GenBank登录号:MF319655)的一致性为100%。结论广西藤县人群华支睾吸虫感染检出率为52.0%,属于超重流行区;男性、青壮年是华支睾吸虫高感染人群。广西藤县的华支睾吸虫ITS2序列与越南岘港分离株的基因型一致。

改良加藤厚涂片法和PCR法检测华支睾吸虫感染的效果比较

目的比较改良加藤厚涂片法(Kato-Katz法)和PCR法对现场人群粪便样本中华支睾吸虫感染的检出率,为华支睾吸虫感染检测方法的选择提供依据。方法在2016年广西壮族自治区藤县人体华支睾吸虫感染流行病学调查的基础上,随机抽取133份粪便样本,-20℃保存。分别采用Kato-Katz法(1粪3检)和PCR法检测华支睾吸虫感染,比较两种方法对华支睾吸虫感染的检出率,采用Kappa分析评价两种检测方法结果的一致性。结果133份人群粪便样本中,华支睾吸虫感染总检出率为77.44%(103/133),其中Kato-Katz法检出率为57.14%(76/133),PCR法检出率为70.68%(93/133),PCR法检出率显著高于Kato-Katz法(χ^2=26.15,P<0.01)。76份Kato-Katz法阳性粪便样本中,88.16%(67/76)的样本PCR法扩增阳性;57份Kato-Katz法阴性样本中,47.37%(27/57)的样本PCR法扩增阳性。PCR法对每克粪便虫卵数(EPG)>1000的粪便样本中华支睾吸虫感染的检出率(94.74%,18/19)高于EPG<1000的样本(85.96%,49/57),但差异无统计学意义(χ^2=1.05,P=0.436)。两种方法检出率一致性一般(Kappa=0.73)。结论PCR法对人群华支睾吸虫感染的检出率显著高于Kato-Katz法。建议在华支睾吸虫感染度较轻的地区,采用Kato-Katz法结合PCR法进行检测,以提高检出率。

细粒棘球蚴感染小鼠髓源抑制性细胞与Th17细胞比例的变化

目的分析细粒棘球蚴感染小鼠体内髓源抑制性细胞(MDSCs)和Th17细胞比例的变化及意义。方法将20只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为感染组和对照组,每组10只。感染组每只小鼠腹腔注射细粒棘球绦虫原头节约2 000个,对照组注射等体积生理盐水。感染后8个月(感染晚期)收集感染组和对照组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞和腹腔细胞,采用流式细胞术检测小鼠MDSCs及其亚型(M-MDSCs、PMN-MDSCs)和Th17细胞比例,采用Pearson相关性分析MDSCs、M-MDSCs、PMN-MDSCs与Th17细胞比例的相关关系。结果感染组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞、腹腔细胞中MDSCs比例分别为(14.72±4.27)%、(57.04±6.78)%和(15.35±5.56)%,对照组分别为(8.84±2.12)%、(30.53±1.58)%和(1.74±0.63)%,感染组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);感染组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞、腹腔细胞中M-MDSCs比例分别为(1.29±0.24)%、(6.27±2.11)%、(2.14±0.94)%,对照组分别为(0.72±0.25)%、(2.11±1.27)%、(0.25±0.06)%,感染组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);感染组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞、腹腔细胞中PMN-MDSCs比例分别为(9.31±2.65)%、(46.72±5.67)%、(7.06±2.36)%,对照组分别为(7.07±3.20)%、(25.42±2.05)%、(1.08±0.40)%,感染组与对照组间外周血白细胞和腹腔细胞的PMN-MDSCs比例差异有统计学意义(P<0.05)。感染组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞、腹腔细胞中Th17细胞比例分别为(1.31±0.38)%、(1.85±0.77)%和(2.90±0.24)%,对照组分别为(0.59±0.07)%、(0.35±0.15)%和(0.41±0.12)%,感染组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,感染组小鼠脾脏、外周血和腹腔细胞中MDSCs与Th17细胞比例之间无相关关系(r=-0.354、-0.746、0.801,P>0.05),感染组小鼠脾脏M-MDSCs与Th17细胞比例呈负相关关系(r=-0.896,P<0.05)。结论在细粒棘球蚴感染小鼠8个月后MDSCs与Th17细胞比例均增加,感染组小鼠脾脏M-MDSCs与Th17细胞比例呈负相关关系。