游离脂肪酸致胰岛素抵抗的分子机制

胰岛素抵抗(IR)是与2型糖尿病(T2DM)、高血压、血脂紊乱等疾病有关的一种复杂的代谢紊乱性疾病,这些与IR相关的疾病均是心血管疾病的独立性危险因素。脂代谢紊乱对细胞具有脂毒性作用,会引起或加重IR,其典型表现是血浆甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)水平升高,其中血浆FFA升高是IR的独立致病因素。虽然FFA导致IR的具体机制还不完全清楚,但已证实FFA可通过内质网应激、氧化应激作用、凋亡和炎症作用等引发IR。本文概述了参与这些致病过程的相关分子及其作用机制,为FFA导致IR的致病机制研究提供理论依据,同时为临床治疗IR和预防T2DM提供参考。

高糖对原代人脐静脉内皮细胞的损伤作用及机制研究

目的观察高浓度葡萄糖对原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)的损伤作用,并探讨其损伤机制。方法分别用低浓度葡萄糖(LG组,5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖(HG组,35 mmol/L)培养基培养HUVECs 24、72、120 h,胆囊收缩素八肽(CCK-8)检测高糖对HUVECs存活率影响,荧光探针检测细胞活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)水平,蛋白免疫印迹检测Bax、Bcl-2、沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)和一氧化氮合酶(e NOS)的表达。结果 HG组处理72、120 h细胞存活率、Bcl-2均低于LG组,ROS水平、Bax和Bax/Bcl-2高于LG组,差异有统计学意义(P<0.05)。HG组处理HUVECs 24、72、120 h SIRT1和NO相对含量低于LG组,处理72、120 h e NOS低于LG组(P<0.05)。结论高糖可使HUVECs存活率下降,增强细胞内氧化应激反应,提高Bax/Bcl-2比值,可能与抑制SIRT1-e NOS通路使NO生成减少有关。

游离脂肪酸致胰岛素抵抗的相关分子机制研究进展

胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）是与2型糖尿病（T2DM）的发生紧密相关的一种代谢性疾病,T2DM是导致心脑血管疾病的独立危险因素,给个人、家庭和社会带来了沉重的负担。在导致IR的发病因素中,游离脂肪酸（free fatty acids,FFAs）被证实是与肥胖相关的IR的重要致病因素。因此了解FFAs导致IR的机制,并了解其中的重要分子机制,

感染Ad-HGF对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨高糖条件下感染携带肝细胞生长因子的重组腺病毒(Ad-HGF)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法将HUVECs分为低糖组(LG组,5.5 mmol/L)、高糖组(HG组,35 mmol/L)、腺病毒对照组(HG+Ad-GFP组)和实验组(HG+Ad-HGF组)。检测4组HUVECs增殖情况、细胞内活性氧(ROS)水平及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果 HG组、HG+Ad-GFP组HUVECs存活率低于LG组,HG+Ad-HGF组高于HG组(P<0.05,P<0.01)。HG组、HG+Ad-HGF组HUVECs内ROS水平高于LG组,但HG+Ad-HGF组低于HG组(P<0.05)。HG组、HG+Ad-GFP组Bax、Bax/Bcl-2高于LG组,Bcl-2低于LG组,但HG+Ad-HGF组Bax、Bax/Bcl-2低于HG组,Bcl-2高于HG组(P<0.05)。结论感染Ad-HGF可通过降低细胞内ROS水平和Bax/Bcl-2减少细胞凋亡,进而对高糖诱导的HUVECs起到保护作用。

SPK1调控人脐静脉内皮细胞SIRT1表达及细胞迁移的机制研究

目的探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPK1)调控沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)迁移能力的机制。方法用病毒感染复数(MOI)=20的p LKO.1-sh SPK1-GFP干涉慢病毒(sh SPK1组)和p PIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒(GFP-SC组)感染HUVECs,48 h后提取细胞蛋白并用蛋白免疫印迹法检测ERK、P38 MAPK及AKT磷酸化水平。分别用PD98059、SB203580及Wortmannin处理HUVECs 1 h,检测ERK、P38 MAPK及AKT信号表达及SIRT1蛋白表达情况。取抑制剂干预后的细胞进行Transwell小室迁移实验,检测细胞迁移能力。结果sh SPK1组ERK、P38 MAPK及AKT的磷酸化水平均低于GFP-SC组(P<0.05,P<0.01)。PD98059、SB203580及Wortmannin组ERK、P38 MAPK、AKT磷酸化水平及SIRT1蛋白表达水平低于对照组,HUVECs的迁移能力较对照组弱(P<0.01)。结论 SPK1可以通过ERK、P38 MAPK及AKT通路调控HUVECs SIRT1的表达及迁移能力。

鞘氨醇激酶1调控沉默信息调节因子1表达的研究

目的探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPK1)与沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达的关系。方法用病毒感染复数(MOI)=20 p LKO.1-sh SPK1-GFP干涉慢病毒(sh SPK1组)及p PIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒(GFP-SC组)感染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),48 h后提取细胞RNA及蛋白,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)测定SIRT1基因及蛋白表达水平。用MOI=20 p HIV7-U6-sh SIRT1-RFP干涉慢病毒(sh SIRT1组)及p HIV7-U6-Scramble-RFP对照慢病毒(RFP-SC组)感染HUVECs,48 h后提取细胞RNA并用RT-PCR检测细胞SPK1基因表达水平。用100 nmol 1-磷酸鞘氨醇(S1P)处理HUVECs,分别在0.5、2、24及36 h提取细胞RNA,24、48及72 h提取细胞蛋白,检测SIRT1基因及蛋白表达水平。用100 nmol S1P处理干涉过SIRT1的HUVECs检测细胞的增殖、迁移及体外管状结构形成能力。结果 sh SPK1组SIRT1基因和蛋白表达水平低于GFP-SC组(P<0.01)。sh SIRT1组SPK1基因表达水平与RFP-SC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。100 nmol S1P处理HUVECs不同时间SIRT1基因及蛋白表达水平高于未处理组,HUVECs增殖能力高于sh SIRT1组(P<0.05,P<0.01)。sh SIRT1组HUVECs迁移率低于RFP-SC组,S1P处理组高于RFP-SC、sh SIRT1组(P<0.05)。sh SIRT1组HUVECs体外管状结构形成能力低于RFP-SC组,S1P处理组高于sh SIRT1组(P<0.05)。结论 SPK1可以正向调控SIRT1表达并对HUVECs功能产生影响。

基于肝细胞生长因子的基因疗法在缺血性疾病中的应用研究进展

随着分子生物学的不断发展,基因治疗已被作为治疗各种心血管疾病新的策略之一,在这一领域用基因疗法主要是针对局部缺血性疾病如心肌梗死、心绞痛与外周动脉疾病等。该类患者大部分是由于患者的解剖特点和动脉闭塞症使患者不适合手术或经皮血管重建。因此,这类疾病往往疗效较差。然而针对严重的心脏缺血和关键的肢体缺血尚无最佳的治疗药物。

重组腺病毒对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成的影响及机制

目的观察感染携带肝细胞生长因子的重组腺病毒(Ad-HGF)对高糖诱导的原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)一氧化氮(NO)生成的影响,并探究其机制。方法将HUVECs分为低糖组(LG组)、高糖组(HG组)、腺病毒对照组(HG+Ad-GFP组)和实验组(HG+Ad-HGF组),感染48 h后,采用NO荧光探针检测细胞内NO水平,蛋白免疫印迹法(Westren Blot)分别检测各组细胞鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPHK1)、沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial ntric oxide synthase,e NOS)蛋白表达。结果 HG组HUVECs细胞内NO水平及SIRT1和e NOS蛋白表达水平低于LG组,HG+Ad-HGF组高于HG组(P<0.05),但4组间SPHK1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Ad-HGF可通过激活SIRT1-e NOS-NO通路保护HUVECs免受高糖损伤。

临床常见肠杆菌科细菌对替加环素耐药机制研究进展

多耐药或碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)的临床分离株呈现出逐年递增趋势,给临床抗菌药物的选用提出了严峻的挑战。随着大多数临床常用抗菌药物敏感性下降,替加环素在治疗多耐药肠杆菌科细菌感染疾病中发挥了至关重要的作用,并被临床当作治疗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的最后可选抗菌药物之一。但近年来,替加环素在CRE临床分离株中逐渐表现出不同程度的耐药性,相关研究揭示其耐药机制与外排泵的各种调控途径表达上调有关,甚至相关耐药基因可能由质粒介导传播。从“同一个世界,同一个健康”的角度出发,迫切需要全面阐明替加环素的多种交互耐药机制,并精准采取措施来监测和防控其耐药性的进一步传播。

IL-6、PCT、CRP对老年人细菌性血流感染的诊断价值研究

目的通过分析白介素6(IL-6)、降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)水平,探讨3者在老年人细菌性血流感染(BSI)中的诊断价值。方法选取2022年11月至2023年11月本院收治的204例60岁及以上患者为研究对象,其中116例血培养阳性患者为BSI组,88例血培养阴性患者为对照组,另根据血培养结果将BSI组分为革兰阳性菌(G+菌)感染组和革兰阴性菌(G-菌)感染组。采用SPSS 25.0软件比较BSI组与对照组、G+菌感染组与G-菌感染组之间IL-6、PCT和CRP水平;采用受试者工作特征曲线(ROC)评价3者单独或联合检测对BSI的诊断效能。结果BSI组IL-6、PCT、CRP水平均高于对照组(P<0.001);G-菌感染组IL-6、PCT水平明显高于G+菌组(P<0.05);单项检测ROC曲线下面积PCT>IL-6>CRP,3者联合检测ROC曲线下面积高于单项检测,且特异性明显优于单项检测,为97.1%,灵敏度为62.1%。结论IL-6、PCT、CRP 3者联合检测对老年人细菌性血流感染有较高的诊断价值,IL-6、PCT可有效鉴别G+菌与G-菌感染。

将内皮祖细胞纳入心血管疾病治疗方案的争论与探讨

内皮祖细胞(EPCs)对受损血管的修复和新血管的形成至关重要。机体缺血或血管损伤时,EPCs可直接分化为成熟的内皮细胞(ECs)或分泌多种细胞因子促进血管的修复和新生。心血管疾病(CVD)的发生与体内EPCs的数量和功能密切相关,有建议认为可将其作为CVD的临床生物标志物。然而,目前关于EPCs的定义及其鉴定方法尚未标准化,因此关于将其作为CVD标志物值得探讨。

胃癌患者外周血内皮祖细胞检测及临床意义

目的探讨外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)水平与胃癌临床指标的相关性。方法 55例胃癌患者为胃癌组,44例慢性胃炎患者为胃炎组,46例体检健康者为对照组。采用流式细胞仪计数3组外周血EPCs数量,分析外周血EPCs数量与胃癌患者年龄、性别、TNM分期及肿瘤分化程度等临床指标的相关性。结果胃癌组患者外周血EPCs数量[(20.20±13.90)个/mL]明显高于胃炎组[(6.00±2.80)个/mL]和对照组[(4.10±2.60)个/mL](P<0.01),胃炎组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);胃癌组中,年龄≤57岁患者外周血EPCs数量[(24.00±16.70)个/mL]高于>57岁患者[(15.00±9.40)个/mL](P<0.05),TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者外周血EPC数量[(29.36±14.48)、(33.33±18.92)个/mL]高于Ⅰ、Ⅱ期患者[(12.67±6.70)、(15.17±9.24)个/mL](P<0.01),低分化胃癌患者外周血EPC数量[(27.72±15.02)个/mL]高于中、高分化患者[(14.63±12.07)、(13.73±8.11)个/mL](P<0.01);男性患者外周血EPCs数量[(19.00±8.40)个/mL]与女性[(21.00±13.60)个/mL]比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论胃癌患者外周血EPCs数量增加,与年龄和疾病进展相关,可作为胃癌临床诊断、分期及预后判断的生物标志物。

携带低氧诱导因子-1α及角质细胞生长因子的减毒沙门菌TPHK的构建及其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达

目的构建携带低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)的减毒沙门菌TPHK,并检测其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达。方法从质粒p IRES-KGF中PCR扩增获得KGF基因片段,经双酶切回收后,与p IRES-HIF质粒进行连接,获得双基因重组质粒p IRES-HIF-KGF,Ca Cl2法转化减毒沙门菌Ty21a,获得重组菌株TPHK。将TPHK菌液灌胃给予大鼠,10~9 cfu/(只·d),饲养7 d后,置模拟海拔6 000 m的高原低氧舱,舱内连续饲养7 d,采集大鼠胃及小肠组织,ELISA法检测HIF-1α及KGF的表达水平。结果重组质粒p IRES-HIF-KGF及重组菌株TPHK经双酶切及测序鉴定证明构建正确。给予TPHK菌液后可明显提高低氧应激大鼠胃及肠组织中HIF-1α及KGF的表达水平(P<0.001)。结论成功构建了携带HIF-1α及KGF的减毒沙门菌TPHK,且其可提高HIF-1α及KGF在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达。

传统带教方式联合电子学习法在临床微生物轮转学员培训中的应用

目的 探讨传统带教方式联合电子学习法在临床微生物实验室轮转学员培训中的应用价值.方法 选取2021年1月-2023年8月检验科微生物组轮转学员共40名为研究对象,根据学历水平分层后随机分配到试验组和对照组,每组20名,分别进行为期2个月的教学;对照组采用传统带教方式,试验组采用传统带教方式联合电子学习法.教学开始前对两组医师/技师进行理论摸底考试,教学结束后进行实践技能考核,比较两组考核成绩.结果 两组在教学前理论成绩差异无统计学意义;教学后,两组间病原微生物培养操作考核成绩无统计学意义,试验组的涂片染色镜检、鉴定药敏综合考核的成绩均高于对照组(P<0.05).结论 传统带教方式联合电子学习法能提高微生物轮转学员培训的教学效果.