水蛭炮制前后质量分析

目的研究水蛭炮制前后的质量差异,建立其质量控制体系。方法参照2015版《中国药典》对产自全国主要产区的水蛭及烫水蛭进行质量标准研究,测定了其中的水分、灰分、酸不溶性灰分、p H值、抗凝活性,进行了TLC鉴别、HPLC指纹图谱及特征图谱的探索研究。结果水蛭的含水量为12. 49%~15. 29%(平均13. 71%),烫水蛭的含水量为6. 03%~8. 99%(平均7. 82%);水蛭的总灰分为1. 69%~5. 11%(平均3. 28%),烫水蛭的总灰分为2. 30%~6. 94%(平均4. 30%);水蛭的酸不溶性灰分为0. 61%~1. 62%(平均0. 97%),烫水蛭的酸不溶性灰分为0. 90%~1. 93%之间(平均1. 46%);水蛭的p H值4. 89~6. 44 (平均5. 60),烫水蛭的p H为4. 55~6. 23 (平均5. 42)。同时,TLC斑点清晰,HPLC指纹图谱特征峰明确。结论该方法操作简单,准确可靠,重复性好,可用于水蛭及烫水蛭的质量控制。

基于多成分测定及指纹图谱评价不同产地栀子质量

建立超高效液相色谱法测定栀子中7种成分的方法,同时构建栀子指纹图谱识别模式,并结合多元统计分析评价不同产地栀子质量。采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,流速0.4 m L·min^-1,梯度洗脱,多波长检测进行含量测定和指纹图谱研究。含量测定结果显示各产地栀子7种成分总含量为浙江>福建>江西>四川。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2012版)进行相似度评价,样品的相似度均大于0.95。建立了32批栀子药材共有图谱并标定了19个共有峰,经聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA),将不同产地栀子样品分成3组,并进一步通过偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)筛选出栀子苷、西红花苷Ⅰ等5个差异成分。该研究所建立的栀子UPLC多成分含量测定和指纹图谱的方法准确可行,可作为不同产地栀子质量评价的一种手段。

栀子姜炙工艺及姜炙前后化学成分变化研究

优选姜栀子炮制工艺,建立栀子姜炙前后的超高效液相(UPLC)指纹图谱,并同时测定京尼平苷酸、绿原酸、京尼平龙胆双糖苷、栀子苷、芦丁、西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ7种成分含量。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,流速0.4 m L·min^-1,梯度洗脱,用相似度评价、主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)进行数据处理与分析。结果显示,样品中标定了20个共有峰,相似度结果均大于0.97。主成分分析和偏最小二法乘判别分析法结果表明栀子和姜栀子在化学成分组成和含量上有差异,且可明显区分,并揭示了贡献最大的9个潜在标志性色谱峰。含量测定结果表明,栀子经姜炙后绿原酸、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的含量降低,其余4种成分含量增加。该实验所优选的姜栀子制备工艺稳定可行,建立的UPLC指纹图谱及含量测定方法能够有效地区分栀子和姜栀子。

当归不同炮制品的UPLC指纹图谱与多成分含量测定研究

选择来源于甘肃驮乡、岷县、渭源3个产地的10批当归为研究对象,通过规范的炮制方法分别炮制成生当归、酒当归、土当归。采用UPLC建立当归3种炮制品的指纹图谱,并对其中9种酚酸及苯酞类成分进行指认。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行相似度分析,结果显示当归同一炮制品样品色谱峰基本相似,相似度均大于0. 950;不同炮制品与其对照图谱之间差别不明显,相似度亦均大于0. 950。在采用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析,寻求组间差异性成分的基础上,采用开发的改良距离系数法,可有效的通过指纹图谱相似度对生当归、酒当归、土当归进行区分。同时采用UPLC建立了当归9种酚酸及苯酞类成分含量测定方法,并进行了不同炮制品之间的比较。实验结果显示与生当归相比,各成分均有变化,其中酒当归中阿魏酸松柏酯及藁本内酯含量明显上升;当归土炒之后阿魏酸松柏酯明显上升。该实验建立的方法可有效地对当归不同炮制品进行区分,同时对其中主要成分进行含量测定。

基于传统煎药工艺的黄连饮片标准汤剂质量研究

为研究黄连饮片标准汤剂的质量评价方法,该实验以标准化工艺制备得到15批黄连饮片标准汤剂。选用性状、pH、指标性成分含量、指纹图谱相似度、成分转移率及干膏得率等作为黄连饮片标准汤剂质量评价参数。对标准汤剂HPLC指纹图谱进行相似度评价和聚类分析,并应用数学模型研究标准汤剂中干膏得率、小檗碱含量、小檗碱转移率与饮片中小檗碱含量之间的相关性。结果表明15批黄连饮片标准汤剂指纹图谱相似度均大于0.99,聚类分析将4个产地的黄连饮片标准汤剂归为3类,与含量测定结果一致,说明不同产地的黄连饮片存在质量差异;建立的3个线性回归数学模型R2均大于0.9,具有极显著性差异,且通过3批数据的验证发现模型具有较好的准确性,因此该模型可预测不同黄连饮片制备所得标准汤剂的质量。该实验建立的黄连饮片标准汤剂制备工艺极大限度地保存了传统工艺的完整性,建立的质量评价方法可较为全面考察标准汤剂的质量,可为含黄连饮片的水提制剂的相关研究提供示范。

基于荧光定量PCR技术的当归不同炮制品中大肠埃希菌数量测定方法开发及比较研究

目的对当归不同炮制品中大肠埃希菌变化进行定量分析。方法建立荧光定量PCR方法,对当归不同炮制品、不同产地、不同收集企业、不同储藏时间的大肠埃希菌进行定量分析。结果不同炮制品中大肠埃希菌数量变化为生当归>土炒当归>酒当归;在不同产地的当归中以甘肃岷县地区所含的大肠埃希菌的数量最少;与零售企业相比,生产销售企业的当归和酒当归中大肠埃希菌的数量较少;不同储藏时间对当归和酒当归中大肠埃希菌数量有一定影响,随储藏时间的增加,大肠埃希菌的数量也在增加。对部分代表性样品进行平板计数法与荧光定量PCR法比较时发现,平板计数法结果多呈阴性,荧光定量PCR结果均呈阳性。结论所建立的荧光定量PCR法特异性、灵敏度、可靠性以及报告周期均优于平板计数法,可为当归不同炮制品中大肠埃希菌的快速、准确定量检测提供有效手段。

基于实时荧光定量PCR技术的当归不同炮制品中金黄色葡萄球菌含量测定方法的开发及比较

目的:对当归不同炮制品中金黄色葡萄球菌的变化情况进行定量分析。方法:建立了实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR),对不同产地、不同收集企业、不同储藏时间当归饮片中金黄色葡萄球菌进行定量分析。荧光定量反应体系为SYBR Premix Ex Taq Ⅱ10μL,正向引物、反向引物(10μmol·L-1)各0.8μL,模板/基因组DNA 1μL,双蒸水7.4μL。荧光定量反应条件为①扩增曲线:94℃预变性30 s,94℃变性10 s,60℃退火12 s,72℃延伸30 s,循环45次,72℃单点检测信号;②熔解曲线:72℃开始检测,以0.5℃为台阶温度停留15 s采集荧光。根据Real-time PCR的测定结果,分别从生当归、酒当归和土炒当归中选择具有代表性的样品进行平板计数法测定,并与Real-time PCR检测结果进行比较。结果:不同炮制品中金黄色葡萄球菌含量排序为生当归>土炒当归>酒当归;在不同产地的当归饮片中均以甘肃渭源地区样品所含的金黄色葡萄球菌含量为最低;与零售企业相比,生产销售企业的生当归和酒当归中金黄色葡萄球菌含量较低;不同储藏时间对生当归和酒当归中金黄色葡萄球菌含量有一定的影响,随储藏时间的增加,金黄色葡萄球菌的含量增加。对部分代表性样品进行检测时发现,平板计数法检测结果数量级较Real-time PCR低3~4个数量级。结论:建立的Real-time PCR的特异性、灵敏度、准确性以及报告周期均优于平板计数法,可为当归不同炮制品中金黄色葡萄球菌的快速、准确定量检测提供有效技术手段。