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基于CRISPR/Cas12a的室温稳定鼠疫耶尔森氏菌检测体系的建立
被引量:
1
1
作者
任一帆
吴耿珊
+6 位作者
王桐
张源
曹诗洋
谭亚芳
陈红艳
郭晓
杜宗敏
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期419-425,共7页
目的筛选并优化冻干保护剂组合,建立可室温稳定储存的、不影响试剂检测灵敏度的Cas12a鼠疫菌核酸检测冻干体系,为其应用于动物鼠疫监测的现场快速检测奠定基础。方法以鼠疫耶尔森氏菌pla基因为靶基因,选择9种常用冻干保护剂加入核酸检...
目的筛选并优化冻干保护剂组合,建立可室温稳定储存的、不影响试剂检测灵敏度的Cas12a鼠疫菌核酸检测冻干体系,为其应用于动物鼠疫监测的现场快速检测奠定基础。方法以鼠疫耶尔森氏菌pla基因为靶基因,选择9种常用冻干保护剂加入核酸检测试剂中,筛选有明显保护效果的4种保护剂进行优化。按照正交实验设计原则设计保护剂组合,通过37℃加速破坏实验及26℃室温稳定性实验对复合保护剂进行保护效果和灵敏度评价。结果加入蔗糖、山梨醇和海藻糖3种保护剂的冻干检测体系可在37℃稳定存放2周。室温下存放3个月后体系检测信号强度与37℃加速破坏1周时基本相当,同时检测方法的灵敏度依然能达到10-5 ng/μL,说明Cas12a检测试剂加入筛选得到的保护剂冻干后,可在室温下稳定保存至少6个月。结论本研究构建的室温稳定CRISPR/Cas12a鼠疫菌检测体系可在室温下稳定存放至少半年,能够满足鼠疫菌现场快速检测中对试剂稳定性的需求。同时,本研究获得的复合保护剂组分对构建其它室温稳定CRISPR/Cas12a核酸检测体系具有重要参考价值。
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关键词
稳定性
鼠疫耶尔森氏菌
Cas12a
冻干保护剂
核酸检测
下载PDF
职称材料
鼠疫耶尔森菌小肽基因sORF34缺失株毒力及短期免疫保护效果评价
被引量:
1
2
作者
郭晓
曹诗洋
+6 位作者
谭亚芳
周亚洲
陈红艳
任一帆
王艳
杨瑞馥
杜宗敏
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期757-763,共7页
目的探索小肽基因34(sORF34)缺失对鼠疫耶尔森菌毒力影响,并评价sORF34缺失株免疫保护活性。方法基于鼠疫耶尔森菌201株和鼠疫耶尔森菌EV76疫苗株利用λ-Red一步法构建小肽基因缺失株。比较鼠疫小肽基因缺失株和亲本株之间的毒力差别,...
目的探索小肽基因34(sORF34)缺失对鼠疫耶尔森菌毒力影响,并评价sORF34缺失株免疫保护活性。方法基于鼠疫耶尔森菌201株和鼠疫耶尔森菌EV76疫苗株利用λ-Red一步法构建小肽基因缺失株。比较鼠疫小肽基因缺失株和亲本株之间的毒力差别,并采用皮下免疫方式对小鼠进行免疫,与EV76疫苗株比较,评价体液免疫、保护率等方面的差异。结果PCR扩增结果证实,小肽基因缺失株构建成功。通过皮下LD_(50)测定、生存曲线测定,表明小肽基因缺失株较亲本株毒力下降。鼠疫201ΔsORF34和EV76ΔsORF34皮下免疫后可刺激机体产生抗F1-IgG,其中鼠疫201ΔsORF34免疫组抗体滴度与EV76疫苗株免疫组差异无统计学意义(P>0.05),EV76ΔsORF34免疫组较EV76疫苗株免疫组抗体滴度低;鼠疫EV76ΔsORF34株可刺激机体产生低滴度抗LcrV-IgG,而EV76和201ΔsORF34株不能刺激机体产生抗LcrV-IgG。初免后42 d使用致死剂量鼠疫201株进行皮下攻毒和滴鼻攻毒,3组保护率差异无统计学意义(P>0.05)。结论小肽基因缺失株经皮下途径感染BALB/c小鼠的毒力下降,鼠疫EV76ΔsORF34株较EV76疫苗株残存毒力进一步下降,但保护率差异无统计学意义(P>0.05),EV76ΔsORF34株有作为鼠疫减毒活疫苗候选株的潜力。
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关键词
鼠疫耶尔森菌
小肽
毒力
疫苗
下载PDF
职称材料
基因武器如何影响未来战争
3
作者
曹诗洋
《党课》
2017年第24期76-79,共4页
据新华网报道,10月30日,俄罗斯总统普京亲口证实,有人在有目的地采集俄罗斯人的生物样本资料。此言一出,即遭爆炸性传播。俄媒随即报道,美国空军在一份生物样本采购招标中将目标锁定为俄罗斯人。有俄专家警告.俄罗斯民众的生物样...
据新华网报道,10月30日,俄罗斯总统普京亲口证实,有人在有目的地采集俄罗斯人的生物样本资料。此言一出,即遭爆炸性传播。俄媒随即报道,美国空军在一份生物样本采购招标中将目标锁定为俄罗斯人。有俄专家警告.俄罗斯民众的生物样本未来或将被用于制造细菌武器,应监控此类收集活动。
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关键词
未来战争
基因武器
俄罗斯总统
俄罗斯人
采购招标
美国空军
细菌武器
新华网
原文传递
题名
基于CRISPR/Cas12a的室温稳定鼠疫耶尔森氏菌检测体系的建立
被引量:
1
1
作者
任一帆
吴耿珊
王桐
张源
曹诗洋
谭亚芳
陈红艳
郭晓
杜宗敏
机构
军事医学研究院微生物流行病研究所
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期419-425,共7页
基金
国家自然科学基金(No.32070136)。
文摘
目的筛选并优化冻干保护剂组合,建立可室温稳定储存的、不影响试剂检测灵敏度的Cas12a鼠疫菌核酸检测冻干体系,为其应用于动物鼠疫监测的现场快速检测奠定基础。方法以鼠疫耶尔森氏菌pla基因为靶基因,选择9种常用冻干保护剂加入核酸检测试剂中,筛选有明显保护效果的4种保护剂进行优化。按照正交实验设计原则设计保护剂组合,通过37℃加速破坏实验及26℃室温稳定性实验对复合保护剂进行保护效果和灵敏度评价。结果加入蔗糖、山梨醇和海藻糖3种保护剂的冻干检测体系可在37℃稳定存放2周。室温下存放3个月后体系检测信号强度与37℃加速破坏1周时基本相当,同时检测方法的灵敏度依然能达到10-5 ng/μL,说明Cas12a检测试剂加入筛选得到的保护剂冻干后,可在室温下稳定保存至少6个月。结论本研究构建的室温稳定CRISPR/Cas12a鼠疫菌检测体系可在室温下稳定存放至少半年,能够满足鼠疫菌现场快速检测中对试剂稳定性的需求。同时,本研究获得的复合保护剂组分对构建其它室温稳定CRISPR/Cas12a核酸检测体系具有重要参考价值。
关键词
稳定性
鼠疫耶尔森氏菌
Cas12a
冻干保护剂
核酸检测
Keywords
stability
Yersinia pestis
Cas12a
lyophilization protectant
nucleic detection
分类号
R378.6 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
鼠疫耶尔森菌小肽基因sORF34缺失株毒力及短期免疫保护效果评价
被引量:
1
2
作者
郭晓
曹诗洋
谭亚芳
周亚洲
陈红艳
任一帆
王艳
杨瑞馥
杜宗敏
机构
军事医学研究院微生物流行病研究所
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第9期757-763,共7页
基金
国家自然科学基金(No.32070136)。
文摘
目的探索小肽基因34(sORF34)缺失对鼠疫耶尔森菌毒力影响,并评价sORF34缺失株免疫保护活性。方法基于鼠疫耶尔森菌201株和鼠疫耶尔森菌EV76疫苗株利用λ-Red一步法构建小肽基因缺失株。比较鼠疫小肽基因缺失株和亲本株之间的毒力差别,并采用皮下免疫方式对小鼠进行免疫,与EV76疫苗株比较,评价体液免疫、保护率等方面的差异。结果PCR扩增结果证实,小肽基因缺失株构建成功。通过皮下LD_(50)测定、生存曲线测定,表明小肽基因缺失株较亲本株毒力下降。鼠疫201ΔsORF34和EV76ΔsORF34皮下免疫后可刺激机体产生抗F1-IgG,其中鼠疫201ΔsORF34免疫组抗体滴度与EV76疫苗株免疫组差异无统计学意义(P>0.05),EV76ΔsORF34免疫组较EV76疫苗株免疫组抗体滴度低;鼠疫EV76ΔsORF34株可刺激机体产生低滴度抗LcrV-IgG,而EV76和201ΔsORF34株不能刺激机体产生抗LcrV-IgG。初免后42 d使用致死剂量鼠疫201株进行皮下攻毒和滴鼻攻毒,3组保护率差异无统计学意义(P>0.05)。结论小肽基因缺失株经皮下途径感染BALB/c小鼠的毒力下降,鼠疫EV76ΔsORF34株较EV76疫苗株残存毒力进一步下降,但保护率差异无统计学意义(P>0.05),EV76ΔsORF34株有作为鼠疫减毒活疫苗候选株的潜力。
关键词
鼠疫耶尔森菌
小肽
毒力
疫苗
Keywords
Yersinia pestis
SEPs
toxicity
vaccine
分类号
R378.6 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
基因武器如何影响未来战争
3
作者
曹诗洋
出处
《党课》
2017年第24期76-79,共4页
文摘
据新华网报道,10月30日,俄罗斯总统普京亲口证实,有人在有目的地采集俄罗斯人的生物样本资料。此言一出,即遭爆炸性传播。俄媒随即报道,美国空军在一份生物样本采购招标中将目标锁定为俄罗斯人。有俄专家警告.俄罗斯民众的生物样本未来或将被用于制造细菌武器,应监控此类收集活动。
关键词
未来战争
基因武器
俄罗斯总统
俄罗斯人
采购招标
美国空军
细菌武器
新华网
分类号
E81 [军事—战略学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于CRISPR/Cas12a的室温稳定鼠疫耶尔森氏菌检测体系的建立
任一帆
吴耿珊
王桐
张源
曹诗洋
谭亚芳
陈红艳
郭晓
杜宗敏
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
下载PDF
职称材料
2
鼠疫耶尔森菌小肽基因sORF34缺失株毒力及短期免疫保护效果评价
郭晓
曹诗洋
谭亚芳
周亚洲
陈红艳
任一帆
王艳
杨瑞馥
杜宗敏
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
下载PDF
职称材料
3
基因武器如何影响未来战争
曹诗洋
《党课》
2017
0
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已选择
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参考文献
引证文献
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