免疫分析技术在四环素类抗生素残留检测中的应用

四环素类抗生素一类广谱性抗生素,主要用于治疗各种感染性疾病,但长期的违规滥用,导致其在动物源性食品以及环境中大量残留,严重威胁人类健康。因此,急需建立简单、灵敏的快速检测方法。免疫分析技术因其特异性强、灵敏度高等优势已成为快速检测方法研究的热点。本文主要综述了已在四环素类抗生素残留检测中应用的放射性免疫、酶联免疫、胶体金免疫层析以及电化学免疫传感器免疫分析方法,并对其发展方向进行展望。

土霉素完全抗原的制备及ELISA检测方法的建立

为制备土霉素(Oxytetracycline,OTC)完全抗原,获得免疫学特性良好的土霉素鼠源多抗血清并建立OTC免疫学检测方法,采用重氮化法在OTC分子上引入羧基,进而利用改进碳二亚胺法将其与载体蛋白偶联制备完全抗原,通过红外扫描、紫外扫描和凝胶电泳鉴定其偶联效果,然后将完全抗原免疫BLAB/c小鼠获得多抗血清(pAb)并对其免疫学特性进行鉴定,通过优化条件建立OTC间接竞争ELISA检测方法。结果表明,偶联效果良好,免疫的4只小鼠多抗血清效价均达到1 12 800;4只小鼠多抗血清均有抑制效果,其中2号小鼠产生的多抗血清效果最佳,基于该多抗血清建立的OTC间接竞争ELISA检测方法半数抑制浓度(IC 50)为32.92 ng/mL,检测限(LOD)为1.3 ng/mL,牛奶样品中添加回收率在84.70%~87.45%,与金霉素、四环素的交叉反应率分别为5.27%,4.10%,与其他竞争物交叉反应率<0.4%。该试验成功合成了OTC完全抗原,获得了免疫学特性良好的OTC多抗血清,并建立了OTC免疫学检测方法。

免疫分析技术在草甘膦残留检测中的应用

草甘膦作为一种高效除草剂,越来越广泛地被应用于农业生产。与此同时,草甘膦的残留问题及其潜在危害也逐渐引起人们密切关注。近年来,针对草甘膦残留的检测方法已成为研究热点,其中荧光免疫、酶联免疫吸附、免疫传感器等免疫分析方法因具有灵敏、特异、快速的特点而发展迅速。本文主要对草甘膦残留的免疫分析技术进行综述,为草甘膦残留快速检测深入研究提供参考。

免疫分析技术在“新型瘦肉精”残留检测中的应用

近年来,一些"新型瘦肉精"药物被非法用于畜禽养殖,如苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定等,该类药物添加在饲料和动物饮水中能有效促进禽畜生长,提高瘦肉率,降低养殖成本,但其在肉制品中的残留会对人体产生蓄积毒性。免疫分析技术利用高亲和力抗体对抗原进行特异识别,灵敏度高,是目前快速检测方法研究的热点之一,已在"传统瘦肉精"的快速检测中成熟应用,但其在"新型瘦肉精"快速检测中的应用仍处于起步阶段。该文对免疫分析技术在"新型瘦肉精"残留检测中的应用进行综述,并对其未来发展方向进行展望。

强力霉素人工抗原的制备及鼠源多抗的ELISA鉴定

为制备强力霉素(Doxycycline,DC)人工抗原并获得免疫学特性良好的DC鼠源多抗血清。本试验采用琥珀酸酣法在DC分子上引入羧基基团,然后采用改进碳二亚胺法(EDC)将其与载体蛋白偶联制备人工抗原,经紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其偶联效果,以30μg/只的剂量(人工抗原)免疫4只BALB/c小鼠,并对所获鼠源多抗血清采用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其免疫学特性。结果表明,人工抗原偶联效果良好,免疫的4只小鼠多抗血清效价均达到1:12800,且均有抑制效果,其中4号小鼠产生的多抗血清效果最佳,半数抑制浓度(IC50)为24.75ng/mL,与土霉素、金霉素、四环素的交叉反应率分别为3.4%、3.8%、3.0%,与其他兽药及载体蛋白的交叉反应率均小于0.3%,特异性良好。本试验成功合成DC人工抗原并获得免疫学特性良好的DC鼠源多抗血清,为后期单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立奠定良好基础。

食品中“新型瘦肉精”的检测方法研究进展

对苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定、巴氯芬等常见"新型瘦肉精"药物的检测方法进行综述,主要有高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、毛细管电泳法等仪器检测方法以及酶联免疫法、免疫层析法、电化学发光免疫法等免疫分析方法,为保障我国动物性食品安全提供更好的技术支撑。

大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子(BBI)单克隆抗体(mAb),以50μg/只的免疫剂量将BBI免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA和间接竞争ELISA试验鉴定多抗血清效价和敏感性。选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到分泌BBI m Ab的稳定杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备BBI mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明:1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为868.58 ng/mL。经细胞融合筛选得到5株杂交瘤细胞,其中3B7-B10 mAb效价达到1∶4.096×10^5以上,亚型为IgG1型,IC50为83.07 ng/mL,具有亲和力较高且特异性强的优点,表明所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立大豆及其制品中BBI的免疫学检测方法提供良好的抗体基础。

盐酸可乐定人工抗原的合成及鼠源多抗血清ELISA鉴定

目的:获得敏感性高,特异性强的新型瘦肉精盐酸可乐定(Clonidine hydrochloride,CLO)鼠源多抗血清。方法:以CLO的衍生物盐酸阿可乐定(Apraclonidine hydrochloride,ACLO)为半抗原,采用戊二醛法将ACLO分别与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联,合成免疫抗原CLO-BSA和包被抗原CLO-OVA。采用紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其偶联效果后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清。利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其免疫学特性。结果:合成的人工抗原免疫效果较好,所获小鼠多抗血清效价均达到1∶12800以上,其中3号小鼠敏感性最好,半数抑制质量浓度(IC_(50))为82.75 ng/mL,与其他几种常见的瘦肉精类药物的交叉反应率均小于0.9%,特异性良好。结论:通过戊二醛法成功合成了高免疫原性的CLO人工抗原,并获得敏感性高,特异性强的CLO鼠源多抗血清。

草甘膦的动物毒性及其检测研究进展

草甘膦具有低毒、高效的特点,目前已成为全球生产及使用量较大的除草剂之一,但其在环境中的大量残留容易通过食物链对动物及人体产生潜在毒性。近年来,随着人们对转基因作物的关注,草甘膦的毒性作用逐渐成为研究热点,草甘膦的检测研究也备受重视。本文对草甘膦的动物毒性作用研究及其检测研究进展进行综述,以期为草甘膦的深入研究提供参考。

草甘膦农药残留检测方法研究进展

草甘膦农药因具有低毒、高效的特点,目前已成为全球生产及使用量最大的除草剂之一,但其潜在毒性近年来也引起了人们的广泛关注,并且对于草甘膦残留的检测研究也备受重视。对草甘膦残留的检测方法及研究进展进行综述,主要探讨了化学分析法、酶联免疫吸附测定法、分光光度法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、电化学方法在草甘膦残留检测中的应用,为草甘膦残留检测深入研究提供参考。

巴氯芬人工抗原的合成及其鼠源多克隆抗体的制备

【目的】合成巴氯芬(baclofen,BA)人工抗原并制备其多克隆抗体,为巴氯芬免疫学快速检测方法的建立奠定基础。【方法】采用碳二亚胺(EDC)法将BA分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,合成免疫抗原BA-BSA和包被抗原BA-OVA,通过紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定其偶联效果。将免疫抗原BA-BSA免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA、间接竞争ELISA及交叉反应试验分别对所获多克隆抗体的效价、敏感性、特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果表明人工抗原偶联效果良好。ELISA结果表明,多克隆抗体的效价达到1∶25600,半数抑制浓度(IC50)为22.33 ng/mL,且与巴氯芬结构类似物及其他瘦肉精类药物(γ-氨基丁酸、氯丙那林、可乐定、赛庚啶、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺)交叉反应率均小于0.3%,具有良好的敏感性和特异性。【结论】成功合成了巴氯芬人工抗原,并制备了免疫学特性良好的巴氯芬鼠源多克隆抗体。

盐酸可乐定人工抗原及其鼠源多抗的制备

以盐酸可乐定(Clonidine hydrochloride,CLO)的衍生物盐酸阿可乐定(Apraclonidine hydrochloride,ACLO)为半抗原,采用重氮化法合成人工抗原,免疫小鼠制备高敏感性、特异性的CLO鼠源多抗并进行鉴定,为CLO单克隆抗体的制备奠定基础。将ACLO分别与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联,合成免疫原CLO-BSA和包被原CLO-OVA,经紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定偶联效果后,免疫BALB/c小鼠,并对获得的鼠源多抗采用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其特性。结果显示,免疫的4只小鼠血清抗体效价均达到1∶25600以上,其中2号小鼠的抗体敏感性最高,半数抑制质量浓度(IC50)为7.026 ng/mL,与其他几种常见瘦肉精类药物的交叉反应率均小于0.1%,特异性良好。表明成功合成免疫原性良好的CLO人工抗原,并获得敏感性高、特异性强的CLO鼠源多抗,为其单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立奠定良好基础。

大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

为制备免疫学特性良好的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子(Kunitz trypsin inhibitor,KTI)单克隆抗体,以50μg/只的免疫剂量将KTI免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和敏感性,选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到稳定分泌KTI单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为157.33ng/mL,经细胞融合筛选得到4E6-E9阳性杂交瘤细胞株,所制备的抗体效价达到1:1 638 400,亚型为IgG1型,亲和常数为1.45×108 L/mol,IC50为28.39ng/mL,且特异性强。说明试验所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立灵敏、特异的KTI免疫学检测方法提供良好的抗体保障。

豆芽中生长调节剂类违禁添加物的检测方法研究进展

文章针对近年来频发的"问题豆芽"事件,介绍了豆芽生产过程中禁止添加的6-苄基氨基嘌呤等植物生长调节剂的作用及危害,综述了用于此类生长调节剂检测的高效液相色谱、表面增强拉曼光谱、电化学、免疫分析、生物传感器等方法的应用现状,并对检测方法的发展方向进行展望。

花生中致敏蛋白的检测方法研究进展

花生中含有丰富的营养成分,但也含有能引起花生过敏者发生过敏反应的致敏蛋白。花生过敏患者误食含花生食品后,将引发严重过敏反应,且没有确切有效的治疗方法。因此,建立简单、快速、灵敏检测食品中花生过敏原物质的方法尤为重要。对花生中几种主要致敏蛋白和目前常见检测方法进行综述,并对其未来发展方向进行展望,为花生致敏蛋白快速检测的深入研究提供一定的参考。

6-苄基腺嘌呤人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

为制备6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷(6-benzylaminopurine riboside,6-BAR)分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA。采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行初步鉴定。用6-BAR-BSA以背部皮下多点注射的方式免疫4只BALB/c小鼠(编号1—4),免疫剂量50μg/只,间隔21 d,4免后10 d断尾采血制备鼠源多克隆抗体血清。间接ELISA测定血清效价,间接竞争ELISA测定血清敏感性及特异性。结果显示,6-BA人工抗原制备成功,免疫小鼠血清效价均达到1∶51200以上,2号小鼠血清效价最高为1∶204800,且其对6-BA的半数抑制浓度(IC50)为13.48μg/L,线性范围为0.26~701.45μg/L,与激动素、赤霉素、4-氯苯氧乙酸钠、腐霉利、呋喃苯烯酸钠、BSA、OVA交叉反应率均小于0.01%。综上,成功制备了6-BA人工抗原,并通过动物免疫得到高敏感性、高特异性鼠源多克隆抗体。