前癃通胶囊介导miR-216a-5p/TPT1/mTORC1通路调控良性前列腺增生的实验研究

目的通过细胞实验探讨前癃通胶囊(qian long tong capsule,QLTC)能否通过调控miR-216a-5p/肿瘤蛋白翻译控制1/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(miR-216a-5p/tumor protein translationally controlled 1/mammalian target of rapamycin complex 1,miR-216a-5p/TPT1/mTORC1)信号通路抑制良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)。方法将25只大鼠随机分为对照组(等体积生理盐水),QLTC低(56.25 mg/mL)、中(112.50 mg/mL)、高(225.00 mg/mL)剂量组,LBSC组(168.75 mg/mL),每组5只。每组灌胃1 mL/次,2次/d,连续5 d。各组大鼠麻醉后制备含药血清。根据实验目的不同,将CP-H022细胞分5步做实验处理,每部分实验进行独立分组。将miR-216a-5p过表达和沉默表达,及TPT1过表达进行对照研究;RT-qPCR法检测正常和BPH模型CP-H022细胞内miR-216a-5p表达量,并观察不同浓度QLTC处理的BPH细胞中miR-216a-5p表达量的差异;细胞集落形成实验检测细胞增殖能力;CCK-8法检测BPH模型细胞增殖;RT-qPCR法检测miR-216a-5p、TPT1 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;生信分析、双荧光素酶实验验证miR-216a-5p与TPT1的靶向关系;过表达TPT1后,Western blot法检测BPH细胞中TPT1/mTORC1信号通路相关分子表达情况。结果与对照组1比较,模型组1的CP-H022细胞内miR-216a-5p表达量下调(P<0.05);不同浓度的QLTC均能上调miR-216a-5p表达量(P<0.05);根据本实验结果,本研究将选用QLTC(高剂量)组CP-H022细胞进行后续实验。与模型组2比较,QLTC组2细胞增殖减少、凋亡增加(P<0.05),B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达降低(P<0.05),Bcl-2关联X蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody to Bcl-2 associated X protein,Bax)、cleaved Caspase-3表达升高(P<0.05)。敲低miR-216a-5p后,与模型组4比较,QLTC组4细胞增殖增强、凋亡减少(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05),Bax、cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05)。与mimic-NC组比较,miR-216a-5p mimic组TPT1表达量降低(P<0.05);QLTC处理后,细胞TPT1、p-mTORC1表达均降低(P<0.05);过表达TPT1后BPH细胞增殖功能增强(P<0.05),凋亡减少(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05),Bax、cleaved Caspase-3表达下降(P<0.05)。结论QLTC可通过介导miR-216a-5p下调TPT1/mTORC1通路,进而抑制BPH。

糖尿病皮肤溃疡与普通皮肤溃疡中炎症蛋白差异性表达的研究

目的研究并筛选炎症蛋白在糖尿病皮肤溃疡与普通皮肤溃疡中差异性表达,为深入研究糖尿病皮肤溃疡抗炎促愈药物靶点提供实验依据。方法采集湖南中医药大学第一附属医院11例糖尿病皮肤溃疡患者的组织、12例普通皮肤溃疡患者的组织和11例正常皮肤患者的组织。用酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测三组组织中炎症蛋白Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB),促炎因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-1β(IL-1β)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1),抗炎因子表皮生长因子(EGF)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)的含量。结果与正常组织相比,普通溃疡皮肤组织和糖尿病溃疡组织中的TLR4、NF-κB、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MCP-1和EGF浓度均更高,IL-10浓度更低,差异均具有统计学意义(均P<0.05);与正常组织相比,糖尿病溃疡组织中IL-4浓度更低,差异具有统计学意义(P<0.05);与普通溃疡皮肤组织相比,糖尿病溃疡组织中TLR4、NF-κB和MCP-1浓度更高,IL-4浓度更低,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论糖尿病患者皮肤溃疡会出现炎症反应,而高糖促进了皮肤溃疡炎症反应,可能与TLR4、NF-κB、MCP-1和IL-4表达异常有关,TLR4/NF-κB信号通路及炎症因子MCP-1和IL-4有望作为糖尿病皮肤溃疡炎症调控的靶点。