基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法同时快速测定保健食品中的降压物质

建立了基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)同时快速筛查测定盐酸可乐定(HCD)、阿替洛尔(ANL)和利血平(RSP)等3种降压物质的方法。对比了不同点样方式、激光强度对3种药物信号强度的影响等因素,并进行方法学验证。结果表明,以α-氰基-4-羟基肉桂酸(HCCA)为基质,采用混合点样法,反射线性正离子模式下选择激光强度为60%进行MALDI-TOF MS检测时,3个目标物的质谱信号稳定,强度高,响应重复性好。方法学验证结果表明,3种小分子降压物质在10~100 ng/mL线性范围内线性好,相关系数(r)≥0.99,方法的筛查限(LOI)为0.005~0.25μg/g,在液体、固体和半固体3种保健食品基质中的加标回收率为67.56%~104.70%,相对标准偏差(RSDs)为0.43%~10.51%(n=3)。该方法灵敏度好,准确性高,精密度优,抗干扰能力强,有机溶剂消耗少,节能环保,尤其适用于大批量、多批次保健食品中降压物质的检测,填补了传统基质分析筛查保健食品中小分子非法添加物的空白。

高中语文教学中职业生涯规划渗透策略

在语文教学中渗透职业生涯规划对高中学生成长很有必要,可以帮助学生明确人生目标。文章重点剖析了高中语文教学中职业生涯规划渗透策略,以期为高中语文教师提供参考。

2-溴乙胺改善动脉粥样硬化兔血管内皮舒张功能

目的利用兔动脉粥样硬化实验模型及离体血管功能检测系统探讨SSAO抑制剂2-溴乙胺是否能改善动脉粥样硬化兔内皮依赖性血管舒张功能及减轻其动脉粥样斑块形成,观察SSAO底物甲胺对血管内皮功能的影响。方法雄性新西兰白兔24只等分为4组:①正常饲料组(CC组);②1%胆固醇饲料组(HC组);③1%胆固醇及0.2%甲胺饲料组(MA组);④1%胆固醇及0.2%甲胺饲料并于9、10、11周时连续3次耳缘静注射2-溴乙胺(10mg·kg-1),动物喂养共12周。实验结束时抽取耳中央动脉血,作生化分析,剥离主动脉(自起始部到髂动脉分叉处)起始段4mm制成动脉环用于内皮依赖性血管舒张功能研究,其余部分作斑块面积测定。结果同CC组相比,HC组、MA组和2-BEA的血清总胆固醇(T-CHO)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均明显增高(P<0.01),但3组间上述指标相比无明显差异;HC组和MA组动物主动脉对乙酰胆碱的内皮依赖性血管舒张功能明显损害,而2-BEA组动物主动脉对乙酰胆碱的内皮依赖舒张功能损害较轻;2-BEA组动物的动脉粥样斑块面积显著少于HC组和MA组。结论2-溴乙胺能够改善实验性动脉粥样硬化兔的内皮依赖性血管舒张功能,减少动脉粥样斑块的形成。

水产品中广州管圆线虫微滴数字聚合酶链反应定量检测方法的建立

目的建立微滴数字聚合酶链反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速、准确定量检测水产品中广州管圆线虫的分析方法。方法选择广州管圆线虫ITS2基因序列作为靶标序列,自主设计特异性引物和探针,建立广州管圆线虫ddPCR定量检测方法,通过对ddPCR反应条件的优化,确立了ddPCR最佳反应条件,从稳定性、特异性、定量限范围、定量检测低限和人工污染样品等方法,综合评价建立的广州管圆线虫ddPCR定量检测方法的效果。结果广州管圆线虫DNA质量浓度在0.320~1000.000 pg/μL的范围内,基因拷贝数与DNA浓度呈良好的线性关系,相关系数r2=1,定量检测低限为0.297拷贝/μL,人工污染样品中3次重复实验分别检出4370、4210、4310拷贝/μL。结论本研究建立的广州管圆线虫ddPCR定量检测方法特异性强、灵敏度高、稳定性好、定量范围广,为水产品中广州管圆线虫的定量检测提供新的检测手段。

白藜芦醇对甲醛诱导PC12细胞氧化损伤的影响

目的探讨白藜芦醇对甲醛诱导PC12细胞损伤干预的可能机制。方法以甲醛损伤PC12细胞为氧化应激损伤模型,用不同浓度(6.251、2.5、255、01、00μmol/L)的白藜芦醇预处理PC12细胞2 h后,加入终浓度为80μmol/L甲醛作用24 h,并设氨基胍100μmol/L为阳性对照组。采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测细胞活力;分光光度法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;硫代巴比妥酸法测定MDA含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性;二硫对二硝基苯甲酸(DTNB)比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(iNOS)活性;并收集各组细胞,检测细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ(COⅡ)蛋白活性及mRNA的表达;Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞技术检查细胞凋亡情况。结果白藜芦醇能明显改善甲醛所致PC12细胞损伤,与甲醛处理组相比,细胞存活率随着白黎芦醇浓度的增加而加强,且100μmol/L白藜芦醇组细胞存活率为(92.66±3.27)%,高于氨基胍阳性对照组(〔82.18±2.06)%;〕在白黎芦醇6.25～100μmol/L浓度范围内,SOD、GSH-Px活性、COⅡ蛋白及mRNA表达水平随着白藜芦醇浓度增加而逐渐升高;LDH漏出量、NO、MDA含量i、NOS活性随着处理浓度的增加而逐渐降低。结论白藜芦醇对甲醛诱导PC12细胞损伤具有保护作用,在一定范围内呈剂量-效应关系;能有效改善甲醛所致PC12细胞的氧化损伤,提高细胞存活率;这种抗氧化活性可能与抑制甲醛/ROS、甲醛/NOS/NO氧化应激途径、减轻线粒体损伤有关。

食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素及耐药性分析

目的:对92株食源性金黄色葡萄球菌分离株进行肠毒素及耐药性检测,以了解其致病性和耐药性。方法:采用酶联免疫吸附试验测定食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素携带情况,利用VITEK®2 Compact全自动微生物分析系统对菌株进行药敏试验,采用聚合酶链式反应对菌株mecA耐药基因进行检测。结果:92株食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素检出率为5.43%(5株),对青霉素、四环素、红霉素、克林霉素4种抗生素的耐药率较高,分别为100%、30.43%、19.57%、14.13%,检出3株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。结论:食源性金黄色葡萄球菌分离株产生的肠毒素不容忽视,多重耐药及MRSA的检出提示耐药形势比较严峻,加强对食源性金黄色葡萄球菌致病性和耐药性的监测,对降低食品安全风险有重要意义。

烧伤膏细菌内毒素检查方法学研究

目的探讨湿润烧伤膏经正己烷萃取后水溶液的细菌内毒素检查方法。方法采用外加定量内毒素接种法,将烧伤膏内毒素从油相中萃取到水相中,用动态浊度法测定内毒素回收率,考察萃取过程中对内毒素的影响;同时用凝胶法对不干扰浓度做进一步验证。结果萃取液稀释6倍后的内毒素回收率为52.3%且对鲎试剂反应无干扰,两种方法检测萃取液中内毒素的结果均在规定限值内。结论湿润烧伤膏用正己烷溶解后,与细菌内毒素检查用水充分振荡混匀,取水相萃取液进行细菌内毒素检查是可行的。

注射用单硝酸异山梨酯细菌内毒素检查法研究

目的建立注射用单硝酸异山梨酯细菌内毒素检查(BET)方法。方法参考2015年版《中国药典》(四部)通则收载的细菌内毒素检查方法及其原则进行实验,采用不同厂家鲎试剂对五个厂家生产的注射用单硝酸异山梨酯进行干扰实验研究。结果本品稀释至0.018 mg/mL时可消除对鲎试剂与细菌内毒素凝集反应的干扰,按拟定标准检验,该品种5个批次样品细菌内毒素检查结果均符合规定。结论注射用单硝酸异山梨酯按限值L=14 EU/mg进行细菌内毒素检查是可行的。

建立注射用还原型谷胱甘肽钠近红外光谱法快速比对模型的研究

目的采用近红外光谱法建立快速鉴定进口药品"注射用还原型谷胱甘肽钠"的一致性检验模型。方法收集广州市药品检验所进口抽检的两个厂家的合格药品"注射用还原型谷胱甘肽钠",其中包括Pharminvest SPA厂家14批及BIOMEDICA FOSCAMA厂家2批,共16批。分别采用隔玻璃瓶底测和直接接触测两种方法采集每批样品的近红外漫反射光谱,在OPUS光谱分析软件的Setup Conformity Test模块中,选择谱段范围为:8998.9～7795.5cm^(-1)、7413.6～6985.5cm^(-1)、6823.5～4023.1cm^(-1),进行一阶导数化和矢量归一化预处理建立一致性检验模型。结果采用隔玻璃瓶底测方式采集的注射用还原型谷胱甘肽钠谱图建立的快速比对模型专属性和耐用性较好,可区分出两个厂家的样品。而采用直接接触测方式采集谱图所建立的快速比对模型专属性不可行,无法区分出两个厂家的样品。结论该玻璃模型可快速鉴别出两个厂家生产的注射用还原型谷胱甘肽钠,并可有效地应用于药品检测车的现场筛查打假中。

三磷酸腺苷二钠氯化镁注射液用于细菌内毒素检查的可行性研究

目的探讨注射用三磷酸腺苷二钠氯化镁用于细菌内毒素检查的可行性。方法参考《中华人民共和国药典》2010年版(二部)附录收载的细菌内毒素检查法及其原则,采用两个厂家鲎试剂对不同厂家共4个批次注射用三磷酸腺苷二钠氯化镁进行细菌内毒素凝胶法方法学认证。结果本品稀释至0.5 mg/ml时可消除鲎试剂与细菌内毒素凝集反应的干扰,按拟定标准检验,该品种4个批次样品细菌内毒素检查结果均符合规定。结论对注射用三磷酸腺苷二钠氯化镁进行细菌内毒素检查是可行的,可替代现行的热原质检查对该项目的质量控制。

亲水性色谱柱高效液相色谱法测定米面及制品中的乌洛托品

目的建立亲水性色谱柱高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测米面及制品中乌洛托品的方法。方法样品中的乌洛托品以20 mmol/L乙酸铵溶液(氨水,pH 10)为提取液,超声提取10 min,10000 r/min离心3 min后取上清液过0.22μm水相微孔滤膜待测。对50.00 mg/L的乌洛托品标准溶液色谱峰进行光谱扫描,确定乌洛托品的最大吸收波长为210 nm。采用Waters XBridge BEH HILIC(4.6 mm×150 mm,3.5μm),色谱柱进行分离,以纯水:乙腈=70:30(V:V)为流动相,外标法定量。结果乌洛托品在0~200 mg/L范围内具有良好的线性关系,其线性方程为Y=1.647X+0.3669,相关系数为0.9999,方法检出限为4.00 mg/kg。在4.00、8.00、40.00 mg/kg 3个水平下的回收率分别为93.5%、96.4%、98.7%,相对标准偏差分别为4.2%、3.2%、1.5%。结论该方法符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》的相应技术要求,方法准确稳定可靠,适合测定米面及制品中的乌洛托品。

食品中微塑料的污染现状与健康风险

微塑料广泛存在自然环境中,与人类生产生活息息相关,是一类全球性污染物。随着微塑料相关研究的不断深入,食品中微塑料的潜在危害效应引发了各国学者的高度重视。全面认识食品中微塑料的危害对食品安全和人体健康非常重要。本文综述了食品中微塑料的污染情况以及可能存在的健康风险,并提出了亟待解决的问题,期望能为食品安全相关研究提供参考。

电位滴定法检测茶叶水溶性灰分碱度

目的建立一种电位滴定法检测茶叶水溶性灰分碱度。方法选用不同品种的茶叶,按照国家标准方法 GB/T 8309-2013《茶水溶性灰分碱度测定》对样品进行炭化、灰化、加热、洗涤后,分别采用电位滴定法和国家标准方法进行测定,并对2种方法的测定结果进行比较。结果测定茶叶水溶性灰分碱度,电位滴定法测定空白样品标准偏差0.001%,样品标准偏差0.028%~0.031%;国家标准方法测定空白样品标准偏差0.003%,测定样品标准偏差0.044%~0.061%。电位滴定方法加标回收率为89.9%~92.6%,方法检出限0.003%。结论电位滴定法测定茶叶水溶性灰分碱度的准确性高、稳定性好、可操作性强,能排除更多干扰,可推广使用。

植物蛋白饮料中榛子成分环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法的建立

该研究基于植物蛋白饮料掺杂使假现象普遍,建立一种针对榛子成分为检测目标的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测技术方法。根据欧洲榛子染色体Ca8(登录号:LR899430.1)基因保守序列(第19517533-19519500 bp),设计榛子成分环介导等温扩增检测特异性引物,构建反应体系,并验证方法的特异性、灵敏度和稳定性;以Real-Time PCR(Polymerase Chain Reaction)为对照方法,采用显著性差异检验(Mc Nemar’s检验)方法,通过32种植物蛋白饮料检测结果验证LAMP方法的性能指标和准确性。该研究建立的LAMP方法特异性强,33种植物成分中除了榛子DNA外,其它植物成分DNA均未获得阳性扩增结果;重复性实验稳定性好(扩增Ct值,RSD=5.41%),最低检出限为0.1%(以质量分数计);通过植物蛋白饮料产品应用性验证,得出方法特异性和灵敏度均为100%,不存在假阳性和假阴性。综上,该研究建立的植物蛋白饮料榛子成分LAMP检测技术,具有操作简单、快速高效(从样品处理到最终结果可在2h内完成)、准确度高等优点,可应用于植物蛋白饮料榛子成分快速检测。

甲醛致胎鼠肝微核率及染色体畸变的研究

目的探讨甲醛致胎鼠肝微核率与染色体畸变。方法随机将妊娠小鼠(孕13天)分为5组:腹腔注射甲醛(0.00、0.20、2.00、20.00mg/kg)染毒组、环磷酰胺(30mg/kg)阳性对照组,实验至妊娠第14天即染毒后18小时脱颈椎处死孕鼠,剥离两侧子宫,每侧各取一胎鼠,断头放出外周血,取胎肝,采用胎肝微核试验和胎肝染色体畸变试验,检测胎肝血微核率和染色体畸变率。结果2.00、20.00mg/kg甲醛染毒组胎肝微核率及胎肝染色体畸变率与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.01);染色体畸变主要表现为染色体断裂、多倍体等畸形。结论甲醛可致胎鼠肝微核率与染色体畸变。

白藜芦醇抗炎作用与氨基脲敏感性胺氧化酶活性的关系

目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)的抗炎作用,分析抗炎效应与氨基脲敏感性胺氧化酶(semicarbazide sensitive amine oxidase,SSAO)的关系,探讨Res抗炎作用新机制。方法将雄性新西兰兔34只,随机分成对照组(n=4)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(n=6)、Res预防组(30、60、120mg/kg,n=6)和2-溴乙胺(2-bromoethylamine,2-BEA)组(n=6)。对照组不做处理,其它各组分别给予1%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO,ip)、Res(30、60、120mg/kg,ip)和2-BEA(10mg/kg,iv),并立即进行气管插管灌注LPS建立急性肺损伤的动物模型,。ELISA法测定16h血清IL-1β、IL-6、PGE2、iNOS等炎症因子水平,高效液相色谱法测定16h血浆SSAO活性。结果对雄性新西兰兔气管插管灌注LPS,实验动物血清IL-1β、IL-6、iNOS水平、血浆SSAO活性明显高于对照组(P<0.05);三个剂量的Res降低LPS所致的炎症模型动物血清IL-1β、IL-6、PGE2、iNOS水平、血浆SSAO活性,其中60、120mg/kg Res明显抑制炎症反应(P<0.05)。三个剂量的Res明显降低LPS所致的炎症模型动物肺湿重/干重比值(W/D,P<0.05),不同程度的减轻LPS诱导的急性肺损伤程度。结论 Res具有减轻模型动物急性肺损伤效应,降低动物血清IL-1β、IL-6、PGE2、iNOS等炎症因子水平,抑制动物血浆SSAO活性,其抗炎效应与SSAO活性降低有关。

维生素C对甲醛胚胎发育毒性抑制作用

目的探讨维生素C(VC)对甲醛诱导胎鼠发育毒性的影响。方法应用体外全胚胎培养模型,观察100μg/mL VC对终浓度为9,27,81μmol/L甲醛诱导昆明种小鼠胚胎发育毒性的影响。结果与对照组比较,9μmol/L甲醛可使胚胎头长、颅臀长、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量分别升高到(1.66±0.21),(3.48±0.40)mm,(47.70±2.12)mg/(g.prot),(4.27±0.62)nmol/(mg.prot),差异有统计学意义(P<0.05);27μmol/L甲醛使胚胎脏层卵黄囊(VYS)直径、头长、颅臀长、体节数、GSH含量分别下降到(4.35±0.65),(1.48±0.30),(3.19±0.43)mm,(25.2±1.2)对,(40.25±4.38)mg/(g.prot),MDA含量升高到(6.29±0.47)nmol/(mg.prot),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);VC能明显改善上述指标,但与对照组比较差异无统计学意义(P<0.01);VC不能明显改善81μmol/L甲醛诱导的毒性损伤。结论VC对一定剂量范围内的甲醛胚胎毒性具有明显抑制作用。

动态浊度法检测关节腔内注射用交联透明质酸钠中细菌内毒素

目的：建立定量检测关节腔内注射用2%交联透明质酸钠中细菌内毒素的试验方法。方法：根据2010年版《中国药典》附录细菌内毒素检查法中的动态比浊法及其指导原则进行干扰试验,确定最大有效稀释倍数;并将检测结果与凝胶法比较。结果：样品在原液8倍稀释的浓度下用定量鲎试剂检测无干扰,内毒素回收率在50%~200%内;两种方法检测样品内毒素结果均在规定限值下。结论：建立的动态比浊法定量检测关节腔内注射用2%交联透明质酸钠中的内毒素方法可行。

双歧杆菌生理生化特性及调控大鼠肠道菌群、脂质代谢功能的研究进展

肠道微生态是人和动物体内最为复杂、最为主要的微生态系统。双歧杆菌是肠道微生态存在的一种益生菌,在防治肥胖、代谢综合征等多个疾病领域呈现出潜在应用前景,成为食品补充剂、保健食品等多个领域研究的热点。双歧杆菌能够通过调节饮食结构与能量摄入,肠道菌群微环境、微生物-肠-脑轴及肠道免疫等途径调控大鼠肠道菌群,保护肠道黏膜屏障,并能通过对碳水化合物利用途径、抵抗炎症应激途径、调节脂肪分解途径、基因途径、胆汁酸盐共沉淀与菌体同化胆固醇途径等调控脂质代谢,同时肠道菌群与脂质代谢之间具有双向调节作用。但双歧杆菌对肠道菌群、脂质代谢的效果,因应用领域、配方、添加数量而异,仍需要更深度控制研究和临床验证来确立配方、添加数量等。且应用于食品领域时,可能通过与宿主自身肠道菌群交流遗传物质途径,导致肠道耐药基因转移或耐药病原菌传播。本文就双歧杆菌调控大鼠肠道菌群及脂质代谢多种途径和机制进行综述,并对相关问题进行展望,以期为双歧杆菌相关领域研究提供思路。