恶性血液病患者mdr1基因启动子区甲基化状态及其与表达的关系

为了探讨多药耐药 (mdr1)基因启动子区的甲基化状态及其与表达的关系 ,采用甲基化敏感的HpaⅡ酶切结合竞争性定量PCR检测 5 4例急性白血病 (AL)和 9例多发性骨髓瘤 (MM)患者mdr1基因启动子区位于转录起始点上游 - 110和 - 5 0bp处两个CCGG位点 (I区和Ⅱ区 )的甲基化率 ;半定量RT PCR检测mdr1基因的表达水平。结果显示I区、Ⅱ区及总甲基化率均与表达呈负相关 ,I区比Ⅱ区相关密切 (r分别为 - 0 .6 4和 - 0 .4 0 )。低甲基化组(n=36 )mdr1高表达率显著增高 (P <0 .0 0 1)。与化疗敏感组 (n =8)相比 ,耐药组 (n=16 )I区 (P =0 0 5 )、Ⅱ区 (P <0 .0 5 )和总甲基化率 (P <0 .0 5 )均减低。与未化疗组 (n =36 )相比 ,化疗后组 (n =14 )I区和总甲基化率均减低 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ区甲基化率也减低 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。化疗后组随甲基化率减低 ,mdr1表达升高 ,但尚无统计学意义 (P =0 .0 6 )。结论 :AL和MM患者骨髓mdr1基因表达水平与基因转录起始点上游 - 110和- 5 0处两个CCGG位点的甲基化程度呈负相关 ,且与 - 110处关系更密切。化疗后及耐药病人mdr1基因甲基化水平相对降低。化疗后mdr1基因表达增高与其甲基化水平降低有关。

TCR独特型DNA疫苗诱导抗淋巴系统肿瘤免疫反应的实验研究

本研究观察TCR独特型DNA疫苗诱导BALB c小鼠抗肿瘤免疫反应的情况。用CEM淋巴瘤细胞系和BALB c小鼠作模型 ,RT PCR扩增CEM细胞系特异性重排的TCRVβ基因 ,克隆到真核表达载体pcDNA3中作为DNA疫苗。用肌内注射法免疫小鼠 ,间接免疫荧光法检测小鼠抗体生成和用MTT法测定CTL活性以检测抗独特型的细胞免疫。结果发现 ,接种DNA疫苗后第 4周开始小鼠血清中即可检测到特异性抗独特型抗体 ,抗体滴度在第 6周达高峰 ,应用IL 6为免疫佐剂可使抗体滴度明显增高。上述结果表明 ,TCR独特型DNA疫苗可以诱导小鼠产生抗淋巴瘤细胞的独特型特异性抗体 ,应用IL

“金龙胶囊”抑制HL-60细胞生长并诱导细胞凋亡

目的:研究中药金龙胶囊冻干粉(Jin Long Capsules,简称JLC)对人白血病细胞的作用及其机制。方法:应用台盼兰拒染法观察0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml JLC对HL-60细胞的抑制作用,光镜及透射电镜观察细胞结构变化,DNA电泳、流式细胞术等检测细胞凋亡。结果:1.JLC可抑制HL-60细胞的生长,这种作用呈剂量和时间依赖性;2.JLC作用后细胞出现典型的凋亡形态学改变,DNA片段化,流式细胞仪可检出亚G_1期细胞;3.JLC作用后细胞阻滞于G_0/G_1期,S期细胞减少。结论:金龙胶囊冻干粉对白血病细胞有诱导凋亡作用,主要作用于S期。

分子杂交技术检测免疫球蛋白基因重排的意义

目的：探讨分子杂交技术检测免疫球蛋白基因重排的意义。方法：采用Ｊ＿Ｈ和Ｃ＿λ探针，经Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ印迹法检测１２例确诊或疑诊血液系统肿瘤患者的２０份淋巴结、血和骨髓细胞的Ｉｇ基因重排。结果：发现Ｂ－ＮＨＬ、ＣＬＬ、ＨＣＬ和ＭＭ均有不同于胚系的重排模式，而淀粉样变性、ＣＭＬ、Ｔ－ＡＬＬ和鼻咽癌为胚系模式。结论：克隆性Ｉｇ基因重排仅见于Ｂ细胞，可作为Ｂ细胞克隆性增殖的证据，用于Ｂ细胞恶性增生性疾病的诊断，也可以用于分析Ｂ细胞肿瘤的克隆来源。

缺铁性贫血及白血病患者红细胞质膜氧化还原系统的活性

本文用质膜不透性的铁氰化钾做为电子受体,研究了缺铁性贫血(irondeficiencyanemia,IDA)及白血病患者的红细胞(RBC)质膜的氧化还原系统活性。用完整RBC与铁氰化钾共同温育,经6、10、20分钟后分别检测铁氰化钾还原率,发现IDA患者高于健康人,白血病患者高于IDA患者。

骨髓细胞AgNOR对再生障碍性贫血与骨髓增生异常综合征鉴别价值的探讨

骨髓细胞ＡｇＮＯＲ对再生障碍性贫血与骨髓增生异常综合征鉴别价值的探讨北京医科大学第一医院血液内科方裕谦，武淑兰，曹香红北京医科大学第一医院医学统计室孙可淳近年来对骨髓细胞核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲ）的研究表明ＡｇＮＯＲ可作为研究骨髓细胞增生、...

DNMT3B基因启动子单核苷酸多态性C46359T与急性白血病的关系

目的探讨DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性与急性白血病 (AL)发病的关系.方法采用PCR-RFLP结合DNA测序技术检测160例AL患者及240例正常对照DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性.结果中国汉族人中CT杂合型的频率为2.5%,TT纯合型的频率为97.5%,未检出CC纯合型;与美国白种人的基因型分布(三种基因型频率分别为41.8%、23.2% 和35.0%)存在显著差异(P<0.001).在160例初发的成人AL患者中CT杂合型的频率为10.6%,明显高于正常对照组(2.5%),P<0.001,提示在AL患者中CT基因型是一个高发现象.正常人中CT基因型发生AL的危险性是TT基因型的4.669倍(OR=4.669, 95%可信区间为1.700～14.747),说明CT基因型与AL的发生有一定的相关性.结论 DNMT3B基因启动子-149位CT基因型与AL发病相关;中国汉族人的DNMT3B基因启动子-149位基因型分布与美国白种人有显著不同.

T细胞受体β独特型抗原决定簇DNA疫苗诱导抗淋巴瘤抗体的研究

目的 观察T细胞受体 (TCR) β不同独特型抗原决定簇DNA疫苗诱导BALB c小鼠抗人类CEM淋巴瘤细胞免疫反应的情况。方法 RT PCR扩增CEM细胞特异性重排的TCRβ基因片段 ,克隆至真核表达载体pcDNA3中 ,然后以此为模板 ,扩增编码不同抗原决定簇的基因片段 ,分别克隆到pcDNA3中作为DNA疫苗。肌肉注射法免疫小鼠 ,间接免疫荧光法检测小鼠血清中抗体生成情况。结果 CEM细胞TCRβ共包含 5个抗原决定簇 ,其DNA疫苗免疫的 6只小鼠全部产生了特异性抗独特型抗体 (最高滴度 1∶480 ) ;含 4个抗原决定簇的DNA疫苗免疫的 6只小鼠中有 4只产生了特异性抗独特型抗体 ,但滴度均较低 (最高滴度 1∶80 ) ;仅含 2个抗原决定簇的DNA疫苗未能使小鼠产生特异性抗独特型抗体。结论 包含TCRβV区全长 ,共有 5个抗原决定簇的独特型DNA疫苗可以诱导小鼠产生抗淋巴瘤细胞的独特型特异性抗体 ;含有 4个抗原决定簇的DNA疫苗仍可诱导特异性抗体的生成 ,但这种反应较弱 ;而仅含有

混合系白血病基因相关白血病骨髓细胞形态学特征

目的通过观察混合系白血病(Mixed lineage leukemia, MLL)基因相关白血病患者骨髓细胞形态学特征,了解MLL基因重排特征与FAB形态学分型的关系.方法用多重巢式RT-PCR方法检测214例白血病和淋巴瘤的常见白血病相关融合基因,选择有MLL基因异常的白血病患者骨髓细胞涂片做光镜下的形态学观察,比较具有不同MLL基因异常的白血病细胞的形态学差异.结果患者中发现MLL基因异常者14例,其中有 MLL/AF6融合基因者5例,骨髓细胞形态学均为FAB-M5型,具有典型的原始单核细胞白血病的特征:在光镜下均表现为细胞体积大,染色质疏松,细胞核折叠,有1～2个大而清晰的核仁,胞质嗜碱性呈毛玻璃样.多数细胞核旁淡染区明显,胞浆内可见细长型奥氏小体,染色体纤细.过氧化物酶染色阴性,非特异脂酶染色阳性,可被氟化钠抑制.其他MLL基因异常7例,包括MLL部分串联重复(PTD),MLL/AF10融合基因,MLL/AF4阳性者,分别属于M1,M4型,MDS和幼稚淋细胞白血病.结论 MLL基因异常主要见于与单核细胞相关的白血病,MLL/AF6重排可能是急性原始单核细胞型白血病一种独立亚型的重要标志,该融合基因可能与单核细胞分化有更密切的关系.

急性白血病/骨髓增生异常综合征患者DNA甲基转移酶亚型的表达

目的 探讨DNA甲基转移酶 (DNMTs)亚型与急性白血病 (AL)发病及骨髓增生异常综合征 (MDS)向AL转化的关系。方法 半定量逆转录 (RT) PCR技术测定 75例AL/MDS患者的DNMT1、3A及 3B的mRNA表达水平。结果 低危MDS组 (2 1例 )DNMT各亚型的表达升高与正常对照组平均值无统计学差异 ,但以正常对照组平均值的 80 %单侧上界为界 ,则分别为 4 7 6 %、4 7 6 %和 4 2 9% ,高于正常对照 (P <0 0 1)。高危MDS组 (13例 )分别为 5 3 8%、76 9%和 92 3%高于正常对照 (P <0 0 1) ,其中DNMT 3B表达显著高于低危MDS组 (P <0 0 1) ,而DNMT1和 3A表达与低危组差异无显著性。AL组 (41例 )DNMT1、3A及 3B分别为 92 7%、97 6 %和 10 0 %高于正常对照 (P <0 0 1) ,且三种DNMT亚型表达水平均显著高于MDS组 (P <0 0 1)。急性淋巴细胞白血病组DNMT1表达显著高于急性髓细胞白血病组 (P <0 0 1) ,而二组的DNMT3A ,3B表达无统计学差异。结论 DNMTs表达水平的增高与AL的发病及MDS向AL转化过程密切相关 ,并以DNMT3B的关系最为密切。

应用PCR－SSCP法探讨外周血B细胞参与多发性骨髓瘤的发病

为探讨多发性骨髓瘤（ＭＭ）的克隆起源，经形态学及ＡＢＣ法筛选１８例外周血无浆细胞污染的ＭＭ患者，采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增免疫球蛋白重链ＣＤＲ３区编码基因，并经单链构象多态性（ＳＳＣＰ）法分析其单链构象多态性。经平行检测患者外周血（ＰＢ）和骨髓（ＢＭ）标本，发现１５例ＢＭ及１１例ＰＢ获得预期的克隆特异性ＰＣＲ产物为８０～１１０ｂｐ，其中９例ＰＢ和ＢＭ获得相同的ＰＣＲ产物，８例为１条扩增条带，其ＳＳＣＰ分析可见２条单链，另１例ＰＣＲ产物为２条扩增条带，其ＳＳＣＰ分析可见３条单链，同一患者ＰＢ与ＢＭ标本的单链泳动速度一致。提示至少６０％ＭＭ患者ＰＢ和ＢＭ不仅ＰＣＲ产物一致，其单链构象也一致，研究结果证实了外周血Ｂ细胞参与ＭＭ的发病。

以骨骼疼痛为首发表现的慢性粒细胞白血病局灶性急变一例并文献复习

【摘要】目的加深对慢性粒细胞白血病（CML）局灶性急变的认识，探讨其早期发现的有效检测方法。方法观察1例以骨骼局灶性急变为首发表现的CML患者的临床表现、实验室及辅助检查、治疗方案，并对相关文献进行复习。结果该例患者胸骨骨髓象、流式细胞学、染色体核型分析均支持CML慢性期诊断，但髂骨骨髓象及荧光原位杂交技术（FISH）检测显示已进入急变期，提示该CML患者已发生局灶性急变。结论CML急变可以局灶性急变的形式出现，PET-CT检查有助于早期发现并确定急变的病灶部位。

恶性淋巴瘤合并肺间质浸润的特征研究

目的提高对恶性淋巴瘤合并肺部病变的认识和诊疗水平。方法报告 1例合并多器官侵犯的非霍奇金淋巴瘤 ,其外周血、骨髓及淋巴结、皮肤标本分别采用光镜、免疫组化染色和胸部CT研究肿瘤细胞的特征。结果本例患者肿瘤为B淋巴细胞来源 ,表达CD 2 0、CD 45RA ,肿瘤细胞胸部浸润表现双肺弥漫性云雾状分布 ,磨玻璃状密度增高影 ,纵隔内淋巴结肿大。化疗效果差。结论恶性淋巴瘤出现肺间质浸润少见 。

急性白血病合并严重血小板增多症

目的探讨急性白血病合并严重血小板增多症的细胞遗传学特点及其临床和实验室特征。方法报告1例罕见的急性白血病合并严重血小板增多症病例的临床资料并结合相关文献进行分析。结果应用染色体常规G显带方法没有发现细胞遗传学异常,其他实验室特征包括外周血小板数达1 224×109/L,骨髓中原始细胞主要表达髓系细胞免疫标志,骨髓培养示巨核细胞集落形成单位高于正常对照并有空白自发集落生成。结论急性白血病与合并的血小板增多症可能有共同的发生机制,常规染色体检查结果阴性可能意味着染色体发生了更为复杂的改变,需用更先进的方法才能检出。

多发性骨髓瘤克隆起源的研究

为了解外周血中肿瘤克隆细胞的分化阶段，进一步研究ＭＭ（多发性骨髓瘤）发病机理，采用针对Ｂ细胞不同分化阶段抗原ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ３８的单克隆抗体，用ＡＰＡＡＰ法（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法）同时检测１７例外周血中不含浆细胞的ＭＭ患者骨髓及外周血的免疫表型，其中１０例外周血表达浆细胞抗原增高（Ｐ＜０．００１）且与骨髓一致。９例外周血表达ＣＤ３８和ＣＤ４５ＲＯ，３例表达ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ，１例表达ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＡ和ＣＤ１０。此结果显示ＭＭ患者外周血的Ｂ系抗原表达既与骨髓具有一致性，又具多样性，提示ＭＭ的外周血中存在多分化阶段的肿瘤前体细胞，呈现自早期Ｂ细胞，经活化Ｂ细胞及晚期Ｂ细胞向前浆细胞的持续分化过程，并验证了文献关于ＭＭ发病途径的推测。