血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896在肺腺癌中的筛查价值

目的探讨血清外泌体来源的环状RNA(circRNA)hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896作为肺腺癌分子标志物的临床筛查价值。方法共收集3个批次样本。第一批为血清外泌体组:收集肺腺癌患者127例,健康人对照组53例。第二批为血清组:收集肺腺癌患者87例,健康人对照组41例。第三批为手术前后血清外泌体组:收集手术前后肺腺癌患者26例。分离各组研究对象的血清及外泌体,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组血清及外泌体中hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平,统计并分析手术前后肺腺癌患者血清外泌体circRNA的表达水平及其与患者临床病理参数的关系。采用ROC曲线评估3个血清外泌体circRNA对肺腺癌的临床筛查效能,Pearson分析血清外泌体circRNA与各项肿瘤标志物的相关性。结果qRT-PCR结果显示,与健康人对照组比较,肺腺癌组血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平分别为0.338±1.362、1.650±1.329、2.064±1.621(t值分别为6.794、6.237、6.456,P<0.05);与术后比较,术前3个血清外泌体的表达水平分别为0.989±1.746、3.084±2.013、3.330±2.088(t值分别为5.289、4.197、4.966,P<0.05)。血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896筛查肺腺癌的ROC曲线下面积(AUC ROC)分别为0.777、0.766、0.793,当cut-off值分别为1.08、2.16、2.59时,其敏感性分别为73.23%、68.50%、66.14%,特异性分别为67.92%、79.25%、82.35%。此外,与健康人对照组比较,肺腺癌组血清hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平分别为0.318±2.077、1.932±1.971、2.141±1.815(t值分别为3.741、4.677、4.496,P<0.05);血清hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896筛查肺腺癌的AUC ROC分别为0.676、0.739、0.738,当cut-off值分别为0.29、1.88、2.44时,其敏感性分别为35.63%、48.28%、51.72%,特异性分别为95.12%、90.24%、85.37%。肺腺癌患者血清外泌体hsa_circ_0001439水平与T分期(P=0.042)、TNM分期(P=0.032)相关;而血清外泌体hsa_circ_0001492水平与年龄(P=0.027)、M分期(P=0.028)、T分期(P=0.004)、TNM分期(P=0.009)相关;血清外泌体hsa_circ_0000896水平与年龄(P=0.027)、T分期(P=0.001)、TNM分期(P=0.009)相关。Pearson分析显示血清外泌体circRNA与各项肿瘤标志物均无相关性(P>0.05)。结论血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的差异表达可用于肺腺癌的临床筛查。

纤维蛋白(原)降解产物/D-二聚体比值的临床应用探讨

目的 探讨纤维蛋白(原)降解产物(FDP)/纤维蛋白降解产物D-二聚体(DD)比值在不同检测系统的差异、对DIC高凝期的鉴别效能及对DD检测结果的干扰识别能力。方法 非DIC患者90例,同时在CS5100和STA-R-Evolution检测DD、FDP,计算FDP/DD比值;回顾分析20例DIC高凝期、20例DIC纤溶期,计算FDP/DD比值;另收集FDP/DD比值<1.7和FDP/DD比值2~3的标本各10例,分别检测原倍和1∶8稀释的DD结果,计算稀释前后FDP/DD比值。结果 90例非DIC患者两台仪器DD在中值组和高值组差异有统计学意义(P<0.05),FDP3组差异无统计学意义(P>0.05);FDP/DD3组差异均有统计学意义(P<0.05)。DIC高凝期组与非DIC组比较,差异有统计学意义(P<0.01);DIC高凝期组与纤溶组比较差异有统计学意义(P<0.01)。正常组1∶8稀释后中的DD、FDP/DD比值与原倍差异无统计学意义(P>0.05);干扰组1∶8稀释后DD、FDP/DD比值与原倍比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FDP/DD比值在两种检测系统的差异有统计学意义;能为临床DIC早期高凝阶段的诊断提供帮助;能有效识别DD检测干扰。

新型冠状病毒核酸检测结果可比性及试剂选择策略探究

目的:通过分析13个SARS-CoV-2核酸检测体系临床阳性样本病毒载量与Ct值相关性及偏倚,探讨不同检测体系的结果可比性、检出限及试剂选择策略。方法:选择13个SARS-CoV-2核酸检测体系,以中国计量科学研究院标准物质倍比稀释作为标准曲线与已经过数字PCR方法赋值的临床阳性样本同时检测,采用SPSS22.0统计分析,Graph-PadPrism7.0及Medcale15.0软件绘图,统计分析临床阳性样本Ct值与病毒载量相关性、与赋值浓度的偏倚及13个检测体系的实际检出限。结果:13种检测体系中均显示病毒载量与Ct值之间相关性强,ORF1ab、N、E基因的线性回归系数分别为0.8400~0.9921、0.8674~0.9668、0.8717~0.9768;配套体系同种扩增试剂磁珠提取法优于核酸释放剂免提取法;非配套体系同种试剂不同检测体系线性回归相关系数存在较大差异。用标准曲线计算临床阳性样本ORF1ab、N、E基因结果存在差异;临床阳性样本中N基因的检出浓度高于ORF1ab的检出浓度;与数字PCR结果赋值存在较大偏倚,无法通过偏倚<7.5%,通过率≥80%的标准。利用标准曲线计算13种检测体系ORF1ab、N、E基因的检出限,与各试剂宣称的检出限之间存在差异,各体系的检测结果可比性差。结论:SARS-CoV-2核酸检测试剂检测基因的线性相关性配套体系优于非配套体系,实验室应尽可能选用配套检测体系,否则应摸索最优的检测体系。临床阳性样本的结果与赋值结果存在较大偏倚,各试剂检出限宣称值与真实值之间存在较大差异,试剂间可比性差。在暂无法实现SARS-CoV-2检测的标准化的情况下,建议实验室通过标准物质绘制标准曲线确定检测体系实际检出限的方式判断试剂真实检出限,指导初复检试剂的确定。

中国福州地区地中海贫血基因突变类型分析

目的:了解福州地区α、β-地中海贫血基因突变类型及分布。方法:对2013年7月-2018年3月在我院进行体检、产检、孕前检查及疑似地中海贫血人群,采用Gap-PCR及RDB-PCR的方法检测α-或β-地中海贫血基因。结果:2 074例疑似人群中确诊1 042例,检出率为50.24%。确诊α-地中海贫血618例(29.80%);β-地中海贫血409例(19.72%);αβ-复合型地中海贫血15例(0.72%)。α-地中海贫血基因型以--SEA/αα(76.54%)为主,其次是-α3.7/αα(10.03%)和-α4.2/αα(2.91%);并发现新的IVS-II-55(T->G)和IVS-II-119(-G,+CTCGGCCC)α突变;β-地中海贫血基因型以IVS-2-654(C→T)(40.83%)为主,其次为CD41-42(-TCTT)(35.94%)和CD17(A→T)(9.78%)。结论:福州地区地中海贫血基因类型复杂多样,α-地中海贫血以--SEA/αα基因型最为常见,β-地中海贫血则以IVS-2-654(C→T)最为常见,并发现了2种人类异常血红蛋白地贫库上未见报道的新α突变位点。

改变离心条件对凝血七项的影响分析

目的探讨通过改变离心条件缩短凝血常规检验的检测周转时间的可行性.方法选择(1500g,15 min)、(2000g,10min)、(2500g,5min)3种离心条件,分别验证离心后血浆中是否PLT<10×10^(9)/L,RBC是否破坏,凝血七项(PT、APTT、Fib、TT、AT、DGD、FDP)结果是否一致,凝血因子Ⅴ、Ⅷ活性是否改变.结果当PLT≤500×10^(9)/L,3种离心条件下血浆PLT均<10×10^(9)/L;当PLT>500×10^(9)/L,(1500g,15min)、(2000g,10min)离心上清液PLT均<10×10^(9)/L,2500g,5min离心时有2例(90%)未满足要求.3种离心条件下RBC、Hb与离心前比较偏倚均在允许范围内(RBC80%<3.0%,Hb80%<3.5%).以行业标准规定的(1500g,15min)为标准,(2000g,10min)、(2500g,5min)离心PT、APTT、Fib的偏倚满足«临床血液学检验常规项目分析质量要求»,TT、AT、DGD、FDP差异无统计学意义(P>0.05).凝血因子Ⅴ、Ⅷ的偏倚80%<1/3卫生部室间质评允许总误差(25%),满足比对要求.结论为提高检验效率,尤其是在危急病人的救治中,某些凝血常规项目检测可提高离心力以缩短离心时间,保证后续的快速检测.

低分子肝素钠对急性心肌梗死患者的影响

目的:探究低分子肝素钠对急性心肌梗死患者的影响。方法:选取2019年12月-2021年3月福建省立医院92例急性心肌梗死患者为研究对象。根据随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组46例。两组均采用阿替普酶进行治疗,对照组给予肝素钠注射液,观察组则给予低分子肝素钠注射液。比较两组临床疗效、首次ST段回落>50%时间、胸痛缓解时间、不良反应、治疗前及治疗1、3 d抗Ⅹa活性、APTT及血小板活化指标。结果:观察组临床总有效率显著高于对照组(P<0.05)。观察组首次ST段回落>50%时间及胸痛缓解时间均显著优于对照组(P<0.05)。观察组不良反应发生率显著低于对照组(P<0.05)。治疗1、3 d,观察组抗Ⅹa活性显著高于对照组,APTT显著长于对照组(P<0.05)。治疗1、3 d,观察组CD41、CD62P及CD63均显著低于对照组(P<0.05)。结论:低分子肝素钠在急性心肌梗死患者中的应用效果较好,且可显著改善抗Ⅹa活性、APTT及血小板活化,因此在急性心肌梗死患者中的应用价值较高。

利用TCGA数据集分析LncRNA LINC00319在肺腺癌中的表达及临床意义

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00319在肺腺癌及其癌旁组织中的表达及临床意义。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载516例肺腺癌组织(肿瘤组)与59例癌旁组织(癌旁对照组)RNAseq数据及对应的肺腺癌患者临床数据,对数据中LINC00319基因表达进行分析处理。分析比较其表达与肺腺癌临床病理特征的相关性及对预后的影响。通过COX风险比例模型评估肺腺癌患者预后的独立危险因素。采用基因集富集分析(GSEA)方法预测LINC00319功能富集的分子通路。结果LINC00319在肿瘤组中的表达水平显著高于癌旁对照组(P<0.05),其表达水平与性别、年龄、N分期无关(P>0.05),与吸烟、T分期、M分期以及Stage分期显著相关(P<0.05),生存分析显示肺腺癌患者中高LINC00319表达水平预示预后差(P<0.05)。多因素COX风险比例模型结果显示,高表达水平、Ⅲ+Ⅳ及T3+T4是肺腺癌患者预后差的独立危险因素(P<0.05)。在GSEA分析中,发现LINC00319功能主要富集在细胞黏附、细胞因子相互作用、血管内皮生长因子信号通路、细胞凋亡等通路中。结论LINC00319可能通过多种途径促进肺腺癌的发生、发展,进而影响肺腺癌患者的预后生存,因此,LINC00319可作为肺腺癌患者的预后标志物或潜在治疗靶点。

肺腺癌细胞源性外泌体活化的人THP-1巨噬细胞促进肺癌细胞的侵袭

目的研究肺腺癌细胞来源的外泌体对巨噬细胞极化的作用及受外泌体作用后的巨噬细胞对肺癌细胞生物学行为的影响。方法提取A549和H1299肺腺癌细胞外泌体,Western blot法检测其表面标志物CD9、CD63进行鉴定。100 ng/mL佛波酯(PMA)处理人THP-1细胞48 h,实时定量PCR检测细胞CD68的mRNA水平。200μg/mL外泌体处理贴壁巨噬细胞24 h后,实时定量PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、CD163的mRNA水平,IMMULITE 1000化学发光免疫分析仪检测白细胞介素6(IL-6)、IL-8、IL-10的蛋白水平;将外泌体处理后的巨噬细胞分别与A549细胞和H1299细胞共培养,通过TranswellTM实验检测肺腺癌细胞侵袭能力,实时定量PCR检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9的mRNA水平。结果CD9、CD63在外泌体高表达,PMA诱导后的巨噬细胞高表达CD68,外泌体处理后的巨噬细胞iNOS表达降低,CD163、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10表达水平均增加;外泌体处理后的巨噬细胞与肺腺癌细胞共培养,可增强肺腺癌细胞的侵袭能力并促进MMP2、MMP9的表达。结论肺腺癌细胞来源的外泌体可以诱导巨噬细胞极化,表现为M1/M2的混合表型,进而增强肺癌细胞的自身侵袭能力。

福州地区体检女性HPV感染及基因亚型分析

目的了解福州地区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及其基因亚型分布特点,为该地区宫颈癌的预防、诊治提供理论依据。方法收集2014年2月—2017年12月福建省立医院18 542位体检女性宫颈脱落细胞样本,采用通用引物多重聚合酶链反应(PCR)及流式荧光杂交分型法检测HPV的27个基因亚型。结果18 542例样本中HPV阳性2 902例,阳性检出率为15.7%。27个基因亚型均被检出,高危型居前4位的依次为52、58、53和16型,低危型居前4位的依次是61、81、44和55型;单一感染2 267例(78.1%),二重感染493例(17.0%);不同年龄段女性HPV阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论福州地区体检女性HPV感染高危型别为52、58、53和16型,以单一感染和二重感染为主。加强对50岁以上女性的HPV筛查工作,对于宫颈癌的预防及早期治疗具有重要意义。

GPR37在肺腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨G蛋白偶联受体37(GPR37)基因在肺腺癌中的表达情况及其临床意义。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载510例肺腺癌组织(肿瘤组)RNA序列及对应的患者临床数据,其中包括56例癌旁组织(癌旁对照组)的相关数据,对GPR37的表达与肺腺癌临床病理特征的相关性进行分析比较。结果肿瘤组的GPR37的表达水平高于癌旁对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素COX逻辑回归分析显示,GPR37的表达水平与性别、年龄以及M分期无关,差异无统计学意义(P>0.05),与T分期及N分期有关,差异有统计学意义(P<0.05)。生存预后分析结果显示,GPR37表达水平与肺腺癌患者预后有显著相关性,差异有统计学意义(P<0.05),表达越高,预后越差。多因素COX风险比例模型结果显示,高GPR37表达水平、Stage分期是肺腺癌患者预后差的独立危险因素。结论依据GPR37在肺腺癌中高表达,推测其在肺腺癌的发生发展过程中可能发挥了一定的作用,从而影响了肺腺癌患者的预后。因此,GPR37可作为肺腺癌潜在治疗靶点或诊断标志物。

光散射法检测脂血标本血红蛋白的应用评价

目的评估光散色法检测脂血标本中血红蛋白(Hb)的能力, 探索替代实验室常用的血浆置换法的可行性。方法收集福建省立医院2020年7月至2021年7月福建省立医院住院患者血常规标本276份。其中男169例, 女107例, 年龄16~97岁。其中非脂血标本183份、脂血标本93份。(1)非脂血和脂血标本 Hb低值、中值、高值各1份, 检测光散射法精密度和线性。(2)非脂血标本分为Hb低值组、Hb中值组、Hb高值组, 分别用光散射法和比色法测Hb, 并对两者进行比较。(3)非脂血标本分为Hb低值组、Hb中值组、Hb高值组, 分别用不同浓度脂肪乳进行血浆置换, 采用MedCalc19.1软件分析Hbc2与Hbc1、Hbo2与Hbc1的偏倚及线性;计算Hbc2与Hbc1偏倚(CV%)、Hbo2与Hbc1偏倚(CV%), 应用SPSS 24软件t检验, 分析不同浓度甘油三脂对Hb结果偏倚的影响。(4)脂血标本分为HB低值组、Hb中值组、Hb高值组, 对光散色法Hb与血浆置换后比色法Hb进行比较。结果 (1)非脂血和脂血标本光散射法批内精密度在允许范围内(CV<1.5%), 线性良好(R2=1.000)。(2)3组非脂血标本光散射法HB与比色法HB偏倚均<3.5%(-0.58±2.34, 0.16±1.52, 1.15±1.56), 在允许总误差范围内;2种方法具有等效性和良好的线性关系(r=0.999)。(3)血浆置换后光散射法(Hbo2)低值组(除4.1 mmol/L)、中值组、高值组各浓度与非脂血比色法(Hbc1)具有等效性, 且2种方法具有良好的相关性。光散射法检测结果与脂血浓度无关。(4)3组脂血标本光散射法HB与血浆置换法Hb结果差异无统计学意义(P>0.05), 两者具有等效性和良好的相关性(R^(2)=0.968, 0.948, 0.870)。结论光散色法能够有效排除脂血对血红蛋白测定的影响, 能替代传统的血浆置换法, 具有较高的临床应用价值。

肺腺癌组织lncRNA FAM83A-AS1表达及临床意义数据库分析

目的肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)广泛参与了肿瘤的发生、进展和转移等过程。本研究利用癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)公共数据集分析lncRNA FAM83A-AS1在肺腺癌中的表达及临床意义。方法从TCGA中下载2020年2月前517例肺腺癌组织与59例癌旁组织RNA的测序数据及对应的患者临床资料,探讨FAM83A-AS1表达水平与临床病理特征的相关性及其对肺腺癌的诊断意义。采用Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型进行生存分析探讨影响肺腺癌患者预后的因素。预测筛选肺腺癌中FAM83A-AS1相关的mRNA,通过String和CytoScape软件构建蛋白质相互作用(protein&protein interaction,PPI)网络并进行基因本体论(gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。结果肺腺癌组织中FAM83A-AS1表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001)。FAM83A-AS1高表达与年龄(χ^(2)=5.814,P=0.020)、肿瘤晚期(χ^(2)=9.336,P=0.003)、淋巴结远处转移(χ^(2)=10.685,P=0.001)和吸烟(χ^(2)=11.859,P=0.001)有关。FAM83A-AS1的表达水平用于鉴别肺腺癌组织与正常肺组织,其ROC曲线下面积为0.969 4。生存分析结果显示,FAM83A-AS1高表达患者总体生存率(overall survival,OS)较低(χ^(2)=10.660,P=0.001),无复发生存率(recurrence free survival,RFS)较低(χ^(2)=6.171,P=0.013)。Cox多因素回归分析结果显示,FAM83A-AS1高表达是影响OS(HR=1.681,95%CI为1.112~2.539,P=0.014)和RFS(HR=1.510,95%CI为1.093~2.086,P=0.012)的独立预后危险因素。GO和KEGG分析结果表明,FAM83A-AS1可能富集在细胞形成、细胞黏附迁徙、神经元生成分化等功能以及MAPK信号通路、肿瘤通路、轴突导向、胰岛素信号通路和Wnt信号通路中。结论 FAM83A-AS1可能参与肺腺癌的发生,提示FAM83A-AS1可能是肺腺癌的潜在治疗靶点,并具有作为肺腺癌患者的诊断及预后标志物的潜能。