盐酸丁卡因胃/肠镜润滑剂在比格犬体内的药动学和毒性研究

通过对比格犬单次灌胃或直肠给予盐酸丁卡因胃/肠镜润滑剂,观察动物的临床反应,测定盐酸丁卡因在体内的浓度,对主要的组织脏器进行大体剖检,并测量脏器重量及系数,以了解其在动物体内的药动学和毒性反应.将8只普通级比格犬,随机分为灌胃组和直肠组,每只犬分别单次灌胃或直肠给予10 mL盐酸丁卡因胃/肠镜润滑剂(含盐酸丁卡因80 mg).结果显示,各动物的外观体征、行为活动、呼吸和粪便等均未见明显异常,摄食正常,体重正常增长;与给药前相比,各动物在给药后4 h体温下降、心率减慢、Q-T间期和T波时间延长,为盐酸丁卡因的麻醉药效作用所致;各动物的血液学、血液生化学、主要脏器重量和系数及大体剖检均未见明显异常;单次灌胃或直肠给予后的平均达峰时间分别为0.63和0.44 h,平均消除半衰期分别为1.20和3.36 h,平均药时曲线下面积分别为60.44和60.19μg/L*h,提示吸收进入血液的药量较少,大部分留在局部发挥润滑和麻醉作用.

骨髓间充质干细胞对类风湿关节炎小鼠干预效果研究

目的利用自发类风湿关节炎小鼠模型(Tg-huTNFα小鼠),探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对类风湿关节炎及其继发骨量丢失的影响。方法3周龄Tg-huTNFα小鼠分为3组:(1)模型组(Model),每周腹腔注射1次0.1 mL/10 g的生理盐水;(2)huTNFα抗体干预组(Anti-huTNFα),每周腹腔注射1次10 mg/kg的huTNFα抗体;(3)BMSCs干预组(BMSCs),每周双侧膝关节腔各注射1次5×10^(6) Cells的BMSCs。干预期间每周称量1次动物体重,同时对踝关节进行临床评分,各组动物干预10周后处死取材。利用流式细胞仪分析外周血T细胞、B细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比例,液相芯片法检测血清中huTNFα、IL-4及IL-1β含量,HE染色后评价左侧膝关节和踝关节病理改变,骨形态计量学方法分析右侧股骨骨结构变化。结果与模型组比较,BMSCs和Anti-huTNFα干预均可缓解Tg-huTNFα小鼠体重的下降,抑制小鼠关节肿大变形,下调外周血huTNFα含量,降低Tg-huTNFα小鼠的关节病理评分,减少关节滑膜和软骨损伤面积。此外,骨形态计量学分析发现,BMSCs干预可提高骨小梁数量和骨小梁面积百分数等,改善Tg-huTNFα小鼠股骨骨结构。结论关节腔注射BMSCs可以显著缓解Tg-huTNFα小鼠类风湿关节炎症状,改善股骨骨结构,缓解RA继发的骨量丢失。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌系统性感染小鼠模型的制备

目的采用临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染ICR小鼠,建立MRSA系统性感染小鼠模型。方法采用连续3 d腹腔注射环磷酰胺（100 mg/kg）进行免疫抑制后,将浓度为1×10^7cfu/m L的MRSA菌液经尾静脉接种ICR小鼠,通过生存分析、外周血白细胞计数、组织载菌量和病理学检查对模型进行评价。结果 MRSA接种后第2天小鼠开始死亡,14 d内累积死亡率达60%;外周血白细胞总数显著升高,细菌在多个器官定植,载菌量由高到低依次是肾、关节、肺、肝和脑,肾载菌量高达10^9CFU/g,关节、肺、肝和脑的载菌量范围在10^4～10^9CFU/g。病理观察显示肾、心脏、肺、肝、脑和关节多器官感染的组织病理学改变。结论采用环磷酰胺免疫抑制后静脉接种MRSA的方法首次成功建立MRSA系统性感染小鼠模型,该模型可应用于MRSA发病机理及药物筛选等研究领域。

不同浓度含铬垫料对小鼠血液学及脏器的毒性观察

目的评价不同浓度含铬垫料对BALB/c裸小鼠及KM小鼠血液学及脏器的毒性影响。方法制备稳定的不同浓度含铬垫料,48只BALB/c裸小鼠及48只KM小鼠分别被随机分为4组,每组12只,雌雄各半。对照组垫料铬含量为(2.30±1.12) mg/kg、低、中和高剂量组垫料铬含量分别为(15.50±0.71) mg/kg、(71.50±3.54) mg/kg和(347.00±35.36) mg/kg。小鼠分别于不同垫料中饲养15周,每周更换1次垫料,每日对动物进行一般观察,于饲养15周采血解剖,检测血常规、血生化、脏器系数及脏器病理等。结果 BALB/c裸小鼠及KM小鼠饲养于不同铬含量垫料中15周,大体观察未见异常,动物均未见死亡,大体解剖均未见异常;与对照组比较,血常规指标及脏器系数均未见明显差异;血液生化检查发现BALB/c裸小鼠低、中、高剂量组血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)及尿素氮(BUN)水平均显著升高,中、高剂量组碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(Crea)水平显著升高,而低、高剂量组甘油三脂(TG)水平显著下降,KM小鼠血液生化指标均未见明显差异;病理检查发现,2种小鼠各剂量组均出现不同程度的肝脏局灶性炎细胞浸润、肝细胞水肿、肾脏炎性细胞浸润、睾丸曲细精管萎缩及卵巢黄体数量减少等改变。结论本实验垫料中六价铬含量达到(15.50±0.71) mg/kg及以上时可导致BALB/c裸小鼠及KM小鼠出现不同程度的肝、肾、睾丸及卵巢毒性。

护骨胶囊对骨质疏松大鼠五脏和胸腺的影响

目的:建立去势雌性大鼠骨质疏松模型,探讨护骨胶囊对骨质疏松大鼠主要脏器的影响。方法:将50只雌性大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、卵巢切除组(OVX组)和护骨胶囊低剂量组(HG-L组)、护骨胶囊中剂量组(HG-M组)、护骨胶囊高剂量组(HG-H组)。卵巢切除手术后2天开始给药,每天1次,共计3个月,取大鼠主要脏器称重及组织学观察分析。结果:与Sham组相比,OVX组大鼠脾脏重量明显增加,胸腺重量明显下降;与OVX组相比,HG-M组脾脏和HG-L组胸腺重量明显增加;与Sham组相比,OVX组心、肝、脾、肾脏和胸腺的组织形态无明显变化,而肺脏有轻度变化;与OVX组相比,各药物组脾、肝、肺、肾脏和胸腺未见明显病理改变,心脏有轻微改变。结论:护骨胶囊治疗3个月后,卵巢切除大鼠主要脏器的组织形态未发生明显病理改变,提示护骨胶囊的临床用药安全性。

附子与山茱萸配伍对慢性心力衰竭大鼠的影响

目的探讨附子与山茱萸配伍对慢性心力衰竭大鼠增效减毒作用。方法 ip盐酸阿霉素构建大鼠慢性心力衰竭模型,分别给予附子提取物、山茱萸提取物和附子-山茱萸提取物3周后,检测动物血清脑钠素(BNP)含量,心肌细胞Ca2+-ATP酶和Na^+,K^+-ATP酶活性,镜下观察左心室组织病理学形态变化。结果造模3周后,模型组大鼠普遍出现腹水、消瘦、稀便、弓背等症状体征;左心室射血分数(EF)和左心室短轴缩短率(FS)明显下降;血清BNP水平显著升高;左心室组织出现心肌纤维断裂及心肌细胞变性、坏死等病理改变。连续ig给予附子-山茱萸提取物3周后,大鼠症状及体征明显改善,血清BNP水平下降,心肌细胞Na^+,K^+-ATP酶活性升高,左心室组织病理学形态有明显改善。附子提取物和山茱萸提取物分别连续给药3周,上述指标未见明显改善。结论附子与山茱萸配伍可能通过提高心肌细胞Na^+,K^+-ATP酶活性,改善慢性心力衰竭的心肌能量代谢障碍,提高心力衰竭的心肌活性,起到增效减毒作用。

注射用头孢曲松钠溶血性、局部刺激性和过敏反应一致性评价

目的采用溶血性、血管刺激性试验、肌肉刺激性试验和全身主动过敏试验(ASA)检测受试物注射用头孢曲松钠与市售对照品(罗氏芬)局部毒性和过敏性,进行一致性评价。方法分别采用肉眼观察法和分光光度法进行体外溶血性试验;以受试物或市售对照品临床iv最高浓度(93 mg·mL^(−1))连续4 d耳缘静脉推注给药进行新西兰兔血管刺激性试验;以临床im最高浓度(238 mg·mL^(−1),给药体积1 mL)连续4 d右后肢股四头肌im给药进行新西兰兔肌肉刺激性试验;采用传统豚鼠ASA进行过敏性试验,致敏剂量分别0.5、1.5 mg·kg^(−1),激发剂量分别为1.0、3.0 mg·kg^(−1)。结果肉眼观察法和分光光度法均显示受试物及市售对照品无体外溶血和红细胞凝聚作用;临床等效剂量的受试物及市售对照品均无血管刺激性;最大给药浓度的受试物及市售对照品在末次给药后72 h均有重度肌肉刺激性,恢复期结束时受试物组与市售对照品组动物注射部位肌肉均见纤维化等正常修复现象;受试物及市售对照品均可见弱阳性全身致敏作用,结果具有一致性。结论受试物注射用头孢曲松钠与市售对照品局部毒性反应和过敏反应情况基本一致,可用于临床。

重组人促红素注射液(CHO细胞)食蟹猴重复给药毒性试验研究

目的研究重组人促红素注射液(CHO细胞)对食蟹猴的长期毒性,预测各组织器官的潜在毒性反应。方法18只普通级成年食蟹猴根据体质量随机分为阴性对照组(生理盐水)和重组人促红素注射液(CHO细胞)低(每周500 IU/kg)、高剂量(每周1500 IU/kg)组,每组6只,雌雄各半;受试品经后肢大腿外侧sc注射给药,每周3次,连续4周;给药结束后,每组处死4只动物(雌雄各半),其余动物停药后进行4周恢复期观察;观察指标包括动物外观体征、行为活动、精神状态等情况,并进行体质量、体温、眼科、心电图、血常规、凝血指标、血生化、免疫细胞检测及组织病理学检查。结果在8周观察期内,各组动物外观体征、行为活动、精神状态、体质量、体温、眼科、心电图、凝血指标、血生化、大体解剖等均未见异常;血常规检查发现,与阴性对照组比较,受试品低、高剂量组红细胞(RBC)、网织红细胞(RET)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板数(PLT)给药后显著升高(P<0.05),淋巴细胞数(LYMPH)显著降低(P<0.05),停药4周后RET、PLT及LYMPH恢复正常水平,而RBC、HGB及HCT仍维持较高水平;免疫细胞检查发现,与阴性对照组比较,给药4周后高剂量组CD3+T细胞比例显著减少,4周后恢复正常水平;病理检查发现,高剂量组3只动物出现股骨骨髓轻度红系增生。结论给予食蟹猴每周1500 IU/kg(相当于10倍临床剂量)重组人促红素注射液(CHO细胞)未发现明显毒性反应,血常规指标及病理学的改变与其药理作用相关。

HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中伏立康唑和卡泊芬净及其药动学初步研究

目的建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定大鼠血浆中伏立康唑和卡泊芬净的浓度,并用于伏立康唑和卡泊芬净单独给药和联合给药后SD大鼠体内的药动学初步研究。方法伏立康唑、卡泊芬净分别以氘代伏立康唑和氘代卡泊芬净为内标,血浆样品经乙腈提取,以0.1%甲酸-乙腈和0.1%甲酸-水为流动相,用Phenomenex Synergi Hydro-RP 80A柱进行梯度分离,0.5 mL/min体积流量,柱温为常温,10μL进样量,多级反应监测(MRM)ESI正离子模式;12只SD大鼠随机分成3组,即伏立康唑(ig,40 mg/kg)组、卡泊芬净(iv,5 mg/kg)组、伏立康唑(ig,40 mg/kg)与卡泊芬净(iv 5 mg/kg)联合给药组,分别于给药后不同时间点颈静脉采血进行浓度测定,并计算药动学参数。结果伏立康唑在0.5~500.0 ng/mL、卡泊芬净在4~4000 ng/mL线性关系均良好,批内精密度(RSD%)和准确度(RE%)均小于10%,伏立康唑和卡泊芬净提取回收率均大于90%;SD大鼠单剂量联合给予伏立康唑和卡泊芬净后,伏立康唑消除变快,卡泊芬净的消除变慢;伏立康唑、卡泊芬净的Cmax、AUC均高于单独用药。结论HPLC-MS/MS法的专属性强、灵敏、准确、可靠,可用于测定SD大鼠血浆中伏立康唑和卡泊芬净的浓度及药动学研究。伏立康唑延缓了卡泊芬净在动物体内的消除速度,卡泊芬净通过促进伏立康唑的吸收,增加了其在动物体内的血药浓度,联用后二者生物利用度均提高。

HPLC法测定附子山茱萸联合给药后大鼠心肌组织中磷酸腺苷、磷酸肌酸和肌酐

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定附子山茱萸联合给药后大鼠心肌组织中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、磷酸肌酸(PCr)和肌酐5种物质含量的方法,用于慢性心衰大鼠心肌组织样品能量物质的测定。方法考察色谱条件(色谱柱、流动相、柱温、检测波长、进样量、洗脱梯度和洗脱时间等);评价该方法的精密度、线性和回收率、检测限与定量限、稳定性等。结果专属性、线性、精密度、回收率、稳定性均良好,能满足后续研究的需要。动物给药后能量物质均有不同程度升高,且联合给药效果更显著。结论方法检测结果可靠、操作简便;检测方法可用于慢性心衰大鼠心肌组织样品能量物质的测定。