肉桂挥发油对小鼠的半数致死量测定

目的研究肉桂挥发油对小鼠的半数致死量(LD50)。方法将肉桂油系列浓度提取物分别给予小鼠一次性灌胃,观察给药后7d内小鼠的毒性反应和死亡情况。以小鼠急性病死率为指标,求肉桂挥发油对小鼠的LD50及其95%的可信限。结果肉桂挥发油的LD50为5.0381g/kg(相当于236.5323g原生药/kg)。结论肉桂挥发油毒性较低,临床用药安全可靠。

国产β-淀粉样蛋白聚合寡聚体的方法及效果初探

目的探讨国产人源性β-淀粉样蛋白(Aβ)聚合寡聚体的方法及其聚合效果。方法 Aβ40、Aβ42室温条件分别溶解于纯度≥99.0%的六氟异丙醇中,使Aβ浓度至1 mmol/L、20 min;高纯氮处理使六氟异丙醇完全挥发后,添加纯度≥99.5%的二甲基亚砜,使Aβ浓度至6 mmol/L,30℃水浴超声10 min;添加含0.05%十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液(0.02 mol/L,p H7.4),Aβ浓度至120μmol/L;再用上述缓冲液分别稀释Aβ至40、80μmol/L,形成3种浓度梯度。37℃恒温摇床100 r/pmin行聚合反应2、12、24、48、72、96和120 h;SDS-PAGE,银染处理,分别考察上述条件的聚合效果。结果 3种浓度的Aβ40寡聚体聚合效果有很大差异:40μmol/L聚合48、120 h,80μmol/L聚合12 h有较明显的二十二聚体出现,120μmol/L聚合≥12 h,有四聚体至十聚体形成。但3种浓度Aβ40形成寡聚体又有一定相似性:均有大量的单体、二聚体、三聚体存在,随着聚合时间延长,寡聚体总量及高分子量寡聚体形成量并未明显增加。3种浓度的Aβ42聚合效果有明显区别:随着聚合浓度升高,十二聚体、二十一聚体的形成量逐渐下降,相同聚合时间内,随着浓度的升高,四聚体至十聚体形成量逐渐增加;但3种浓度的Aβ42聚合也有相似处:均存在大量的单体、二聚体、三聚体,随着聚合时间的延长,四聚体至十聚体形成量有增加趋势,此与Aβ40聚合效果有明显差异。结论采用常用的方法均能使国产Aβ40、Aβ42形成寡聚体;总体来讲,相对于聚合时间,聚合浓度对形成高分子量的Aβ寡聚体种类影响较大。

新型凝胶纯化凝血酶原复合物的工艺探讨

目的探索新型凝胶Capto DEAE离子交换柱层析纯化凝血酶原复合物的工艺条件。方法健康人混血浆经离心去除冷沉淀后,采用DEAE-Sephadex A-50凝胶进行吸附,经洗涤、洗脱得到洗脱液;将得到的洗脱液超滤脱盐后,再通过Capto DEAE凝胶柱纯化,制备凝血酶原复合物（prothrombin complex concentrates,PCC）。测定PCC中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及抗凝蛋白C的活性并计算收率;采用Bradford法测定PCC蛋白浓度,再根据测定的4种凝血因子和蛋白C的活性,计算有效成分的比活;以此分析所选工艺条件下Capto凝胶对PCC的纯化效果。结果不同实验方案下,所得制品中FⅡ、FⅨ、FⅩ收率和纯度均较高,且该3种凝血因子均衡度较好;但FⅦ收率和纯度均较低;其中A方案下PCC收率和纯度较好,即Capto DEAE凝胶体系平衡液、洗涤液、洗脱液中柠檬酸钠、Na Cl、p H分别为0.020-0.028 mol/L、0.10-0.15 mol/L、6.9-7.2;0.012-0.020 mol/L、0.10-0.15 mol/L、6.9-7.2;0.005-0.012 mol/L、2.4 mol/L、7.2-7.5时,FⅨ收率为（74.40±10.89）%,比活为（3.31±0.31）IU/mg,抗凝蛋白C的收率和比活均较高。结论采用DEAE-Sephadex A-50批式吸附及Capto DEAE柱层析相结合的新方法制备PCC,在所选择条件下,PCC制品的纯度为2.17-3.31 IU/mg,远优于传统工艺制得的产品,此为高品质PCC的制备提供了新的方法。

两种因素对体外聚合β淀粉样蛋白寡聚体的影响

目的探讨β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)起始聚合浓度及PBS体系中添加SDS对Aβ寡聚体生成的影响。方法 Aβ_(40)、Aβ_(42)经六氟异丙醇(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol,HFIP)单体化处理后,分别溶于PBS及添加0.05%SDS的PBS中,Aβ样本250、125、62.5、31.2、15.6及7.8μmol/L梯度聚合,37℃恒温,100 r/min聚合72 h后,进行SDS-PAGE分析。结果 Aβ_(40)、Aβ_(42)聚合的寡聚体生成量随着Aβ起始浓度的升高而增加。Aβ_(40)在无SDS制备条件下能生成大量二聚体、三聚体及少量十二聚体;SDS制备条件下生成二聚体及少量十二聚体。无SDS制备条件250、125及62.5μmol/L浓度的Aβ_(42)能生成三聚体及中、高相对分子质量的寡聚体弥散带;SDS制备条件250、125、62.5μmol/L浓度的Aβ_(42)可生成三聚体及中等相对分子质量的寡聚体,31.2μmol/L浓度的Aβ_(42)可生成低、中、高相对分子质量的寡聚体。结论适合的起始聚合浓度有利于Aβ_(40)、Aβ_(42)寡聚体的生成;PBS中添加0.05%SDS有利于生成稳定的Aβ_(42)寡聚体,但不利于Aβ_(40)寡聚体的生成。