日本大耳白兔TLR3部分cDNA克隆及mRNA在组织中的分布

采用RT—PCR技术从日本大耳白兔的脾脏组织克隆出兔的Toll样受体基因3（命名为。TLR3），并对其mRNA在兔的17种组织中的分布情况进行了检测。结果显示，RTLR3核苷酸序列与GenBank中登载的穴兔（Oryctolagus cuniculus）TLR3序列（登录号：NM_001082219）相似性为100％；兔的胸腺、脾脏、睾丸等14种组织中检测出TLR3 mRNA的转录产物，而在骨骼、胃和皮肤中未能发现。推导的氨基酸序列同源性比对表明，兔TLR3与人、野猪、牛、猫、褐鼠等动物的同源性最高，为80％-85％；与原鸡同源性次之，为61％；与草鱼、绿河豚等同源性在45％～48％之间；系统进化树分析表明，兔TLR3与马的亲缘关系最接近，与猪、人／绵羊、牛、猩猩／猫的亲缘关系依次渐远，与鼠的亲缘关系最远。可见，TLR3在不同种属动物及不同组织中所起的作用具有生物多样性。

兔TLR2 TLR4部分cDNA克隆及其在组织中的分布

从日本大耳白兔的脾脏组织克隆出Toll样受体基因2（RTLR2）和Toll样受体基因4（RTLR4）,并对其在兔的17种组织中的表达分布进行了检测。RTLR2和RTLR4核苷酸序列与GenBank中登载的穴兔（Oryctolagus cuniculus）TLR2序列（NM_001082781）、TLR4序列（NM_001082781）的相似性分别为99%和100%;推导氨基酸序列的同源性比对发现,与人、马、野猪、猫、猩猩、牛、绵羊和鼠等8种动物相比,RTLR2与马的同源性最高,为80%,与鼠最低,为61%,而RTLR4与这几种动物的同源性在62%-5%之间;兔的胸腺、盲肠、睾丸等15种组织中均检测到TLR2和TLR4 mRNA的转录产物,但骨骼中未发现TLR2和TLR4,TLR4在皮肤中也未见表达。

鸭肝炎病毒基因的生物信息学分析及多聚蛋白的加工预测

对NCBIGenBank中登录的鸭肝炎病毒1型(DHV-1)全基因组及VP1基因进行生物信息学分析,27株DHV-1全基因组序列其核苷酸同源性分别为93.3%～99.8%、多聚蛋白氨基酸序列同源性则达97%～99.8%,DHV-1和其他小RNA科病毒的多聚蛋白的氨基酸序列同源性均低于30%,多聚蛋白氨基酸序列进化分析显示DHV-1在小RNA科病毒上形成一个独立的进化分支。因此,应在小RNA病毒科中设立一个DHV-1的新病毒属。分析发现,在DHV-1 VP1区存在多个免疫优势辅助性T淋巴细胞抗原位点及其抗原决定簇。在DHV-1多聚蛋白的第1757aa～1761aa位,出现3C蛋白酶(3Cpro)的共有基序Gly-Ser-Cys-Gly-Gly,同时发现在751aa/752aa处存在自我切割基序NPG↓P。推测在整个DHV-1多聚蛋白的切割过程中首先进行NPG↓P切割,形成P1,P2-P3前体蛋白,进而再由3Cpro对2个前体蛋白进行二级加工,最终DHV-1多聚蛋白总共被切割成12个成熟产物,形成其结构蛋白与非结构蛋白。

改进摆放方法对双关节咬骨钳清洗质量的影响

目的为提高双关节咬骨钳的清洗质量,降低院感发生率,确保病人安全,探索一种合理有效的摆放方法。方法将回收的污染双关节咬骨钳608件,随机分成两组,常规组304件采用传统摆放方式直接放于清洗框中,改进组304件在双关节处夹棉杆,比较两组裸眼目测,带光源放大镜目测及潜血试验的合格率。结果改进组清洗合格率高于常规组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论改进后的清洗方法,可大大提高咬骨钳的清洗质量,可操作性强,值得推广。

我国猪病主要流行病因及临床流行特点与防制

国内养猪者的思想观念和养殖环境决定了我国猪业的生物安全体系还不能适应健康猪的需求,多种疫病的病源污染状况没有根本改变,猪病的防控形势仍然严峻。面对我国养猪生产中存在的众多复杂的疫病问题,分析和预测我国猪病的流行态势,最大限度地控制好疫病、尽可能地降低因疫病造成的经济损失,保障养猪生产健康、稳定的发展,为民生大众提供安全食品,就成为兽医、兽药科技人员当前最为迫切的重任。

川渝地区奶牛隐性乳房炎调查和主要病原菌分离鉴定及药敏试验

用LMT法对川渝地区134头泌乳奶牛的491个乳区进行隐性乳房炎发病情况调查,并对阳性乳样进行主要病原菌的分离鉴定及药敏试验。结果显示,被检奶牛患隐性乳房炎头阳性率为70.90%,乳区阳性率为35.64%,175份阳性乳样的细菌检出率为90.86%,病原菌单独感染率为10.69%,混合感染率为89.31%;共分离到金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌3种主要病原菌134株,其中金黄色葡萄球菌93株,占分离菌株的69.40%,链球菌34株,占25.37%,大肠杆菌7株,占5.23%;主要病原菌对呋喃妥因、新生霉素、头孢菌素类和喹诺酮类药物敏感性较好,对大多数抗菌药物产生不同程度的耐药性,对青霉素和链霉素则完全不敏感,耐药程度接近100%。

鸡传染性支气管炎血清抗体的检测

鸡传染性支气管炎（IB）是由冠状病毒科的禽传染性支气管炎病毒（IBV）引起的急性、高度接触性传染病。在我国，邝荣禄于1972年首次报道在广东省发生鸡的IB，随后国内大部分省份都有本病发生的报道。目前流行的IB主要有吸型、肾型、肠型、腺胃型等几种类型，其特征为病鸡咳嗽、喷嚏和气管发生啰音，在雏鸡还可出现流涕，产蛋鸡产蛋减少和质量变劣，有的剖检可见肾肿大，有尿酸盐沉积。鸡传染性支气管炎可使各种年龄、

兔TLR2、TLR3和TLR4部分cDNA序列的克隆及分析

用RT-PCR技术从日本大耳白兔脾脏组织克隆出兔Toll样受体2、3、4基因(拟命名为RTLR2、RTLR3和RTLR4)的cDNA序列并进行测序,获得的3个Toll样受体基因序列长分别为128、150和139 bp,并将其测序结果与GenBank中登录的穴兔(Oryctolagus cuniculus)的Tolls核苷酸序列进行比对,发现本次克隆到的_RTLR2与穴兔TLR2的基因序列(NM_001082781)相似性为99%,而RTLR3与TLR3(NM_001082219)和RTLR4与TLR4(NM_001082732)相似性均为100%。Protein Blast同源性结果显示,_RTLR2、_RTLR3和_RTLR4的氨基酸序列与穴兔TLR2、TLR3和TLR4的同源性皆为100%,与马、人、野猪等其他8种动物TLRs的比较,与RTLR2同源性最高的是马的80%,其他的只有61%～78%;与RTLR3同源性最高是马和野猪的97%,其他也较高达93%～95%;而RTLR4与其他8种动物的同源性均较低75%以下。结果表明:RTLR2、RTLR3和RTLR4分别为兔TLR2、TLR3和TLR4的部分cDNA基因序列;TLRs在不同物种的进化过程中存在种属特异性。

E.stiedai感染兔的肝、脾和外周血单核细胞TLR-2、4mRNA表达量的变化

通过已建立的兔TLR-2、4mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,对斯氏艾美尔球虫(E.stiedai)感染后的裂殖生殖期(感染后第8天)、排卵囊初期(感染后第15天)和排卵囊高峰期(感染后第21天),兔肝、脾和外周血单核细胞TLR-2、4mRNA表达水平进行检测。结果显示,TLR-2、4的RRT-PCR产物分别在82.3、79.0℃出现单特异峰,其相关系数分别为0.994 8、0.999 6,扩增效率分别为1.05、0.99。感染E.stiedai后,兔的肝、脾TLR2mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.01),且在排卵囊初期最高;TLR4mRNA表达量在裂殖生殖期和排卵囊初期显著下调(P<0.01),而至排卵囊高峰期较对照组显著增加(P<0.01);3个阶段中兔外周血单核细胞TLR2和TLR4mRNA表达水平均显著低于对照组(P<0.01)。本研究提示TLR2和TLR4参与了兔体对E.stiedai的感染应答。