MPTP诱导慢性帕金森病恒河猴模型的初步建立

拟建立一种不仅操作简便而且能较好模拟帕金森病(Parkinsons disease,PD)临床症状和病理进程的造模方法。选取健康老龄雌性恒河猴12只,随机分为实验组9只(进而按临床症状及行为学评分又分为3个亚组)和对照组3只,以0.2mg/(kg·d)小剂量、多次重复肌内注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)来建立慢性PD恒河猴动物模型,对照组注射同等剂量的0.9%氯化钠溶液。每日于MPTP给药前后观察记录各组动物行为学表现各30min。实验结束后,全部处死动物,采用免疫组织化学法检测黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)的分布与表达变化对模型进行验证。行为学结果显示,实验组动物出现3种不同程度的临床表现,根据其轻重,将其分为3个亚组;TH免疫组织化学结果显示,阳性物质主要分布于神经元胞质和突起内,与对照组相比,实验组中的第1、第2、第3亚组阳性总面积分别减少71.90%,61.90%,45.74%,差异有统计学意义(P<0.01);α-syn免疫组织化学结果显示,阳性物质主要分布于神经突起内,其次为细胞间质,并在濒临死亡动物的黑质致密部检测到路易小体,实验各组动物黑质阳性总面积较对照组分别增加170.29%,137.82%,47.88%,差异有统计学意义(P<0.01)。上述结果表明,采用小剂量、多次重复肌内注射MPTP方式能够建立老龄恒河猴PD动物模型,该模型能够较好地模拟PD病人的临床症状和病理进程,是研究PD病因、发病机制、药物治疗及基因治疗较可靠的实验动物模型。

恒河猴幼猴出生后生长发育参数背景数据及其行为学特征

目的研究恒河猴幼猴出生后12个月的生长发育变化特征及神经行为学特征,建立生长发育参数背景参考数据。方法选取单笼条件下出生的、遗传背景清晰、出生天数明确的18只(雄性11只,雌性7只)恒河猴幼猴,于出生后第1天至360天每月进行体重、身高、头围、胸围、前肢长、后肢长、冠臀长,尾长及肛门生殖器距离等生长发育指标的测量,出生后第28、175和360天进行血液学、血液生化学和淋巴细胞亚群分析检测,出生后第208天进行手指迷路测试。结果体重呈线性增长,性别间差异无显著性(P>0.05);形态发育指标中除肛门生殖器距离雄性显著大于雌性外(P<0.01),其余指标在各检测点性别间差异均无显著性(P>0.05);血液学各指标性别间差异无显著性(P>0.05),出生后第175和360天的RBC和HGB显著高于第28天(P<0.05);与出生后第28天相比,血液生化学中TP和BUN水平在出生后第175和360天均显著升高(P<0.01),ALP虽表现为降低,但差异不显著(P>0.05);与出生后第28天相比,淋巴细胞亚群中CD4+及CD4+/CD8+比值在出生后第175和360天均显著降低(P<0.01),而CD8+比例显著升高(P<0.01);手指迷路测试中,学习期幼猴完成任务2所需测试次数显著多于其他任务,且雌性显著少于雄性(P<0.05),其余任务性别间差异无显著性(P>0.05);记忆期连续2天随机测试雌性幼猴的正确率均显著高于雄性幼猴(P<0.05)。结论体重及形态发育指标与出生天数呈线性增长,血液学、血液生化学和淋巴细胞亚群指标中RBC、HGB、LYMPH、TP、BUN、ALP、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+等出现了与幼猴器官系统生长发育相关的改变,在药物评价中应重点关注,手指迷路测试提示雌性幼猴逆转学习能力及长期记忆优于雄性幼猴。本研究建立了恒河猴幼猴出生后12个月生长发育参数的背景数据及神经行为学特征,为恒河猴生殖发育毒性评价提供了参考依据及数据支持。