一起由亚硝酸盐含量超标引起食物中毒的报告

目的了解一起由亚硝酸盐引起食物中毒的发生原因。方法对食物中毒的过程、处理原则和食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定进行调查。结果该起食物中毒是由于亚硝酸盐超标食用而引起的中毒事件。结论饭店必须强化对有毒有害物品的管理,以避免同类事件的再次发生,同时,防范外来亚硝酸盐的投放事件;医疗机构在病人接受治疗前要妥善保存食物中毒病例呕吐物、腹泻物、血样等样品对实验室的检测结果有重要意义。

PCR法检测食源性金葡菌肠毒素C基因

目的建立快速检测葡萄球菌肠毒素C基因（staphylococcal enterotoxin C，SEC）PCR方法。方法根据SEC基因的序列，设计特异性PCR引物，建立扩增体系，琼脂糖凝胶电泳检测扩增的靶基因片段。通过分析产SEC菌株和对照菌株PCR产物，评价方法的特异性；通过对产SEC金黄色葡萄球菌定量样本系列稀释后进行PCR检测，分析方法的敏感性；并运用该方法分析实验室既往检出的30株金黄色葡萄球菌SEC基因的携带情况。结果建立了金黄色葡萄球菌SEC基因PCR快速检测方法，该法PCR扩增产物长度为490bp，未见假阳性结果，特异度良好；灵敏度较高，反应体系中有32cfu的产SEC金黄色葡萄球菌即可检出；30株本地分离的金黄色葡萄球菌SEC基因携带率20％。结论PCR法可以快速、敏感地检测SEC基因，是金黄色葡萄球菌食物中毒诊断可以利用的有效工具。

蛋白质电泳非样品条带来源分析

目的:分析十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳中非样品条带的来源,并探讨其消除及控制方法。方法:在每个凝胶梳孔只加全成分上样缓冲液或缺少某些成分的试液,不加蛋白样品直接电泳,观察非样本条带出现情况,再分别对上样缓冲液中还原剂、甘油成分设置成不同浓度梯度进行电泳分析,观察条带表现。另外观察不同的上样梳预处理对条带表现的影响,明确非样品条带来源,找到去除方法。最后,进一步通过副溶血弧菌蛋白电泳结果验证非样品条带控制方法的有效性。结果:在未对上样梳进行特别处理的情况下,上样试液(全成分缓冲液或缺少某些成分的试液)中只要有还原剂和甘油就会出现非样品条带,但条带强弱与还原剂浓度、甘油含量无明显剂量关系。用8mol/L尿素处理上样梳可使非样品条带明显减弱甚至消失。结论:非样品条带源于上样梳蛋白质污染,用尿素等离液剂或强力去污剂处理上样梳可有效减少或消除非样品条带,以消除非样品条带对检验结果的影响。

5种致病性弧菌在不同NaCl浓度碱性蛋白胨水增菌液中的生长研究

目的 分析5种致病性弧菌在不同NaCl浓度碱性蛋白胨水增菌液中的生长情况,筛选共增菌的最适NaCl浓度.方法 选择副溶血性弧菌、非O1非O139群霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、拟态弧菌作为研究菌株,分别在含5,10,20和30 g/L NaCl的碱性蛋白胨水中36℃培养24 h,每隔1 h连续测定波长490 nm的吸光度值A,绘制生长曲线,分析不同NaCl浓度对5种致病性弧菌生长的影响.结果 不同NaCl浓度对5种致病性弧菌生长的影响不同.副溶血性弧菌、溶藻弧菌、非O1非O139群霍乱弧菌的增殖能力优于创伤弧菌、拟态弧菌.NaCl浓度升高,溶藻弧菌的迟缓期不变,而其余4株致病性弧菌的迟缓期都出现不同程度的延长;NaCl浓度升高,副溶血性弧菌的增殖能力不受影响,溶藻弧菌的增殖能力出现增强趋势,10,20和30 g/L的NaCl浓度更有利于生长,而其余3株致病性弧菌的增殖能力出现减弱的趋势,5和10 g/L的NaCl浓度更有利于生长.结论 10 g/L为最适NaCl浓度,含10 g/L NaCl的碱性蛋白胨水增菌液可以满足同时检测5种致病性弧菌的增菌需要.

深圳市福田区寿司店鱼生制品卫生状况分析

目的了解深圳市福田区寿司店鱼生制品卫生状况。方法对福田区寿司店的鱼生制品进行随机抽样,采用GB/T4789.1-2003《食品卫生微生物学检验》检测样品的感观、菌落总数、大肠菌群、沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌。结果共抽检鱼生制品45份,合格25份,合格率为55.6%;不合格的20份样品中,菌落总数超标8份,大肠菌群超标1份,菌落总数与大肠菌群均超标为9份,检出金黄色葡萄球菌2份。结论深圳市福田区寿司店鱼生制品卫生状况不容忽视,需要增强相关经营者的卫生质量意识,确保加工过程的卫生安全。

深圳市福田区一起急性胃肠炎聚集性病例的分子流行病学调查

为调查2021年深圳市某幼儿园一起急性胃肠炎聚集性病例的病原,分析病例的分子流行病学特征。采集该幼儿园有症状10名患儿中8名患儿的肛拭子,同时采集厨师肛拭子10份,参照《感染性腹泻诊断标准》(WS 271—2007)检测诺如病毒、札如病毒、肠道腺病毒、轮状病毒核酸,逆转录RT-PCR法对病毒衣壳区序列进行扩增并对PCR产物进行序列测定。序列用Clustalx软件进行多重比对,采用Mega 6.06软件绘制系统进化树。结果显示,8份患儿样本中检出5份札如病毒核酸阳性样本,10份厨师样本检测结果均为阴性,对5份阳性样本核衣壳区测定,只有3份强阳性样本得到测序结果,该序列属于GII.3型遗传分支,与参考序列AY603425同源性为92.43%,与序列MH018131同源性为97.74%。提示此次胃肠炎病例可能由GII.3型札如病毒引起。

71株食源性致病菌耐药性分析

目的:通过对71株食源性致病菌耐药性检测,为预防食源性疾病及指导临床合理用药提供依据。方法:采用肉汤稀释法,利用(先德)ARIS2X微生物鉴定药敏分析系统及其配套药敏板测定MIC值。结果:71株食源性致病菌中食物中毒样品中分出48株,耐药率为100.0%;食品监测中分离21株,耐药率为85.7%;消毒效果监测中分离2株,耐药率为50.0%。副溶血弧对替卡西林耐药率为86.8%,金黄色葡萄球菌中对青霉素耐药率为73.9%,有5株金黄色葡萄球菌同时对9种抗生素耐药。结论:加强食品卫生的监督管理,控制抗生素添加剂的使用,防止耐药菌株的传播和扩散,以确保食品安全,预防食源性疾病的发生。

HIV感染者免疫状态及其与淋巴细胞周期变化关系探讨

目的研究HIV感染不同阶段感染者与正常人免疫状态及淋巴细胞周期变化。方法利用流式细胞仪对正常人及HIV感染者CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞绝对数、CD4+/CD8+比值及淋巴细胞周期进行检测。结果HIV感染者CD4+T淋巴细胞数及CD4+/CD8+比值进行性减少,CD8+T淋巴细胞数在感染早期明显增加,在感染后期增加减弱;淋巴细胞周期在HIV感染者CD4+T淋巴细胞数正常范围内时受促进;当感染者CD4+T淋巴细胞数低于正常值范围时,淋巴细胞周期各期比例与健康对照组无差异。结论HIV感染后机体免疫功能及淋巴细胞周期随疾病进程发生异常变化,且淋巴细胞周期变化与CD8+T淋巴细胞数变化趋势基本一致,提示细胞周期变化在CD8+T淋巴细胞数变化过程中可能起重要作用。

H7N9流感病毒在4种细胞中培养情况的研究

目的了解H7N9流感病毒在不同细胞中增殖的感染动力学差异。方法将H7N9流感病毒分别接种于鸡成纤维细胞(DF-1)、狗肾细胞(MDCK)、人支气管上皮细胞(BEAS-2B)、人肺腺癌细胞(A549),观察病毒在各细胞内增殖后细胞病变效应(CPE)、血凝实验滴度及50%组织培养细胞感染剂量。结果 H7N9流感病毒在A549细胞中培养36 h可达到血凝效价最高,同时可见明显CPE,在DF-1及MDCK细胞中培养72 h后血凝效价达到最高;在BEAS-2B细胞中增殖不明显,培养液对豚鼠血无明显凝集,且培养超过96 h尚无明显CPE。DF-1细胞、MDCK细胞、A549细胞对病毒的TCID50实验结果分别为10^(-4.34)、10^(-5.13)、10^(-3.84)。结论本实验使用的H7N9流感病毒不能有效感染BEAS-2B细胞并在其中增殖,但是可以在DF-1、MDCK及A549细胞中有效增殖。增殖能力以MDCK细胞最强,DF-1细胞略弱,A549细胞次之。A549细胞对病毒的吸附能力较强,可快速达到增殖的高峰。

两种快速检验流感病毒的方法比较

目的:比较胶体金法和斑点酶免疫渗滤优缺点。方法:将4种亚型流感病毒培养液稀释后,用胶体金和斑点酶免疫渗滤两种方法同时进行快速检验。结果:胶体金法操作更简便快速,而斑点酶免疫渗滤法敏度更高。结论:在临床诊断中,斑点酶免疫渗滤更为实用有效,在样品量较大或现场处理样品时,用金标法进行筛检更方便。

2D-DIGE蛋白质组技术的探讨及其在微生物研究中的应用

目的:探讨双向差异凝胶电泳(two dimension difference gel electrophoresis,2D-DIGE)的实验方法,分析比较其优缺点,概述其在微生物研究中的应用。方法:以两株不同血清型的副溶血性弧菌为样本,通过2D-DIGE实验,得到两组蛋白质荧光染色分布图,与银染的效果比较。结果:直观的看到两株细菌的蛋白质差异,且可分析样品丰度变化。结论:该方法有一定的局限性,但却是研究蛋白质组丰度变化的强有力工具。

EVaGreen实时荧光PCR法检测人类双埃可病毒

目的:构建实时荧光PCR法以测定人类双埃可病毒RNA。方法:通过相关资料自行设计合成人类双埃可病毒引物,将病毒RNA进行反转录之后,进行基于EVaGreen染料的实时荧光定量(Real-time)PCR扩增,通过高分辨率溶解曲线、核酸电泳及产物测序验证PCR结果。结果:对该病毒保守区约260BP片段扩增成功,测序证实为人双埃可病毒序列,建立了该病毒EVaGreen实时荧光PCR检测方法。结论:为人类双埃可病毒的检测提供了一种快速简便的方法。

2013年深圳市儿童病毒性腹泻中主要病毒的检测与研究

目的了解深圳市儿童病毒性腹泻的季节分布及流行病学特点,为制定防治对策提供依据。方法从5岁以下腹泻儿童粪便标本中选取已排除细菌感染的标本,用RQ-PCR检测人双埃可病毒、轮状病毒A组、诺如病毒、肠道腺病毒及星状病毒,对检测结果进行分析。结果 120份标本中病毒的阳性率为39.2%,其中人双埃可病毒的阳性率为12.5%,A组轮状病毒的阳性率为14.2%,诺如病毒的阳性率为15.8%。夏季是人双埃可病毒的感染高峰,秋、冬季是轮状病毒及诺如病毒的感染高峰,A组轮状病毒发病人群都集中在2岁以下低年龄段儿童,双埃可病毒及诺如病毒在5岁以下儿童中普遍易感。结论除轮状病毒及诺如病毒外,双埃可病毒在儿童腹泻中也占有较大比例,需要引起重视。

副溶血性弧菌蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的:建立副溶血性弧菌蛋白质分离的双向电泳技术。方法:分析比较两种不同的副溶血性弧菌蛋白制备方法,样品纯化后,选择不同pH范围IPG胶条,双向电泳,蓝银染色,比较图片。结果:超声裂解法效果较好且操作简便快速,提取出来的蛋白质经过纯化处理后再进行双向电泳效果较好,该细菌蛋白质点主要集中在pH4.5～5.5之间,还有部分分布在pH6～7之间。结论:建立了副溶血性弧菌蛋白质双向凝胶电泳技术,为后续研究奠定了基础。

深圳市福田区2006～2007年麻疹疑似病例血清学检测分析

目的了解麻疹流行特点,加速麻疹控制,完善今后麻疹监测工作。方法对2006～2007年福田区麻疹疑似病例进行血清学检测分析。结果2007年麻疹发病率较2006年呈上升趋势,青壮年(16～35岁)是成人麻疹高发人群。样品采集时间对检测结果有影响,出疹后1d内采血样品阳性率最低。结论麻疹发病率有上升趋势,5岁及以下儿童及青壮年是麻疹防控重点人群。麻疹血样注意避免出疹后1d内采集。

副溶血性弧菌临床分离株血清型、毒力基因和PFGE分子分型特征分析

目的分析从2007-2012年腹泻病例标本中分离的168株副溶血性弧菌血清型分布、毒力基因携带情况和PFGE分子分型特征。方法采用血清学凝集实验,检测菌株的血清型别;采用实时荧光PCR方法,检测耐热性溶血毒素基因(tdh)和耐热性溶血毒素相关溶血毒素基因(trh);采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE),分析56株O3∶K6型副溶血性弧菌的基因分型特征。结果 (1)168株菌可分为14种血清型,主要血清型为O3∶K6(114,67.9%)、O4∶K8(25,14.9%)、O3∶K29(6,3.6%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株血清型构成不同,但优势血清型均为03∶K6。(2)168株菌可分为4种毒力基因类型,分别为tdh+trh-(161,95.8%)、tdh+trh+(3,1.8%)、tdh-trh+(1,0.6%)、tdh-trh-(3,1.8%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株毒力基因类型构成不同,但优势毒力基因类型均为tdh+trh-。(3)56株O3∶K6型副溶血性弧菌共有15种PFGE带型(P1～P15),相似度>86%,有10个带型分别有多株菌处于同一聚类(P1～P4、P6、P7、P9、P10、P12、P15)。结论副溶血性弧菌临床分离株以tdh+trh-的O3∶K6为主;O3∶K6型副溶血性弧菌临床分离株的PFGE条带型相似性度高,菌株间亲缘关系较近。

深圳市福田区2009-2011年流感监测结果分析

目的对深圳市福田区2009-2011年流感监测结果进行分析,了解流感的流行趋势,为流感防治提供科学依据。方法采集2009-2011年监测点流感样病例(ILI)或流感局部暴发病人的咽拭子样本,以狗肾传代细胞(MDCK)分离流感病毒并进行型别鉴定。结果 2009-2011年监测点采集流感样病例咽拭子样本1 035份,经病毒分离和鉴定确认的流感病毒330株,分离率31.88%。2009年共分离到流感病毒202株,分离率42.00%;2010年共分离到流感病毒89株,分离率32.48%;2011年共分离到流感病毒39株,分离率13.93%。3年暴发疫情累计发病例数1 684例,分离培养流感病毒552株,分离率32.78%。15～岁年龄组的流感病毒分离率高达52.78%。结论流感病毒分离阳性率逐年下降,流感活动强度逐渐降低,加强流感病毒监测,有效控制流感疫情。

流行性脑脊髓膜炎病例的病原学分析

目的分析2008年2月深圳市发现的流行性脑脊髓膜炎病例进行病原学研究资料,为流行性脑脊髓膜炎的诊治及控制提供科学依据。方法参照GB16884-1997《流行性脑脊髓膜炎诊断标准和处理原则》的方法,进行常规分离培养、APINH生化鉴定卡鉴定、血清学凝集试验、乳胶凝集试验、实时荧光PCR试验,同时对菌株进行药敏试验。结果经实验研究证实,临床收集疑似流行性脑脊髓膜炎病例为B群脑膜炎奈瑟氏菌引起的流行性脑脊髓膜炎病例,菌株对头孢噻肟、头孢曲松、美罗培南、阿齐霉素、咪诺环素、氯霉素、利福平、氨苄西林、青霉素敏感,对环丙沙星、甲氧苄啶/磺胺甲唑耐药。结论B群脑膜炎奈瑟氏菌引起的流行性脑脊髓膜炎病例少见,提示应加强流脑的病原学监测和脑膜炎奈瑟氏菌的耐药性监测。

流感病毒在MDCK细胞上的培养条件优化

目的探索流感病毒在MDCK细胞中培养的最适条件。方法将流感病毒分别以直接接种法和吸附接种法接种于MDCK细胞,比较其接种效果;选择其中更合理的方法,对其培养条件(培养时间、血清浓度、胰酶浓度、接种量和传代次数)进行比较和优化。结果直接接种法相对于吸附接种法更具优势。最佳收获病毒时间为72 h;胎牛血清对病毒的增殖有明显抑制作用;终浓度为2.5μg/ml的胰酶可明显提高细胞增殖病毒的血凝效价。结论通过对MDCK细胞培养流感病毒条件的优化,可以明显提高流感病毒培养效率。