免疫鸡群H5N1和H9N2亚型禽流感病毒混合感染及H9N2亚型病毒进化分析

本研究分析了免疫鸡群H5N1和H9N2亚型禽流感病毒混合感染中H9N2亚型分离毒株A/chicken/Yuyao/01/2010(H9N2)的基因组特征。氨基酸序列分析显示,HA蛋白裂解位点为PSRSSR/GL,具有低致病性禽流感病毒特征,HA受体结合位点出现了人流感病毒结合位点226L,D基因出现了S31N的突变。遗传分析表明,A/chicken/Yuyao/01/2010病毒的HA基因、NA基因和NS基因在进化上属于CK/BJ/94-Like谱系,D基因和PB2基因属于G1-Like谱系,NP基因、PA基因和PB1基因属于Ck/SH/F/98-Like谱系。结果表明,从H5N1和H9N2亚型混合感染鸡体内分离的H9N2亚型禽流感病毒是一株来源于CK/BJ/94-Like谱系、G1-Like谱系和Ck/SH/F/98-Like谱系的重组病毒。

免疫鸡群中分离的H9N2亚型禽流感病毒的分子特征研究

为研究浙江省禽流感病毒(AIV)的流行病学情况,本实验应用鸡胚传代方法从AIV疫苗免疫鸡群中表现典型呼吸症状的产蛋鸡体内分离1株H9N2亚型AIV A/Chicken/Jiande/01/2009(H9N2)。氨基酸序列分析显示,HA受体结合位点出现了人流感病毒结合位点226L,M基因出现S31N的突变。遗传进化分析显示,A/Chicken/Jiande/01/2009的M基因和PB2基因属于G1-Like谱系,HA基因、NA基因和NS基因属于Ck/BJ/1/94-Like分支,而NP基因、PA基因和PB1基因属于Ck/SH/F/98-Like谱系。这些资料表明,A/Chicken/Jiande/01/2009(H9N2)为一株重排病毒。

载药聚乳酸支架制备及其用于抑制肌腱粘连的可行性研究

通过静电纺丝技术得到的微纳米纤维可以模拟天然细胞外基质(ECM),因而常用作生物医学支架。本文利用实验室自组装的动态水浴涡流加捻装置,通过静电纺丝技术,一步制备了负载油性药物布洛芬,且同时具备纳米和微米孔隙结构的聚乳酸(PLLA)支架。纺丝过程中在纤维上一步形成纳米多孔,有助于药物负载和缓释。对支架的形态以及抑制肌腱粘连的可行性进行了测试,结果表明:纳米纤维的取向度高,载布洛芬的基于纳米纤维束集合体的组织工程支架能够抑制小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)的生长和增殖,在抑制肌腱粘连领域有一定应用潜力。

聚己内酯多通道神经导管的制备及表征

神经导管(nerve guidance conduit,NGC)的通道数越多则越有利于神经再生,但受到技术和成本的限制,目前的多通道神经导管一般少于10个通道。为了制备通道数较多的NGC,采用边长10 cm的立方体铁架、直径0.15 mm的水溶性维纶纱线和直径3 mm的塑料空心管搭建一种牺牲模板,并结合冷冻干燥法制备直径为(2.70±0.30)mm、NGC长度大于2 cm、通道数约20个、内通道直径为(0.13±0.03)mm且通道之间存在孔结构的聚己内酯(polycaprolactone,PCL)多通道神经导管。对制备的多通道神经导管进行体外理化性能表征和体外细胞毒性检测表征,结果表明,制备的多通道神经导管能促进细胞的生长和增殖,具有较好的细胞相容性。

H1亚型猪流感病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及其在浙江省的应用

利用RT-PCR扩增了猪流感病毒分离株A/Swine/Zhejiang/103/2002(H1N1)HA1基因,并将其克隆至pFastBacHTA杆状病毒转移载体。将筛选的阳性重组转移载体pFastBacHTA-HA1转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,构建重组转座子rBacmid-HA1。之后转染Sf9昆虫细胞制备rBV-HA1重组杆状病毒。SDS-PAGE分析显示,重组表达的HA1蛋白的分子质量约为45ku。Westernblot结果显示,该HA1蛋白能与H1亚型猪流感阳性血清特异性结合,具有良好的抗原活性。利用镍柱纯化后的HA1蛋白作为包被抗原,建立了H1亚型猪流感病毒抗体间接ELISA检测方法,通过对各种条件进行优化,确定了最佳反应体系。该方法与多种猪病毒阳性血清无交叉反应性,与HI方法的符合率为92.4%,与IDEXX进口试剂盒的符合率为94.6%。用该方法对2014年从浙江省规模化猪场采集的猪血清进行检测,阳性率为17.4%(589/3 379)。该方法的建立为浙江省猪流感的监测及防控提供了重要检测工具。