基于分子对接的三角帆蚌酪氨酸酶抑制肽筛选及活性评价

【目的】筛选和鉴定三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)珍珠层蛋白酶解产物中的酪氨酸酶抑制肽,为美白肽的研究与开发提供依据。【方法】以三角帆蚌珍珠层粉为原料,基于其蛋白组成特性,采用物理改性和可控酶解技术制备珍珠层活性肽(Peptides from nacre powder,P-NP),通过测定其2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和1,1-二苯基-2-苦基肼自由基(DPPH)的清除能力、酪氨酸酶抑制活性以及对紫外线B(UVB)辐照损伤人永生化角质形成细胞(HaCaT)的影响,探究其体外活性。采用液质联用技术(LC-MS/MS)和分子对接技术从P-NP中鉴定并筛选出三角帆蚌酪氨酸酶抑制肽,并进行固相合成和体外活性验证。【结果】P-NP的ABTS和DPPH自由基清除效果较佳,肽质量浓度为1.00、14.00 mg/mL时,两者清除率分别为41.58%和11.23%;P-NP的酪氨酸酶活性抑制能力良好,其半抑制浓度(IC_(50))值为7.51 mg/mL。P-NP质量浓度在83.22μg/mL时,显著提高UVB损伤HaCaT细胞的生长活力(P<0.05)。P-NP经LC-MS/MS鉴定后筛选出相对分子质量集中在500~1000的61条肽序列作为候选肽库,分子对接筛选出3条潜在的酪氨酸酶抑制肽,其主要通过氢键与酪氨酸酶活性中心及其以外的位点相结合,从而达到抑制其活性的作用。其中,Tyr-Pro-Asn-Pro-Tyr(YPNPY)对酪氨酸酶抑制作用最强,IC_(50)为(0.545±0.028)mmol/L,主要抑制类型为竞争型抑制。【结论】三角帆蚌珍珠层活性肽具有良好的清除自由基和酪氨酸酶抑制活性。

不同方法提取方格星虫胶原蛋白及其酶解物对HaCaT细胞的影响

以方格星虫(Sipunculus nudus)体壁为原料,分别采用酸法、酶法和热水法提取胶原蛋白并对其理化性质进行分析;通过检测氨基酸组成、紫外光谱、傅里叶红外光谱、SEM扫描电镜分析比较了3种胶原蛋白的特性,并采用HaCaT细胞,探讨3种酶解产物对其生长活力的影响。结果表明,热水法提取胶原蛋白的提取得率高于其他两种方法,3种胶原蛋白均含有胶原特征型氨基酸甘氨酸Gly、脯氨酸Pro和羟脯氨酸Hyp。紫外和红外光谱图显示,3种胶原蛋白均在222 nm附近有明显的吸收峰,且存在酰胺A、酰胺B的吸收峰和酰胺Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的特征峰,提示3种胶原蛋白均属于Ⅰ型胶原蛋白,具有三股螺旋结构。而扫描电镜结果显示,相比于酶法和热水法,酸法提取的胶原蛋白三股螺旋结构保持更为完整,且较好地维持胶原纤维的原有结构。3种胶原蛋白酶解肽在50~100μg/mL时,能够显著提高正常和UVB损伤的HaCaT细胞活力,表明方格星虫胶原蛋白的酶解产物在皮肤光老化修复方面具有较好的潜在应用前景。