适用于Nimble Cloning系统的pCambia载体改造

为了适用于NimbleCloning这种新型的DNA分子克隆技术,本研究以pCambia1304载体作为改造对象,采用突变碱基的方式去除载体中的5个SfiI酶切位点,并且对改造后的载体在农杆菌中的稳定性以及在植物中的表达进行分析,结果表明5个SfiI位点突变对载体的稳定性和表达没有影响。本研究为NimbleCloning系统提供了配套载体,也为其他pCambia系列载体改造成NimbleCloning系统载体提供了模板和参考。

基于Nimble Cloning的新型植物BiFC载体的构建和应用

Nimble Cloning是一项新型的分子克隆技术,具有操作简单、使用灵活、克隆效率高、标准化克隆等优点,但Nimble Cloning需要使用配套的表达载体。本研究将pDOE系列的4个整合型BiFC载体上的SfiI位点去除,然后在这4个载体的多克隆位点处插入NC克隆框,构建了一套适用于Nimble Cloning的新型植物BiFC表达载体,命名为pNC-BiFC-VD系列载体。将pNC-BiFC-VD载体应用到植物蛋白互作研究中,分析了番木瓜eIFiso4E和病毒PRSV的vpg蛋白之间的互作,结果表明番木瓜eIFiso4E和PRSV-vpg在细胞核发生互作。该套新型植物BiFC表达载体有望在植物蛋白互作研究中得到广泛应用。