罗非鱼源无乳链球菌兼职蛋白EF-Tu的克隆、表达及其抗原性检测

为检测罗非鱼源无乳链球菌兼职蛋白EF-Tu(延伸因子Tu,Elongation Factor Tu)的抗原性,本实验克隆了罗非鱼源无乳链球菌HN0303的EF-Tu基因序列,并进行了蛋白相关性质的预测和系统发育树的构建。通过原核表达得到EF-Tu重组蛋白,同时利用纯化的蛋白免疫家兔获得多克隆兔抗EF-Tu重组蛋白血清以用于EF-Tu蛋白抗原性检测。结果显示,罗非鱼源无乳链球菌HN0303 EF-Tu基因有1个由1197个碱基组成的ORF,编码398个氨基酸。生物信息学分析显示其分子式为C_(1933)H_(3096)N_(532)O_(615)S_(11),分子质量为43.981 ku,理论等电点为4.749;具有多个磷酸化位点,不具有信号肽和跨膜区域;具有保守的EFTu结构域、EF-Tu-II结构域和EF-Tu-Ⅲ结构域,且与其他来源无乳链球菌的EF-Tu蛋白具有很高的同源性;具有较高的抗原指数,表明其可形成多个抗原表位。SDS-PAGE检测发现,诱导表达的重组蛋白以包涵体的形式出现在沉淀中,大小约为66.4 ku。Western Blot分析表明,兔抗EF-Tu重组蛋白血清能分别特异性结合菌体蛋白和EF-Tu重组蛋白。同时使用兔抗EF-Tu重组蛋白血清封闭罗非鱼源无乳链球菌HN0303表面的EF-Tu蛋白后,无乳链球菌HN0303粘附EPC(Epithelioma papulosum cyprini,鲤鱼上皮细胞)的能力下降了79.99%±2.43%。本研究表明,原核表达的罗非鱼源无乳链球菌EF-Tu重组蛋白具备较好的抗原性,用其制备的兔抗血清能够较好地抑制罗非鱼源无乳链球菌的粘附,推测其可能为罗非鱼源无乳链球菌亚单位疫苗的候选蛋白。

蛙病毒感染黑斑蛙蝌蚪的诊断与防治

黑斑蛙（Rana nigromaculata）俗称＂青蛙＂、＂田鸡＂,隶属无尾目、蛙科、蛙属。其肉质细嫩,味道鲜美,营养丰富;口感和营养优于鱼肉和猪、牛、羊肉。另外,蛙肉是一种高蛋白质、低脂肪、低胆固醇的食品。因此,蛙类已成为我国具有重要经济价值的养殖动物。随着繁殖技术的成熟，目前在我国已有19个省对黑斑蛙开展养殖。2013年6月上旬，四川绵阳某两栖动物养殖场黑斑蛙蝌蚪暴发一种传染性疾病，发病死亡率高达100％，给养殖户带来巨大经济损失。

鱼类出血性疾病的分析与防控关键技术

鱼类出血性疾病是我国淡水池塘鱼类养殖中危害种类最多、流行地区最广、发病率最高、经济损失最大的一类疾病。鱼类出血病是指由致病因子引起的以出血为特征的一类鱼病,致病因子一般包括细菌、病毒、寄生虫、应激和药物中毒等多种因素。

109株草鱼源维氏气单胞菌的耐药性分析

本实验采用琼脂扩散法,比较分析了109株草鱼源维氏气单胞菌对25种抗生素的耐药情况。结果表明,89%以上的维氏气单胞菌分离株对青霉素和新生霉素产生高度耐药,70%以上的菌株对麦迪霉素、吉他霉素和克拉霉素不敏感,而菌株对强力霉素、诺氟沙星和链霉素敏感性较好,超过80%以上的菌株对氟苯尼考、阿齐霉素、环丙沙星和甲砜霉素表现敏感或高度敏感。

加州鲈源维氏气单胞菌的分离、鉴定及致病性

对引起四川省某水库网箱养殖的加州鲈发生以体表出血、皮肤溃疡、肝肾出血和肿大为典型症状的疾病进行病原菌的分离、鉴定和致病性研究。从患病加州鲈病变组织分离纯化得到1株病原菌(LB140811),对其进行了形态特征、理化特性等表型生物学检验和回归试验,并通过16SrDNA和gyrB基因测序与系统发育分析,以及毒力基因act和aerA的PCR扩增进行分离株的分子生物学鉴定,同时开展了病原菌的致病性和药物敏感性研究。根据该病原菌的表型、分子生物学特性和进化关系,判定其为气单胞菌属的维氏气单胞菌,且回归试验证实该菌株LB140811为此次加州鲈发病的病原菌。组织病理学观察发现,该病原菌对加州鲈的多个组织器官都造成了明显的病理损伤,尤其是肝、肾、肌肉的损伤较为严重,表现为明显的变性、坏死以及炎性细胞浸润。药敏试验结果表明,18种抗菌药物中,该病原菌仅对阿奇霉素敏感,对氨苄西林、氧氟沙星等14种药物耐药。